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3第3章免疫原和抗血清的制備多媒體(更新版)

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【正文】 :0105:05:0105:05Sunday, February 5, 2023 ? 1知人者智,自知者明。 2023年 2月 5日星期日 上午 5時 5分 1秒 05:05: ? 1楚塞三湘接,荊門九派通。 2023年 2月 上午 5時 5分 :05February 5, 2023 ? 1行動出成果,工作出財富。 ? 靜夜四無鄰,荒居舊業(yè)貧。 ? 免疫原不純,含有微量的雜抗原,制備出的抗血清出現(xiàn) 2- 3種雜抗體。 刺激淋巴細胞增殖和分化。 用于人體的佐劑: 氫氧化鋁、明礬、 poly I∶C 、胞壁酰二肽、細胞因子、熱休克蛋白 常用于動物實驗的佐劑: 弗氏佐劑 (Freund’ s adjuvant) 一、佐劑的種類 弗氏佐劑 (Freund,s adjuvant): 弗氏完全佐劑-羊毛脂與液體石蠟的混合物 弗氏不完全佐劑-弗氏完全佐劑加卡介苗 乳化方法: 研磨法和攪拌混合法 ? 細胞因子佐劑與抗原合用,可以更有效激發(fā)機體免疫功能,增強免疫反應。 親和層析 ? 抗原或抗體與支持物的結合 ? 將抗原或抗體結合到支持物上的方法達數(shù)十種,可歸納為載體結合法、物理吸附法、交聯(lián)法和網絡法。 ? 具有離子交換集團的纖維素。 ? 核酸去除法:可采用氯化錳、硫酸魚精蛋白等核酸提取沉淀劑,而核糖核酸降解法更簡單(采用 DNA或 RNA酶) ? 有機溶劑沉淀法:使用的有機溶劑多為乙醇或丙酮。常用于處理微生物和組織的細胞。 ? 這些蛋白質多為復雜的蛋白組成,免疫前需進行純化。 第三章 免疫原和抗血清的制備 第一節(jié) 免疫原的制備 一、顆粒性抗原的制備 二、可溶性抗原的制備和純化 三、半抗原性免疫原的制備 第二節(jié) 免疫佐劑 一、佐劑的種類 二、佐劑的作用機制 第三節(jié) 抗血清的制備 一、免疫動物的選擇 二、免疫程序 三、動物采血法 第四節(jié) 抗血清的鑒定和保存 一、抗血清的鑒定 二、抗血清的保存 第五節(jié) 抗血清的純化 一、特異性 IgG抗體 二、單價特異性抗血清 思考題 小結 ? 基本要求: ? 掌握:免疫原、抗血清的制備過程。 ? 蛋白質、糖蛋白、細菌毒素、酶、補體和核酸都是良好的可溶性抗原。 ? 超聲破碎法:利用超聲波機械振動的原理使細胞破碎。 選擇性沉淀法: 核酸去除法-氯化錳、硫酸魚精蛋白、鏈霉素 鹽析法-硫酸銨、硫酸鈉 有機溶劑沉淀法-乙醇、丙酮 聚合物沉淀法-聚乙二醇 選擇沉淀法 ? 采用各種沉淀劑或某些條件促使抗原成分沉淀的方法。 離子交換層析 ? 離子交換層析是利用一些帶電離子集團的凝膠或纖維素,吸附帶有相反電荷的蛋白質抗原。 最常用的支持物是 Separose4B(瓊脂糖珠) (2)配體的選擇 條件: ①抗原或抗體必須單一特異性; ②抗原與抗體必須具有較高的親和力; ③配體必須有一個適當?shù)幕瘜W基團。 具有免疫原性的佐劑 :如卡介苗、枯草分支桿菌、短小棒狀桿菌、百日咳桿菌、革蘭氏陰性桿菌內毒素(脂多糖)和細胞因子。 刺激單核 吞噬細胞系統(tǒng),增強其處理和提呈抗原的能力。 鹽析法: 硫酸銨鹽析法、硫酸鈉鹽析法 凝膠過濾法: 常結合鹽析法 離子交換層析法: DEAE纖維素、 QAEsephadex、 QAE纖維素 親和層析法: 純化抗原或 SPA交聯(lián) Sepharose 4B制成親和層析柱 一、特異性 IgG抗體 單價特異性抗血清 ? 血清只與其特異性抗原發(fā)生反應。 特異性 IgG抗體的純化方法有鹽析法、凝膠過濾法、離子交換層析法、親和層析法等;制備單價特異性抗血清可采用親和層析法和吸附劑方法。 。 :05:0105:05:01February 5, 2023 ? 1意志堅強的人能把世界放在手中像泥塊一樣任意揉捏。 :05:0105:05Feb235Feb23 ? 1越是無能的人,越喜歡挑剔別
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