食品安全儀器檢測(cè)技術(shù)教材(編輯修改稿)
2025-02-02 19:38 本頁面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 的途徑。 譜 定性與定量分析定量分析 在氣相色譜法中的定量分析就是根據(jù)色譜峰的 峰高或峰面積 來計(jì)算樣品中各組分的含量。 常用的定量方法有 標(biāo)準(zhǔn)曲線法、外標(biāo)法、面積歸一化法 和 內(nèi)標(biāo)法 。 譜 定性與定量分析（ 1） 外 標(biāo) 法 已知 濃 度的 標(biāo) 準(zhǔn) 樣 品與待 測(cè)樣 品在完全相同的條件下 進(jìn)行色 譜 分析，以兩者的峰高或峰面 積 的比 較計(jì) 算 樣 品的含量，有直接 對(duì) 比法和 標(biāo) 準(zhǔn)曲 線 法。 直接 對(duì) 比法 是待 測(cè)樣 品與 標(biāo) 準(zhǔn) 樣 品的峰 值 直接比 較計(jì)算 樣 品含量； 標(biāo) 準(zhǔn)曲 線 法 以 標(biāo) 準(zhǔn) 樣 品作 濃 度與峰 值 關(guān)系圖 ，然后根據(jù) 測(cè) 得的待 測(cè)樣 品峰 值 從峰 值 — 濃 度關(guān)系曲線圖查濃 度。 外 標(biāo) 法 較為簡(jiǎn) 便，不需要校正因子，但 進(jìn)樣 量要求十分準(zhǔn)確，操作條件也需 嚴(yán) 格控制。 譜 定性與定量分析 譜 定性與定量分析 譜 定性與定量分析 譜 定性與定量分析 譜 技 術(shù)高效液相色譜法原理及分析1.3.2.液相色 譜 法的基本原理液相色 譜 的分 類定量分析方法概述高效液相色譜是利用溶質(zhì)在兩相間分配系數(shù)、親和力、吸附力或分子大小不同而引起的排阻作用的差別使不同溶質(zhì)得以分離。色譜法是一種分離技術(shù)。168。 混合物分離過程：試樣中各組分在 色譜分離柱中的兩相間不斷進(jìn)行著的 分配。168。 一相固定不動(dòng)，稱為固定相。168。 另一相是攜帶試樣混合物流過固定 相的液體，稱為流動(dòng)相。 譜 原理 當(dāng)混合物 進(jìn) 入色 譜 柱后，就在固定相、流 動(dòng) 相之 間不斷地 進(jìn) 行分配平衡。不同的化合物，分子 結(jié) 構(gòu)不同，理化性 質(zhì) 不同，所以在兩相中存在的 濃 度也各不相同。固定相中存在量多的化合物，沖洗出柱子的 時(shí)間 就 長(zhǎng)，反之 則 短。 這 與分配系數(shù) K有關(guān)：K值 小，先流出柱子， K值 大的，保留作用 強(qiáng) ，后流出柱子。 譜 原理 譜 分 類按流 動(dòng) 相和固定相特征分 為 正相色 譜 、反相色 譜按分離目的分 為 分析型、制 備 型按分離機(jī)理分 為 吸附色 譜 、分配色 譜 、離子交 換 色 譜 、凝膠色 譜等。 譜 分 類吸附色譜法：固定相： 吸附活性 強(qiáng) 弱不等的吸附 劑 （ 硅膠、氧化鋁 、聚酸膠）等 。流 動(dòng) 相： 各種極性的洗脫 劑 用途： 非極性溶 劑 中、具有中等相 對(duì) 分子 質(zhì) 量且為 非離子型的 試樣 。 特 別 適用于分離異構(gòu)體 分離原理 ：物 質(zhì) 在固定相上的吸附作用不同分配色譜法：原理 :根據(jù)各待測(cè)物在互不相溶的兩溶液中的溶解度不同，因而具有不同的分配系數(shù)。在色譜柱中，隨著流動(dòng)相的移動(dòng)，這種分配平衡需進(jìn)行多次，造成各待測(cè)物的遷移速率不同，從而實(shí)現(xiàn)分離的過程。流動(dòng)相 :HPLC分析中，為防止固定相的流失，流動(dòng)相與固定液應(yīng)盡量不互溶，或者說二者的極性相差越大越好。因此，根據(jù)流動(dòng)相與固定相極性的差別程度，可將液液色譜分為正相分配色譜（流動(dòng)相極性小于固定相極性，極性小的先流出，適于極性組分分離）和反相分配色譜（流動(dòng)相極性大于固定相極性，極性大的先流出，適于非極性組分分離） 。 譜 分 類 分配色譜法 ：固定相 : 原則上，用于氣象色譜的固定相也可用于高效液相色譜作固定相。但高效液相色譜固定液易流失，因此常用的只有幾種，按極性由高到低為： 3,339。氧二丙腈 (ODPN)、聚乙二醇 (PEM)、三甲撐二醇 (TMG)、十八烷 (C18)、角鯊?fù)?(SQ)。 譜 分 類 譜 法固定相： 極性的有機(jī)基 團(tuán) ， CN、 NH2。 雙 羥 基等 鍵 合在硅膠表面流 動(dòng) 相： 非極性或極性小的溶 劑 （如正已 烷 ）中加入適量極性溶 劑 （如 氯 仿、醇等） 分離機(jī)理： 范德 華 力、 誘導(dǎo) 力或 氫鍵 力用途： 多用于分離極性或中等極性化合物正相分配色 譜 ：固定相極性大于流 動(dòng) 相正相色 譜 常用的流 動(dòng) 相及其沖洗 強(qiáng) 度的 順 序是：正己 烷 ＜乙 醚 ＜乙酸乙 酯 ＜異丙醇 譜 分 類 譜 法反相分配色 譜 ：固定相極性小于流 動(dòng) 相 固定相： 采用極性 較 小的 鍵 合固定相，如硅膠 C18H37（ ODS， C18）、硅膠 苯基等流 動(dòng) 相： 采用極性 較 強(qiáng) 的溶 劑 ，如甲醇、乙睛 水、水和無機(jī)鹽 的 緩 沖溶液等。 譜 分 類 譜 法分離機(jī)理 —— 疏溶 劑 作用理 論 用途： 主要用于分離非極性至中等極性的各 類 有機(jī)化合物反相色 譜 最常用的流 動(dòng) 相及其沖洗 強(qiáng) 度如下：H2O＜甲醇＜乙 腈 ＜乙醇＜丙醇＜異丙醇＜四 氫呋 喃 譜 分 類離子交 換 色 譜 法原理： 不同待 測(cè) 離子 對(duì) 固定相 親 和力的差 別固定相 ：基 質(zhì) ：合成 樹 脂（聚苯乙 烯 ）、 纖維 素和硅膠表面 鍵合離子：陽離子和陰離子交 換樹 脂流 動(dòng) 相 ： 一定 pH和 鹽濃 度的 緩 沖溶液用途 ： 適用無機(jī)離子、有機(jī)離子混合物的分離例如氨基酸、核酸、蛋白 質(zhì) 等生物大分子。 譜 分 類凝膠色 譜 法（又稱尺寸排阻色 譜 法）原理： 利用被 測(cè)組 分分子大小不同、在固定相上 選擇性滲透 實(shí)現(xiàn) 分離。固定相： 化學(xué)惰性的多孔性材料，如聚苯乙 烯 凝
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