蛋白質(zhì)組學(xué)ppt(編輯修改稿)
2024-09-12 00:58 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 ， 蛋白質(zhì)的生物活性能保持：一旦用絡(luò)合劑如 EDTA或 Tris/甘氨酸轉(zhuǎn)移緩沖液來絡(luò)合金屬離子就可進(jìn)行提取來轉(zhuǎn)移蛋白質(zhì) 。 ? 它主要適用于蛋白質(zhì)顯色 、 完整蛋白質(zhì)的膠上被動提取以及質(zhì)譜分析 。 ? 該技術(shù)主要包括金屬鹽染料 、 鋅－咪唑染料等的使用 。 膠體擴(kuò)散染料 ?主要用于高靈敏度檢出電轉(zhuǎn)印至硝酸纖維素和PVDF膜上的蛋白質(zhì)，不用于膠內(nèi)染色。 ?最好的膠體金染色的靈敏度與 PAGE膠內(nèi)的銀染類似。 ?這種技術(shù)主要包括印度墨水染料、膠體金屬染料等。 有機(jī)熒光團(tuán)染料 ? 包括共價結(jié)合和非共價結(jié)合的熒光團(tuán)染料兩類 。 后者最為常用 ， 其典型代表是已經(jīng)商品化的 SYPRO Red、 Orange、 Ruby等熒光染料 。 ? 這三種染料可對 SDSPAGE膠內(nèi)蛋白質(zhì)進(jìn)行一步染色 ， 約30~60min完成 ， 靈敏度為 2~10ng。 染色后的凝膠用標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)室 300nm紫外透射儀進(jìn)行照像保存 ， 其線性范圍為 3個數(shù)量級 。 ? 這三種染料的電泳染色結(jié)果與在酵母中通過 SAGE所獲得的基因表達(dá)水平的動態(tài)范圍相匹配 。 ? 在 Tris/甘氨酸轉(zhuǎn)印緩沖液中染色后 ， 蛋白質(zhì)可被轉(zhuǎn)印至膜上并進(jìn)行免疫染色或 Edman測序來鑒定蛋白質(zhì) 。 金屬螯合染料 ? 這是一類與現(xiàn)代蛋白質(zhì)組學(xué)研究相兼容的 、 相對較新的蛋白質(zhì)顯色試劑 ， 其設(shè)計(jì)專門與常用微量化學(xué)表征過程兼容 。 它們不包含戊二醛 、 甲醛或 Tween20等 ，很容易和集成化蛋白質(zhì)組學(xué)平臺 （ 包括自動化凝膠染色儀 、 圖像分析工作站 、 機(jī)器人剪切儀器 、 蛋白質(zhì)酶解工作站和質(zhì)譜儀等 ） 相結(jié)合 。 ? 其中 SYPRO Ruby也是一種基于釕的金屬發(fā)光染料 。 （四）凝膠的圖像處理分析和膠內(nèi)酶切 ? 凝膠圖像的掃描： ? 圖像加工： ? 斑點(diǎn)檢測和定量： ? 凝膠配比： ? 數(shù)據(jù)分析： ? 數(shù)據(jù)呈遞和解釋： ? 2DE數(shù)據(jù)庫的建立： ? 目前有多種圖像分析軟件可用于膠的圖像分析 : MelanieII (BioRad), PD Quest (BioRad), Phoretix 2D Full, (Amersham Pharmacia Biotech) ImageMaster 2d Platinum ? 這些軟件可以完成蛋白質(zhì)點(diǎn)的識別、匹配等，具有很強(qiáng)的分析功能，但其缺點(diǎn)是需要很多的圖像手工校對， 正常肝細(xì)胞和肝癌細(xì)胞的蛋白質(zhì)組雙向電泳差異表達(dá)譜 園點(diǎn)標(biāo)記的點(diǎn)為兩者的差異蛋白 數(shù)字號碼為蛋白質(zhì)點(diǎn)在參考膠中的索引號 蛋白質(zhì)的膠內(nèi)酶切 包括感興趣蛋白點(diǎn)的挖取、含蛋白質(zhì)凝膠的脫色、膠內(nèi)蛋白質(zhì)的酶切等過程 （五）質(zhì)譜分析 樣品分子離子化后，根據(jù)不同離子間質(zhì)核比（ m/z）的差異來分離并確定分子量 定性 定量 質(zhì)譜 m/z 離子化 原理 ? 質(zhì)譜分析是先將物質(zhì)離子化，按離子的質(zhì)荷比分離，然后測量各種離子譜峰的強(qiáng)度而實(shí)現(xiàn)分析目的的一種分析方法。 20世紀(jì)初 20世紀(jì) 40年代 20世紀(jì) 60年代 20世紀(jì) 80年代 . Thomson制成第一臺質(zhì)譜儀 主要是用來進(jìn)行同位素測定和無機(jī)元素分析 開始用于有機(jī)物分析 出現(xiàn)了氣相色譜 質(zhì)譜聯(lián)用儀 成為有機(jī)物分析的重要儀器 質(zhì)譜新技術(shù)：電噴霧電離源，大氣壓化學(xué)電離源 液相色譜 質(zhì)譜聯(lián)用儀 感應(yīng)耦合等離子體質(zhì)譜儀 質(zhì)譜技術(shù)發(fā)展過程 Sir Joseph John Thomson 1906年諾貝爾物理獎 主要貢獻(xiàn)：氣態(tài)下離子導(dǎo)電的理論和實(shí)驗(yàn)探索 Frederick Soddy 1921年諾貝爾化學(xué)獎 主要貢獻(xiàn)：使我們對放射活性物質(zhì)的認(rèn)識大大提高，另外他對同位素的起源和性質(zhì)也作了出色工作。 Francis William Aston 1922年諾貝爾化學(xué)獎 主要貢獻(xiàn)：使用質(zhì)譜方法大規(guī)模的研究非放射性元素的同位素；提出整數(shù)規(guī)則。 Hans G. Dehmelt and Wolfgang Paul 1989年同獲諾貝爾物理獎 主要貢獻(xiàn)：開發(fā)了離子阱質(zhì)譜技術(shù)。 Rober
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