【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 同一小區(qū)的 細(xì)胞類型也多 。對(duì)此 ，已有一些針對(duì)性的措施，如： 研究方法進(jìn)展 ? 近年來(lái)，采用激光捕獲顯微切割 (laser capture microdissection， LCM)技術(shù)可以在顯微鏡下快速、準(zhǔn)確地獲取所需的 單一細(xì)胞亞群 ，甚至單個(gè)細(xì)胞，從而成功地解決了組織中 細(xì)胞異質(zhì)性 的問(wèn)題，使得能夠確切地分析某一特定類型的細(xì)胞 ； ? 還發(fā)展了 免疫 LCM ? 免疫共沉淀 ：先選擇性純化相應(yīng)的亞結(jié)構(gòu)，再對(duì)后者進(jìn)行組學(xué)研究 Immunolaser capture microdissection of frozen prolactioma（泌乳素瘤 ） sections to prepare proteomic samples ? Colloids Surf B Biointerfaces. 2022 Jul 1。71(2):18793. ? Liu Y, Wu J, Liu S, Zhuang D, Wang Y, Shou X, Zhu J. ? Shanghai Neurosurgical Center, Department of Neurosurgery, Huashan Hospital, Shanghai Medical College, Fudan University, Shanghai 202240, China. LCM technology bined with immunohistochemistry (immunoLCM) is a valuable tool to obtain specific target cell populations and therefore this technique enables more accurate proteomic profile. In this study, more pure prolactin cells could be isolated and prepared for further proteomic analysis from either normal human pituitary or prolactioma. Proteomics analysis of immunoprecipitated synaptic protein plexes J Proteomics. 2022 Feb 15。72(1):8290. Klemmer P, Smit AB, Li KW. ? Department of Molecular and Cellular Neurobiology, Center for Neurogenomics and Cognitive Research, VU University Amsterdam,De Boelelaan 1085, 1081 Amsterdam, The Netherlands. Synapses are key neuronal elements of the brain. ... A synapse is considered as the most plex cellular anelle consisting of approximately 1500 of proteins that are interacting in an activity dependent manner. We have initiated a series of immunoprecipitation experiments in conjunction with LCMS/MS analysis in order to gain better insight into the anization of the synapse. 2)腦脊液（ Cerebrospinal fluid,CSF） ? 生理態(tài)：含極微量的蛋白質(zhì) 80％自血液濾過(guò)， 20％為大腦分泌，包括腦室周圍 CNS組織表達(dá) 和 分泌的蛋白質(zhì) ? CSF蛋白 其組成可 反映 腦組織的代謝活動(dòng) 和 CNS的病理過(guò)程 ， 即在疾病時(shí)， CSF中 蛋白質(zhì) 可發(fā)生不同程度的質(zhì)變 和 量變 ? 患 CNS疾病時(shí)，常常通過(guò)作 腰椎穿刺采集 CSF檢查，以協(xié)助診斷 CSF也是 神經(jīng)疾病蛋白質(zhì)組學(xué)研究的好材料 不足： **疾病特異的蛋白質(zhì)在 CSF中的 濃度很低 （ 需要在 2DE前進(jìn)行 CSF蛋白質(zhì)的 預(yù)分離， 以 富集 低豐度蛋白質(zhì) 目前采用的方法包括親和色譜、反相高效液相色譜和液相等電聚焦方法，以提高低豐度蛋白質(zhì)的檢出率 ） **不能 實(shí)現(xiàn) 定位 、 定時(shí) 研究 優(yōu)勢(shì)： *可從活體獲得 *從中發(fā)現(xiàn)的標(biāo)志物 可用于臨床 診斷、治療監(jiān)測(cè)等 *蛋白種類少 1500+（血液 有 4000+） ，易于研究和建立數(shù)據(jù)庫(kù)，等 3）細(xì)胞間液 ? 即 神經(jīng)細(xì)胞之間的體液，其蛋白來(lái)源包括 神經(jīng)細(xì)胞分泌 和 血液濾過(guò) ? 獲取方法： 微透析技術(shù) （ microdialysis），微創(chuàng)的、 動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè) 組織器官活性物質(zhì)（ 如神經(jīng)遞質(zhì) ）變化的方法 ， 為 活體、實(shí)時(shí) 、 定位地 尋找腦的特異標(biāo)志物提供了可能 3）細(xì)胞間液 該技術(shù)中的透析膜阻隔了體液中大量的蛋白、酶、免疫相關(guān)因子，可 同時(shí)實(shí)現(xiàn) 取樣 與 純化 兩個(gè)目的 ， 從而 使對(duì)小分子多肽的檢測(cè)成為可能 該技術(shù) 20世紀(jì) 80年代 已被用于 動(dòng)物實(shí)驗(yàn) ，近年來(lái)也 開始用于臨床 ，是一種有效而又安全先進(jìn)的監(jiān)測(cè)手段，可指導(dǎo)臨床治療 特點(diǎn)： 微創(chuàng)、動(dòng)態(tài)、定位 不足： 有創(chuàng) 4）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型的主要類型 ①疾病動(dòng)物 模型 ②基因敲除動(dòng)物 模型 ③轉(zhuǎn)基因動(dòng)物 模型 ，等 4）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型 （ 1） 小鼠 ① 暴露于 百草枯 和 乙撐雙二硫化氨基甲酸鎂 環(huán)境因素下，可建立小鼠的 PD的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ? ②快速老化敏感小鼠 8:常作為研究 AD的一種模型 ③強(qiáng)黑質(zhì)毒素 (1甲基 4苯基 1,2,3,6四氫吡啶 , MPTP）小鼠模型 ： 是 PD的模型。 它能夠通過(guò)血液和 BBB，然后代謝成有毒代謝產(chǎn)物 MPP+，并被多巴胺能神經(jīng)元攝取， 繼而 抑制線粒體電子運(yùn)輸鏈的 I型復(fù)合物 ，導(dǎo)致神經(jīng)元死亡 但是，它 不能形成 嗜酸性包涵體 （ Lewy小體） PD的特征性病理改變 （ 2）大鼠： 用于復(fù)制腦缺血、腦出血、蛛網(wǎng)膜下腔出血、癲癇、 PD、 AD等多種動(dòng)物疾病模型 最近也誘導(dǎo)出 實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎 （ 3）長(zhǎng)爪沙鼠： size介于大、小鼠之間，也是神經(jīng)系統(tǒng)疾病研究的常用動(dòng)物。用于 腦炎、脊髓灰質(zhì)炎 的研究；其腦底動(dòng)脈環(huán)后交通支缺損，很容易建立 腦缺血模型 ； 還具有類似人的 自發(fā)性癲癇發(fā)作 的特點(diǎn)，經(jīng)過(guò)選擇飼養(yǎng)其易感性可接近 100%，故 可建立理想的 癲癇動(dòng)物模型 （ 4）豬 人類亨廷頓舞蹈癥 HD的轉(zhuǎn)基因豬模型 (2022年 ) ? 此前，用于 HD研究的動(dòng)物模型主要是嚙齒類（大鼠、小鼠）。由于在生理、代謝等各個(gè)方面與人類差別巨大，嚙齒類模型還存在一些與人類疾病癥狀不一致的表現(xiàn)，這對(duì)于病理的研究、特別是一些治療藥物和手段的研究非常不利 ? 中國(guó)科學(xué)院廣州生物醫(yī)藥與健康研究院研究員賴良學(xué)與美國(guó)愛默瑞大學(xué)教授李曉江合作，在南方醫(yī)科大學(xué)教授顧為望協(xié)助下， 采用 轉(zhuǎn)基因克隆技術(shù) 成功獲得了 人類 HD的轉(zhuǎn)基因豬模型 ? 同時(shí)， 首次在轉(zhuǎn)基因豬大腦中 發(fā)現(xiàn)與人類 HD患者腦中類似的 神經(jīng)細(xì)胞凋亡現(xiàn)象 （ 5）獼猴： 非人靈長(zhǎng)類在生物學(xué)、遺傳學(xué)和行為學(xué)等方面與人類的高度相似性，使之成為人類疾病理想的、甚至是不可替代的動(dòng)物模型，在治療、藥理藥效的臨床前安全評(píng)價(jià)致關(guān)重要 ，因此是生物醫(yī)學(xué)研究中極為珍貴的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 研究 結(jié)果 與臨床多相符合 ， 但價(jià)格高昂 ，難以進(jìn)行廣泛的研究 ? 獼猴在神經(jīng)科學(xué)研究中的 經(jīng)典應(yīng)用 ：即利用 恒河猴 建立了 PD動(dòng)物模型，并用此模型誕生了一個(gè) 治療方法，即 將腎上腺內(nèi) 多巴胺生成細(xì)胞 移植到 患病動(dòng)物大腦皮層 內(nèi) ，取得明顯效果 人類疾病的轉(zhuǎn)基因猴（ 2022，昆明） ? 由于靈長(zhǎng)類動(dòng)物 較長(zhǎng)的生殖和生育周期 ，故建立其 轉(zhuǎn)基因模型 較為困難 ? 昆明動(dòng)物研究所獲得 轉(zhuǎn)基因猴 標(biāo)志著昆明動(dòng)物研究所在非人靈長(zhǎng)類轉(zhuǎn)基因動(dòng)物研究方面達(dá)到了世界領(lǐng)先水平，這為未來(lái) 人類重大疾病的非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物模型的深入研究奠定了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ) ? 季維智選定的下一個(gè)攻堅(jiān)目標(biāo)是：培育 PD轉(zhuǎn)基因獼猴 ? 110/ 一雌一雄 4）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型 優(yōu)勢(shì) ? 適合 動(dòng)態(tài)觀察 ， 重復(fù) 性好 ? 適合發(fā)病 機(jī)制研究 和 藥物篩選 等 不足 ? 臨床表現(xiàn)和病理改變 都難以 完全模擬 神經(jīng)系統(tǒng)疾病 ? 神經(jīng)變性疾病的發(fā)生呈一 緩慢進(jìn)展 的過(guò)程，而 目前采用的動(dòng)物模型 基本均為 急性發(fā)病 。因此應(yīng)謹(jǐn)慎地解釋由此獲得的蛋白質(zhì)組學(xué)數(shù)據(jù) ? 結(jié)果 不能直接用于人類 ，需要在人類的組織和體液上驗(yàn)證 2 阿爾茨海默 病 （ Alzheimer Disease， AD) 的蛋白質(zhì)組學(xué)研究 21 AD概述 1）概況：是老年人最常見的退行性神經(jīng)疾病，以 進(jìn)行性認(rèn)知功能全面減退 為臨床特征，早期表現(xiàn)為 漸進(jìn)性的記憶障礙 ，尤其 近期記憶障礙 ，繼而各種認(rèn)知功能全面受損，晚期則智力嚴(yán)重衰退，生活完全不能自理 ? 是一種多基因遺傳病 父母或兄弟中有 AD患者，則其患 AD的可能性高出無(wú)家族史者 4倍 ? 患病率 隨年齡增加而上升 *6574歲為 3%， 7584歲為 19%， 85歲以上為 47% 21 AD概述 ? 據(jù)中國(guó) AD協(xié)會(huì)估計(jì) （ 2022） : 目前全球有 3650萬(wàn) AD病人 ， 并以每 7秒鐘新增一名患者的速度遞增 2022年，一對(duì)夫妻面對(duì)的 4位 80歲以上的老人中將有一位是 AD患者 中國(guó)目前患者人數(shù) 6001000萬(wàn) 2030年，我國(guó) AD患者可達(dá) 1500萬(wàn) 每年的 9月 21日是“世界老年癡呆日” 21 AD概述 Alois Alzheimer （ 1986－ 1915） Ronald Reagan （ 19112022） 1910年命名該病 ? 前美國(guó)總統(tǒng)里根的妻子南茜目睹丈夫生病的痛苦后感概地說(shuō) ：“這可能是世界上 最可怕的疾病 …… 因?yàn)闊o(wú)法與之溝通和分享自己的感受 。 ” ? 記憶化作流沙，親人變得陌生，心智有如孩童，世界重新歸零 ——對(duì)于老年癡呆癥患者來(lái)說(shuō)，這是一個(gè)幻妙的過(guò)程；而對(duì)于身旁的親人來(lái)說(shuō)，是 不可逆的挑戰(zhàn) ? 里根在 1994年被確診患上老年癡呆癥后，就在年底公開了自己的病情，以自己的知名度喚起全世界對(duì)這種病的關(guān)注 。 1983年，里根在擔(dān)任總統(tǒng)時(shí)就簽署法令，將每年的 11月定為全國(guó)老年癡呆月，而 1995年成立的里根和南茜研究所，也專門研究該疾病。 ? 2022年 6月 5日，里根在與老年癡呆癥抗?fàn)幜?10年以后，以 93歲的高齡去世 ? 美國(guó) AD協(xié)會(huì)資深副主席凱恩說(shuō)：“ 里根為戰(zhàn)勝 AD做出了 兩項(xiàng)最大貢獻(xiàn) ： 一是極大地提高了公眾對(duì) AD的認(rèn)識(shí)；二是使人們 勇于公開談?wù)撨@種疾病 。里根的勇氣鼓舞了成千上萬(wàn)的患者。” 基因組測(cè)序技術(shù)的飛速發(fā)展 HGP時(shí)代： 13年 + 30億美元 2022年： 2年 + 近 100萬(wàn)美元（ James Watson） Watson授權(quán) 454生命科學(xué)公司在測(cè)序完成后公開他的基因組排序，但要保密一部分基因信息。如，他不想知道自己的 ApoE基因 是否變異。因?yàn)樵摶蜃儺愂?罹患老年癡呆癥的標(biāo)志 Now ： 1天 + 1000 美元 Ion Proton臺(tái)式基因組測(cè)序儀 患 AD的又一名人 ? 英國(guó)前首相 威爾遜 ：在 1964～ 1970年和 1974～1976年 4月間， 兩度擔(dān)任英國(guó)首相 ? 正當(dāng)政治生涯如日中天的時(shí)候，卻在 1976年 3月做出震驚全國(guó)的決定，辭去首相的職務(wù) . WHY? 因?yàn)檫@時(shí)他已感受到 AD的影響，記憶力衰退 ，難以集中精神處理政務(wù) ? 辭職不久，他的病就被確診； 1995年病逝，享年79歲 2022年 12月 10日，在頒獎(jiǎng)儀式上，瑞典國(guó)王向華裔科學(xué)家光纖之父高錕 （左）頒獎(jiǎng) 77歲 ； 2022年診斷患 老年癡呆 21 AD概述 ? 病因不明 ,發(fā)病機(jī)制不清 ， 女性多于男性 ? 診斷：主要靠臨床表現(xiàn)，缺乏有效的特異標(biāo)志物 ，難以實(shí)現(xiàn)早期診斷，因而延誤治療 ? 尚無(wú)有效的治療方法 ? 多數(shù) AD患者 3～ 15