【正文】 :05:0105:05Feb235Feb23 ? 1越是無(wú)能的人，越喜歡挑剔別人的錯(cuò)兒。 。 鹽析法： 硫酸銨鹽析法、硫酸鈉鹽析法 凝膠過(guò)濾法： 常結(jié)合鹽析法 離子交換層析法： DEAE纖維素、 QAEsephadex、 QAE纖維素 親和層析法： 純化抗原或 SPA交聯(lián) Sepharose 4B制成親和層析柱 一、特異性 IgG抗體 單價(jià)特異性抗血清 ? 血清只與其特異性抗原發(fā)生反應(yīng)。 具有免疫原性的佐劑 :如卡介苗、枯草分支桿菌、短小棒狀桿菌、百日咳桿菌、革蘭氏陰性桿菌內(nèi)毒素（脂多糖）和細(xì)胞因子。 離子交換層析 ? 離子交換層析是利用一些帶電離子集團(tuán)的凝膠或纖維素，吸附帶有相反電荷的蛋白質(zhì)抗原。 ? 超聲破碎法：利用超聲波機(jī)械振動(dòng)的原理使細(xì)胞破碎。 第三章 免疫原和抗血清的制備 第一節(jié) 免疫原的制備 一、顆粒性抗原的制備 二、可溶性抗原的制備和純化 三、半抗原性免疫原的制備 第二節(jié) 免疫佐劑 一、佐劑的種類 二、佐劑的作用機(jī)制 第三節(jié) 抗血清的制備 一、免疫動(dòng)物的選擇 二、免疫程序 三、動(dòng)物采血法 第四節(jié) 抗血清的鑒定和保存 一、抗血清的鑒定 二、抗血清的保存 第五節(jié) 抗血清的純化 一、特異性 IgG抗體 二、單價(jià)特異性抗血清 思考題 小結(jié) ? 基本要求： ? 掌握：免疫原、抗血清的制備過(guò)程。常用于處理微生物和組織的細(xì)胞。 ? 具有離子交換集團(tuán)的纖維素。 用于人體的佐劑： 氫氧化鋁、明礬、 poly I∶C 、胞壁酰二肽、細(xì)胞因子、熱休克蛋白 常用于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的佐劑： 弗氏佐劑 (Freund’ s adjuvant) 一、佐劑的種類 弗氏佐劑 (Freund,s adjuvant)： 弗氏完全佐劑－羊毛脂與液體石蠟的混合物 弗氏不完全佐劑－弗氏完全佐劑加卡介苗 乳化方法： 研磨法和攪拌混合法 ? 細(xì)胞因子佐劑與抗原合用，可以更有效激發(fā)機(jī)體免疫功能，增強(qiáng)免疫反應(yīng)。 ? 免疫原不純，含有微量的雜抗原，制備出的抗血清出現(xiàn) 2－ 3種雜抗體。 2023年 2月 上午 5時(shí) 5分 :05February 5, 2023 ? 1行動(dòng)出成果，工作出財(cái)富。 05:05:0105:05:0105:05Sunday, February 5, 2023 ? 1知人者智，自知者明。 05:05:0105:05:0105:052/5/2023 5:05:01 AM ? 1越是沒有本領(lǐng)的就越加自命不凡。 2023年 2月 5日星期日 上午 5時(shí) 5分 1秒 05:05: ? 1比不了得就不比，得不到的就不要。純化目的是除去這些不相關(guān)成分，防止抗血清中其他雜抗體干擾試驗(yàn)結(jié)果。 （三）純化抗原的鑒定 蛋白含量測(cè)定： 紫外吸收法、雙縮脲法、酚試劑法 分子量測(cè)定： SDSPAGE、凝膠過(guò)濾 純度鑒定： 醋酸纖維膜電泳、 SDSPAGE、毛細(xì)管電泳、等電聚焦、高效液相層析 免疫活性鑒定： 雙向免疫擴(kuò)散、免疫電泳、 ELISA ? 制備人工抗原時(shí)，最常用于偶聯(lián)半抗原的載體是 ? A 牛血清白蛋白 B牛甲狀腺球球蛋白 ? C 人血清白蛋白 D 人甲狀腺球蛋白 ? E 兔血清白蛋白 第二節(jié) 免疫佐劑 免疫佐劑 ： 那些與抗原一起或先于抗原注入機(jī)體后，可增強(qiáng)機(jī)體對(duì)該抗原的免疫應(yīng)答或改變免疫應(yīng)答的類型的物質(zhì)稱為免疫佐劑 ,簡(jiǎn)稱佐劑 . 非免疫原性的佐劑 :氫氧化鋁、磷酸鋁、磷酸鈣、石蠟油、羊毛脂、表面活性劑、藻酸鈣、人工合成的多聚肌苷酸和胞壁肽。 ? 通過(guò)凝膠分子篩作用，大、中、 小三類分子彼此較易分開。 二、可溶性抗原的制備和純化 組織細(xì)胞或培養(yǎng)細(xì)胞可溶性抗原的制備： 反復(fù)凍融法－ 20℃ 凍結(jié)，然后室溫融化 超聲破碎法－超聲波（ 1～ 20kHz） 自溶法－自身酶系 酶處理法－溶菌酶、纖維素酶、蝸牛酶 表面活性劑處理法－ SDS、去氧膽酸鈉、二乙基十六烷基溴 ?