血液制品去除／滅活病毒技術(shù)方法及驗(yàn)證指導(dǎo)原則(編輯修改稿)
2024-09-19 17:00 本頁面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 ──────────┤ │HCV │ RNA │ 有 │ 4060 │牛腹瀉病毒、Sindbis病毒 │ ├──┼───┼───┼──────┼──────────────┤ │HAV │ RNA │ 無 │ 27 │HAV、脊髓灰質(zhì)炎病毒、腦心肌 │ │ │ │ │ │炎（EMC）病毒 │ ├──┼───┼───┼──────┼──────────────┤ │B19 │ DNA │ 無 │ 20 │犬細(xì)小病毒、豬細(xì)小病毒 │ └──┴───┴───┴──────┴──────────────┘ （二）方案設(shè)計(jì) 1．去除/滅活病毒驗(yàn)證研究應(yīng)符合GLP的要求。 2．研究影響去除/滅活病毒效果的參數(shù)（包括機(jī)械參數(shù)和理化參數(shù)）允許變化的幅度。 3．研究病毒滅活動(dòng)力學(xué)，包括病毒滅活速率和滅活曲線。 4．指示病毒滴度應(yīng)該盡可能高（病毒滴度應(yīng)≥106/ml）。 5．加入的病毒與待驗(yàn)證樣品體積比不能高于1∶9。 6．如可能，驗(yàn)證過程中每步取出的樣品應(yīng)盡快直接進(jìn)行病毒滴定，不做進(jìn)一步處理（如超離心、透析或保存、除去抑制劑或毒性物質(zhì)等）。如果樣品必須做進(jìn)一步處理，或不同時(shí)間取出的樣品要在同一時(shí)間進(jìn)行測(cè)定，應(yīng)考慮這些處理方法對(duì)病毒檢測(cè)結(jié)果的影響。 7．檢測(cè)方法可包括蝕斑形成、細(xì)胞病變（如合胞體或病灶形成）、終點(diǎn)滴定或其他方法。這些方法應(yīng)該有適宜的靈敏度和可重復(fù)性，每一個(gè)取樣點(diǎn)應(yīng)取雙份樣品并設(shè)有對(duì)照以保證結(jié)果的準(zhǔn)確性。 8．如果制品的生產(chǎn)工藝中包含了兩步或兩步以上病毒去除/滅活方法，應(yīng)該分別進(jìn)行病毒滅活效果驗(yàn)證。 （三）觀察指標(biāo) 1．病毒方面 （1）去除/滅活病毒滴度； （2）滅活病毒速率、滅活曲線。以列表和做圖形式報(bào)告驗(yàn)證結(jié)果。 2．病毒去除/滅活各參數(shù)允許變化范圍 3．蛋白質(zhì)方面 （1）制品質(zhì)量應(yīng)符合《中國(guó)生物制品規(guī)程》或有關(guān)規(guī)定； （2）采用適當(dāng)方法測(cè)定蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)和功能活性的變化。如：制品比活性、IVIG的Fc功能分析可了解蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)是否發(fā)生了變化；凝膠色譜法可檢測(cè)蛋白質(zhì)分子大小和形狀的變化；蛋白質(zhì)形狀變化可導(dǎo)致擴(kuò)散系數(shù)、沉降常數(shù)和粘度的改變；SDSPAGE，特別是等電聚焦和PAGE結(jié)合（雙向電泳）也是檢測(cè)蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)變化的很好方法。 （3）如果采用新的去除/滅活方法（包括更換使用已認(rèn)可的病毒滅活方法或國(guó)內(nèi)外未曾采用過的病毒去除/滅活方法），需對(duì)蛋白質(zhì)半衰期和新免疫原性進(jìn)行研究。要求如下： 半衰期：用適宜動(dòng)物（如大鼠或家兔）和未經(jīng)病毒去除/滅活的相同制品進(jìn)行半衰期比較； 新免疫原性：新免疫原性用來檢查蛋白質(zhì)較高級(jí)別結(jié)構(gòu)上的變化。這些變化不一定損害蛋白質(zhì)功能，但是會(huì)引起受體免疫反應(yīng)。實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)新免疫原性
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