基因工程基礎知識與基本技術概述(編輯修改稿)
2025-01-26 09:23 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 。 基因組 有的物種，較為復雜一些，可能含有多套基因組，如：植物的 核基因組 ； 線粒體 基因組；葉綠體 基因組等。 30 ? (1)原核生物基因組的特點 ①具有操縱子結(jié)構(gòu)；②編碼序列在基因組中約占 50％，遠大于真核基因組，但又小于病毒基因組；③多順反子結(jié)構(gòu)且無內(nèi)含子，是連續(xù)的 Pg此轉(zhuǎn)錄后不需要剪切；④基因組中重復序列很少；⑤基因組中存在可移動的 DNA序列，包括插入序列和轉(zhuǎn)座子。 (2)真核生物基因組的特點 ①每一種真核生物都有一定的染色體數(shù)目；②真核生物的萊因織遠遠大于原核生物的基因組，結(jié)構(gòu)復雜，基因數(shù)龐大，具有很多復制起點，每個復制子大小不一；③真核生物都有結(jié)構(gòu)基因與相關的調(diào)控區(qū)組成，轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為單順反于，即一分子mRNＡ只能翻譯成一種蛋白；④大量重復順序的存在是真核生物基因組的重要特點；⑤真核生物基因組內(nèi)非編碼的順序占 90％以卜，基因組中的非編碼的順序所占比例是真核生物與細菌、病毒的重要區(qū)別，正在一定程度上也是生物進化的標尺；⑥大多數(shù)真核生物的結(jié)構(gòu)基因具有內(nèi)含子結(jié)構(gòu)，是斷裂基因，而原核生物基因不含內(nèi)含子序列； ⑥有基因家族，來自同一個祖先基因的復制和變異、功能相關的基因構(gòu)成各種基因家族，可以串聯(lián)在一起，亦可相距很遠。 原核與真核生物基因組特點 31 ? ?電泳技術 ?ＰＣＲ技術 ?分子雜交技術 ?ＤＮＡ序列分析技術 ?基因突變技術 基因工程的基本技術 32 ? 電泳 ，指混懸于溶液中的樣品電荷顆粒 ,在電場影響下向著與自身帶相反電荷的電極移動的現(xiàn)象。 電泳技術 瓊脂糖電泳 聚丙烯酰胺電泳 33 ? ?瓊脂糖電泳 ，就是用瓊脂糖凝膠作支持物的電泳方法。 瓊脂糖電泳 34 ? 瓊脂糖電泳的操作 ?正確選擇凝膠濃度 ?適合的電泳緩沖液 ?電泳的合適電壓和溫度 ?DNA樣品的純度和狀態(tài) ?DNA的上樣 ?Marker的選擇 ?凝膠的染色和觀察 35 ? 使用聚丙烯酰胺凝膠作為基質(zhì) ,進行電泳的方法。 聚丙烯酰胺凝膠電泳 非變性聚丙烯酰胺凝膠 SDS聚丙烯酰胺凝膠（ SDSPAGE） 36 ? SDSPAGE電泳 ?SDSPAGE電泳 ，中 SDS是陰離子去污劑，作為變性劑和助溶試劑，它能斷裂分子內(nèi)和分子間的氫鍵，使分子去折疊，破壞蛋白分子的二、三級結(jié)構(gòu)。 37 ? ? PCR技術 PCR是體外酶促合成特異 DNA片段的一種方法 ,由 高溫 變性、低溫退火（復性）及適溫延伸等幾步反應組成一個周期 ,循環(huán)進行 ,使目的 DNA得以迅速擴增 ,具有 特異性 強、靈敏度高、操作簡便、省時等特點。 38 ? PCR技術的發(fā)現(xiàn) 1984年 11月 15日， PCR實驗獲得了成功 1985年 3月 28日，申請有關 PCR的第一個專利 1985年 9月 20日，一篇關于 PCR應用的文章關交《科學》雜志， 11月 15日接受發(fā)表。 1985年 12月，一篇正式介紹 PCR的原理的論文送到《自然》雜志，拒稿。后改投吳瑞為主編的《酶學方法》雜志。 1986年 5月，穆利斯去冷泉港實驗室舉行的“人類分子生物學”專題研討會上介紹 PCR技術 1991年 12月 12日，霍夫曼－拉夫什公司出資 3億美元購買 PCR技術。西斯特公司倒閉 1993年 10月 13日，穆利斯因發(fā)明 PCR技術獲諾貝爾化學獎。 39 ? ＰＣＲ技術實驗過程 PCR實驗原理圖 40 ? ＰＣＲ反應的特點 ?特異性強 ?靈敏度高 能將 皮克 (pg=1012)量級的起始待測模板，擴增到微克 (μ
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