6-dna重組(編輯修改稿)
2025-02-02 02:30 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 A與宿主菌染色體 DNA的整合； ? （ 2）調(diào)節(jié)特定的基因表達(dá)； ? （ 3）調(diào)節(jié)胚胎發(fā)育期間程序性的 DNA重排。 2023/2/1 31 ?第一例位點(diǎn)特異性重組發(fā)現(xiàn)在 E. coli染色體 DNA和 λ噬菌體 DNA之間。 ?λ噬菌體感染 E. coli以后，其 DNA通過(guò)兩端的粘性位點(diǎn)（ cos位點(diǎn)）自我環(huán)化，并在 DNA連接酶的催化下實(shí)現(xiàn)共價(jià)閉環(huán)。隨后，噬菌體必須在裂解途徑和溶源途徑做出選擇。 2023/2/1 32 ? 如果選擇裂解途徑，噬菌體會(huì)在較短的時(shí)間內(nèi)通過(guò)滾環(huán)復(fù)制大量增值，并導(dǎo)致宿主菌裂解； ? 如果是溶源途徑，噬菌體 DNA就以位點(diǎn)特異性的重組整合到宿主染色體 DNA上，進(jìn)入到原噬菌體狀態(tài)。在這期間，噬菌體幾乎所有的基因都不表達(dá)。 圖 611 λ噬菌體的位點(diǎn)特異性整合 2023/2/1 34 圖 612 λ噬菌體重組整合或切除時(shí)切點(diǎn)的序列 2023/2/1 35 ? 轉(zhuǎn)座重組（ transposition rebination）是指 DNA上的核苷酸序列從一個(gè)位置轉(zhuǎn)移到另外一個(gè)位置的現(xiàn)象。發(fā)生轉(zhuǎn)位的 DNA片段被稱為轉(zhuǎn)座子（ transposons）或可移位的遺傳元件，有時(shí)還被稱為跳躍基因（ jump gene）。 2023/2/1 36 ? 與前兩種重組不同的是，轉(zhuǎn)座子的靶點(diǎn)與轉(zhuǎn)座子之間不需要序列的同源性。 ? 接受轉(zhuǎn)座子的靶位點(diǎn)絕大多數(shù)是隨機(jī)的，但也可能具有一定的傾向性（如存在一致序列或熱點(diǎn)），具體是哪一種與轉(zhuǎn)座子本身的性質(zhì)有關(guān)。 2023/2/1 37 ? 轉(zhuǎn)座重組可以導(dǎo)致突變，如果插入到一個(gè)基因的內(nèi)部，很可能導(dǎo)致基因的失活；如果插入到一個(gè)基因的上游，又可能 導(dǎo)致基因的激活 。 2023/2/1 38 圖 614 轉(zhuǎn)座子對(duì)基因 X的可能影響 2023/2/1 39 ? 一、原核生物的轉(zhuǎn)座子 ? 人們最早在 E. coli內(nèi)發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)座現(xiàn)象，首先被發(fā)現(xiàn)的轉(zhuǎn)座子是插入序列（ insertion sequences， IS）。 ? 迄今為止，在細(xì)菌內(nèi)已發(fā)現(xiàn)四類轉(zhuǎn)座子。 2023/2/1 40 ? （一）第一類轉(zhuǎn)座子 ? 即 IS，它們是 最簡(jiǎn)單的轉(zhuǎn)座元件 ，具有以下特征： ? （ 1）長(zhǎng)度較小，通常在 700bp ~1800 bp之間； ? （ 2）兩端通常含有 10bp~40 bp長(zhǎng)的 IR (inverted repeats)序列； ? （ 3）內(nèi)部一般只有一個(gè)基因，其表達(dá)產(chǎn)物只與插入事件有關(guān)，是專門(mén)催化轉(zhuǎn)位反應(yīng)的 轉(zhuǎn)座酶 （ tnpA），缺乏抗生素或其它毒性抗性基因； 2023/2/1 41 圖 615 第一類轉(zhuǎn)座子的結(jié)構(gòu) 2023/2/1 42 ? （ 4）通過(guò)“剪切”和“粘貼”的方式進(jìn)行轉(zhuǎn)座，轉(zhuǎn)座結(jié)束后可導(dǎo)致靶位點(diǎn)序列重復(fù)（參看圖 616）。 ? （ 5）有少數(shù)（如 IS91）沒(méi)有明顯的 IR序列，通過(guò)滾環(huán)復(fù)制和粘貼的方式進(jìn)行轉(zhuǎn)座。 2023/2/1 43 圖 616 第一類轉(zhuǎn)座子的轉(zhuǎn)座機(jī)制 2023/2/1 44 ? （二）第二類轉(zhuǎn)座子 ? 又稱為復(fù)雜型轉(zhuǎn)座子，具有以下特征： ? （ 1）較長(zhǎng)，長(zhǎng)度在 Kb~20 Kb之間； ? （ 2）兩側(cè)含有 35 bp~40 bp長(zhǎng)的 IR序列
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