3第3章免疫原和抗血清的制備多媒體(編輯修改稿)
2025-02-04 19:19 本頁面
【文章內容簡介】 段、 Fc段和輕鏈等作為免疫原制備抗血清，能制得分辨能力更高的特異性抗體，制備方法如下： 免疫球蛋白片段的制備： 非共價鍵解離法－改變 pH 、利用強變性劑 共價鍵解離法－氧化法和還原法 溴化氰裂解法 酶解法－木瓜酶 、胃蛋白酶 酶裂解法 ? 酶對免疫球蛋白的水解有極好的專一性。 ? 如木瓜蛋白酶可將 IgG裂解成一個 Fc和兩個Fab片段；胃蛋白酶可將水解成 F（ ab’）2和數(shù)個小片段；胰蛋白酶將 IgG切成不規(guī)則肽鏈。 ? 用木瓜酶水解得到的 Fc段作為抗原制備重鏈血清，胃蛋白酶水解抗體試劑用。 （三）純化抗原的鑒定 蛋白含量測定： 紫外吸收法、雙縮脲法、酚試劑法 分子量測定： SDSPAGE、凝膠過濾 純度鑒定： 醋酸纖維膜電泳、 SDSPAGE、毛細管電泳、等電聚焦、高效液相層析 免疫活性鑒定： 雙向免疫擴散、免疫電泳、 ELISA ? 制備人工抗原時，最常用于偶聯(lián)半抗原的載體是 ? A 牛血清白蛋白 B牛甲狀腺球球蛋白 ? C 人血清白蛋白 D 人甲狀腺球蛋白 ? E 兔血清白蛋白 第二節(jié) 免疫佐劑 免疫佐劑 ： 那些與抗原一起或先于抗原注入機體后，可增強機體對該抗原的免疫應答或改變免疫應答的類型的物質稱為免疫佐劑 ,簡稱佐劑 . 非免疫原性的佐劑 :氫氧化鋁、磷酸鋁、磷酸鈣、石蠟油、羊毛脂、表面活性劑、藻酸鈣、人工合成的多聚肌苷酸和胞壁肽。 具有免疫原性的佐劑 :如卡介苗、枯草分支桿菌、短小棒狀桿菌、百日咳桿菌、革蘭氏陰性桿菌內毒素（脂多糖）和細胞因子。 用于人體的佐劑： 氫氧化鋁、明礬、 poly I∶C 、胞壁酰二肽、細胞因子、熱休克蛋白 常用于動物實驗的佐劑： 弗氏佐劑 (Freund’ s adjuvant) 一、佐劑的種類 弗氏佐劑 (Freund,s adjuvant)： 弗氏完全佐劑－羊毛脂與液體石蠟的混合物 弗氏不完全佐劑－弗氏完全佐劑加卡介苗 乳化方法： 研磨法和攪拌混合法 ? 細胞因子佐劑與抗原合用，可以更有效激發(fā)機體免疫功能，增強免疫反應。 ? 白細胞介素 2（ IL－ 2）、 IL－ 干擾素、粒細胞－巨噬細胞集落刺激因子（ CSF， GM－ CSF）具有佐劑作用。 ? 抗寄生蟲或腫瘤疫苗研究應用中，在細胞因子佐劑輔助下，刺激機體產生具保護作用的細胞免疫。 一、佐劑的種類 ? 增強免疫原性 使弱免疫原性物質變成持久或強的免疫原。 ? 增加抗體的滴度 提高機體初次和再次免疫應答的抗體滴度。 ? 引起或增強遲發(fā)性超敏反應 由于佐劑作用引起過強的免疫應答導致病理生理反應 。 二、佐劑的免疫生物學作用 改變抗原物理性狀，延緩其降解和排除，更有效刺激免疫系統(tǒng)。 刺激單核 吞噬細胞系統(tǒng)，增強其處理和提呈抗原的能力。 刺激淋巴細胞增殖和分化。 三、佐劑的作用機制 第三節(jié) 抗血清的制備 抗血清的制備是將制備好的免疫原按照一定的免疫程序接種給所選擇的動物，該動物在含有多種抗原表位的抗原刺激下，體內多個 B細胞克隆被激活并產生針對某一抗原多種不同表位的抗體，其混合物為多克隆抗體 多克隆抗體的產生示意圖 多克隆抗體 (polyclonal antibody,pcAb)： 天然抗原刺激多種 B淋巴細胞克隆產生的多種抗體的混合物 抗原來源與動物種屬的關系 種屬差異越遠，免疫原性越強 動物個體的選擇 適齡、健康、體重符合要求 抗原的性質 IgE對綿羊，胰島素對家兔免疫后不易出現(xiàn)抗體 一、免疫動物的選擇 免疫原的劑量 中間劑量范圍內，免疫原劑量增加可獲得高效價抗體 免疫間隔時間 第一次和第二次間隔 10～ 20天，三次及以后間隔 7～ 10天 免疫途徑 皮內、皮下、肌肉、靜脈、腹腔、淋巴結 二、免疫方法和途徑 ? 抗體產生的階段： ? 靜止期（ 2天）血液中無抗體，僅有抗原。 ? 指數(shù)期（ 4天）動物體內抗體水平上升，抗體含量 6～ 7天達高峰
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