03第三章食品安全儀器檢測(cè)技術(shù)(編輯修改稿)
2025-01-22 07:18 本頁面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 的 濃 度也各不相同。固定相中存在量多的化合物，沖洗出柱子的 時(shí)間 就 長(zhǎng)，反之 則 短。 這 與分配系數(shù) K有關(guān)：K值 小，先流出柱子， K值 大的，保留作用 強(qiáng) ，后流出柱子。 譜 原理 譜 分 類按流 動(dòng) 相和固定相特征分 為 正相色 譜 、反相色 譜按分離目的分 為 分析型、制 備 型按分離機(jī)理分 為 吸附色 譜 、分配色 譜 、離子交 換 色 譜 、凝膠色 譜等。 譜 分 類吸附色譜法：固定相： 吸附活性 強(qiáng) 弱不等的吸附 劑 （ 硅膠、氧化鋁 、聚酸膠）等 。流 動(dòng) 相： 各種極性的洗脫 劑 用途： 非極性溶 劑 中、具有中等相 對(duì) 分子 質(zhì) 量且為 非離子型的 試樣 。 特 別 適用于分離異構(gòu)體 分離原理 ：物 質(zhì) 在固定相上的吸附作用不同分配色譜法：原理 :根據(jù)各待測(cè)物在互不相溶的兩溶液中的溶解度不同，因而具有不同的分配系數(shù)。在色譜柱中，隨著流動(dòng)相的移動(dòng)，這種分配平衡需進(jìn)行多次，造成各待測(cè)物的遷移速率不同，從而實(shí)現(xiàn)分離的過程。流動(dòng)相 :HPLC分析中，為防止固定相的流失，流動(dòng)相與固定液應(yīng)盡量不互溶，或者說二者的極性相差越大越好。因此，根據(jù)流動(dòng)相與固定相極性的差別程度，可將液液色譜分為正相分配色譜（流動(dòng)相極性小于固定相極性，極性小的先流出，適于極性組分分離）和反相分配色譜（流動(dòng)相極性大于固定相極性，極性大的先流出，適于非極性組分分離） 。 譜 分 類 分配色譜法 ：固定相 : 原則上，用于氣象色譜的固定相也可用于高效液相色譜作固定相。但高效液相色譜固定液易流失，因此常用的只有幾種，按極性由高到低為： 3,339。氧二丙腈 (ODPN)、聚乙二醇 (PEM)、三甲撐二醇 (TMG)、十八烷 (C18)、角鯊?fù)?(SQ)。 譜 分 類 譜 法固定相： 極性的有機(jī)基 團(tuán) ， CN、 NH2。 雙 羥 基等 鍵 合在硅膠表面流 動(dòng) 相： 非極性或極性小的溶 劑 （如正已 烷 ）中加入適量極性溶 劑 （如 氯 仿、醇等） 分離機(jī)理： 范德 華 力、 誘導(dǎo) 力或 氫鍵 力用途： 多用于分離極性或中等極性化合物正相分配色 譜 ：固定相極性大于流 動(dòng) 相正相色 譜 常用的流 動(dòng) 相及其沖洗 強(qiáng) 度的 順 序是：正己 烷 ＜乙 醚 ＜乙酸乙 酯 ＜異丙醇 譜 分 類 譜 法反相分配色 譜 ：固定相極性小于流 動(dòng) 相 固定相： 采用極性 較 小的 鍵 合固定相，如硅膠 C18H37（ ODS， C18）、硅膠 苯基等流 動(dòng) 相： 采用極性 較 強(qiáng) 的溶 劑 ，如甲醇、乙睛 水、水和無機(jī)鹽 的 緩 沖溶液等。 譜 分 類 譜 法分離機(jī)理 —— 疏溶 劑 作用理 論 用途： 主要用于分離非極性至中等極性的各 類 有機(jī)化合物反相色 譜 最常用的流 動(dòng) 相及其沖洗 強(qiáng) 度如下：H2O＜甲醇＜乙 腈 ＜乙醇＜丙醇＜異丙醇＜四 氫呋 喃 譜 分 類離子交 換 色 譜 法原理： 不同待 測(cè) 離子 對(duì) 固定相 親 和力的差 別固定相 ：基 質(zhì) ：合成 樹 脂（聚苯乙 烯 ）、 纖維 素和硅膠表面 鍵合離子：陽離子和陰離子交 換樹 脂流 動(dòng) 相 ： 一定 pH和 鹽濃 度的 緩 沖溶液用途 ： 適用無機(jī)離子、有機(jī)離子混合物的分離例如氨基酸、核酸、蛋白 質(zhì) 等生物大分子。 譜 分 類凝膠色 譜 法（又稱尺寸排阻色 譜 法）原理： 利用被 測(cè)組 分分子大小不同、在固定相上 選擇性滲透 實(shí)現(xiàn) 分離。固定相： 化學(xué)惰性的多孔性材料，如聚苯乙 烯 凝膠、親 水凝膠、無機(jī)多孔材料。 流 動(dòng) 相： 作用不是 為 了控制分離，而是 為 了溶解 樣 品或減小流 動(dòng) 相粘度。 常用流 動(dòng) 相—— 四 氫呋 喃、甲苯、 氯 仿、二甲基酸胺和水 譜 分 類凝膠色 譜 法（又稱尺寸排阻色 譜 法）凝膠 過濾 色 譜 ： 以水或 緩 沖液作流 動(dòng) 相主要適合于水溶性高分子的分離凝膠滲透色 譜 ： 以有機(jī)溶 劑 作流 動(dòng) 相主要適合于脂溶性高分子的分離用途：特點(diǎn)：216。 固定相與分子 間 作用力 趨 于零，柱壽命 長(zhǎng)216。 相 對(duì) 分子 質(zhì) 量差 別 必 須 大于 10％ 才能分離 譜 分 類凝膠色 譜 法（又稱尺寸排阻色 譜 法）凝膠的種 類 很多，按其原料來源可分 為 有機(jī)膠和無機(jī)膠。按其制 備 的方法又可分 為 均勻、半均勻和非均勻三種凝膠。根據(jù)凝膠的 強(qiáng) 度又可分 為軟 膠、半硬膠和硬膠三大類 。根據(jù)它 對(duì) 溶 劑 的適用范 圍 又可分 為親 水性、 親 油性和兩性凝膠等等。按分離機(jī)理分 為 吸附色 譜 法、分配色 譜 法、離子色 譜法和凝膠色 譜 法四大 類 。其 實(shí) 有些液相方法并不能 簡(jiǎn)單 的 歸 于 這 四 類 （如下表所示） 。 譜 分 類類 型 分離機(jī)理 主要分析 對(duì) 象及 應(yīng)用 領(lǐng) 域吸附色 譜 吸附能、 氫鍵 異構(gòu)體分離、族分離、制 備分配色 譜 疏水分配作用 各種有機(jī)化合物的分離、分析和制 備凝膠色 譜 溶 質(zhì) 分子大小 高分子分離、分子量及其分布的 測(cè) 定離子交 換 色 譜 庫侖 力 無機(jī)離子、有機(jī)離子分析手性色 譜 立體效 應(yīng) 手性異構(gòu)體分離、藥 物 純 化親 和色 譜 生化特異 親 和力 蛋白、 酶 、抗體分離、生物和醫(yī) 藥 分析 譜 分 類 譜儀簡(jiǎn)介HPLC儀器包括：p 高壓輸液系統(tǒng)： 儲(chǔ)液罐、吸濾器、高壓 輸液泵、 脫氣裝置 及梯度洗脫裝置p 進(jìn)樣系統(tǒng)： 進(jìn)樣器，進(jìn)樣閥p 分離系統(tǒng)： 色譜柱，恒溫箱p 檢測(cè)系統(tǒng)： 檢測(cè)器p 記錄系統(tǒng)： 記錄裝置、色譜工作站 譜儀簡(jiǎn)介液相色譜儀 譜儀簡(jiǎn)介n 高效液相色譜儀流程圖高效液相色譜儀流程圖 譜儀簡(jiǎn)介 分析前，選擇適當(dāng)?shù)纳V柱和流動(dòng)相，開泵，沖洗柱子，待柱子達(dá)到平衡而且基線平直后，用微量注射器把樣品注入進(jìn)樣口，流動(dòng)相把試樣帶入色譜柱進(jìn)行分離，分離后的組分依次流入檢測(cè)器的流通池，最后和洗脫液一起排入流出物收集器。當(dāng)有樣品組分流過流通池時(shí)，檢測(cè)器把組分濃度轉(zhuǎn)變成電信號(hào)，經(jīng)過放大，用記錄器記錄下來就得到色譜圖。色譜圖是定性、定量和評(píng)價(jià)柱效高低的依據(jù)。 譜儀簡(jiǎn)介高壓輸液系統(tǒng)1） 貯液器： 由玻璃、不銹鋼或氟塑料制成，容量為 1到 2L，用來貯存足
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