基因工程選修三dna重組技術(shù)的基本工具(編輯修改稿)
2025-01-25 17:57 本頁面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 基因的核苷酸序列 ： 變性 （ 90℃ 95℃ ）：目的基因 DNA受熱變性后解鏈為單鏈； 復(fù)性 （ 55℃ 65℃ ）：引物與單鏈相應(yīng)互補(bǔ)序列結(jié)合； 延伸 （ 70℃ 75℃ ）：在Taq酶的作用下，合成與模板互補(bǔ)的 DNA鏈； 約 2n PCR技術(shù)擴(kuò)增與 DNA復(fù)制的比較 PCR技術(shù) DNA復(fù)制 相同點(diǎn) 原料 條件 不同點(diǎn) 解旋方式 場(chǎng)所 酶 結(jié)果 四種脫氧核苷酸 模板、能量、酶 高溫下變性解旋 解旋酶催化 體外復(fù)制 主要細(xì)胞核內(nèi) 熱穩(wěn)定的 DNA聚合酶 細(xì)胞內(nèi)的 DNA聚合酶 大量的 DNA片段 形成整個(gè) DNA分子 蛋白質(zhì)的氨基酸序列 mRNA的核苷酸序列 結(jié)構(gòu)基因的核苷酸序列 目的基因 推測(cè) 推測(cè) 化學(xué)合成 例：根據(jù)已知的氨基酸序列合成 DNA法 ： （三）化學(xué)方法人工合成的目的基因 適用：基因比較小，核苷酸序列已知 ： 使目的基因 在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在 ，并且可以遺傳給下一代，同時(shí)使目的基因 能夠表達(dá)和發(fā)揮作用 。 二、基因表達(dá)載體的構(gòu)建 ： 啟動(dòng)子 +目的基因 +終止子 +標(biāo)記基因 （一）轉(zhuǎn)化： （二）方法 目的基因進(jìn)入 _________內(nèi)，并且在 受體細(xì)胞內(nèi)維持 _____和 _____的過程。 受體細(xì)胞 穩(wěn)定 表達(dá) 三、將目的基因?qū)胧荏w紳胞 將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞的方法： （ 1） 農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法 ①農(nóng)桿菌特點(diǎn)： 易感染 雙子葉植物和裸子植物 ，對(duì)大多數(shù)單子葉植物沒有感染能力。 ② 原理：植物體受損傷時(shí)，傷口細(xì)胞會(huì)分泌 酚類化合物 ，吸引農(nóng)桿菌，農(nóng)桿菌的 Ti質(zhì)粒上的TDNA可以轉(zhuǎn)移到受體細(xì)胞，并整合到受體細(xì)胞染色體的 DNA上 。 ③ 過程： ④ 優(yōu)點(diǎn)： 經(jīng)濟(jì)有效 （ 2） 基因槍法 （ 3） 花粉管通道法 缺點(diǎn)：成本較高 受體細(xì)胞 (單子葉植物 ) 我國(guó)科學(xué)家獨(dú)創(chuàng)，轉(zhuǎn)基因抗蟲棉 將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞 ① 方法： 顯微注射法 ② 程序： ③常用的動(dòng)物受體細(xì)胞： 受精卵和卵細(xì)胞 將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞 ① 原核生物特點(diǎn)：繁殖快、單細(xì)胞、遺傳物質(zhì)少 ② 方法： 用 Ca2+處理細(xì)胞 → 感受態(tài)細(xì)胞 (吸收環(huán)境中 DNA生理狀態(tài) ) → 表達(dá)載體 (緩沖液 )與感受態(tài)細(xì)胞混合 → (溫度 )感受態(tài)細(xì)胞吸收 DNA分子 （二）方法 將目的基因?qū)? 植物細(xì)胞 將目的基因?qū)? 動(dòng)物細(xì)胞 將目的基因?qū)? 微生物細(xì)胞 農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法 基因槍法 花粉管通道法 —— 顯微注射法 —— 感受態(tài)細(xì)胞法 三、將目的基因?qū)胧荏w紳胞 四、目的基因的檢測(cè)與鑒定 （一）檢測(cè)（分子水平） 檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物的 DNA上是否插入了目的基因 ① 提取轉(zhuǎn)基因生物的基因組 DNA ② 用含目的基因的 DNA片段用 放射性同位素 等作標(biāo)記，以此做 探針 ③ 使探針和轉(zhuǎn)基因生物的基因組雜交 ,若顯示出雜交帶 ，表明染色體已插入染色體 DNA中 （ 1） 方法 : DNA分子雜交 （ 2）過程 : 檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了 mRNA 檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì) （ 1）方法 : 分子雜交 方法 : 抗原 抗體雜交 （ 2）過程 : 用上述探針和轉(zhuǎn)基因生物的 mRNA雜交，若出現(xiàn) 雜交帶 ,表明目的基因轉(zhuǎn)錄出了 mRNA （二）鑒定（個(gè)體
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