染色體顯帶原理與技術(編輯修改稿)
2024-09-11 22:45 本頁面
【文章內容簡介】 有時分為二節(jié)。 14號 15號 中等。 16號大，從著絲粒向 q擴展。 17號 中等。 18號 中等，但比 17號大些。 1922號 中等。 X 中等 Y在著絲粒處有一條非常窄的帶； q的末端有一寬帶。 1， 9， 16號的 C帶和 Yq上的寬闊的遠側帶都有明顯的形態(tài)變異及異態(tài)性。 R顯帶 原理： 在細胞的培養(yǎng)過程中加入堿基的類似物，然后用紫外線照射后再用 Giemsa 染料染色，可以得到和 G— 顯帶相反的帶紋， 稱為 R— 帶。 即 G顯帶的深帶變?yōu)闇\帶，淺帶染成深帶。當 G顯帶顯示的染色體兩臂末端為淺帶時，如果兩臂末端發(fā)生缺失等異常，一般難以發(fā)現(xiàn)和識別，而 R帶正好能將此處顯示出易于識別的深帶。所以， R顯帶技術有利于檢測染色體的末端缺失、重排等。 光學顯微鏡、恒溫水浴箱、紫外燈、培養(yǎng)皿、 常規(guī)制片材料、 BrdU、秋水仙素、 2 SSC溶 液（ +）、 Gimesa染液等。 實驗用品 實驗方法 ，終止前 10小時在培養(yǎng)基中加 BrdU（使其終濃度為 12181。g/ml）。 6小時后加秋水仙素 20181。g/ml的 3滴（ 7號針頭垂直豎滴，使終濃度為 ）。 、處理細胞，制片。 60℃ 恒溫水浴箱中，置一培養(yǎng)皿于水面上（皿內加 1/3 2 SSC溶液，將所制玻片浸泡在內）。距玻片 10cm處放置一 20瓦紫外燈，照射玻片 3045分鐘。 ，用自來水沖凈。 5分鐘，自來水沖凈，室溫干燥后于鏡下觀察。 注意 ： 1. Brdu的濃度和作用時間是實驗成敗的關鍵。 顯示。 3. 若為女性標本，還可見淡染的遲復制 X 。 顯帶觀察 各號染色體顯現(xiàn)的帶紋與 G顯帶相反，在 G帶染色體標本出現(xiàn)的深帶用R顯帶法就是淺帶，同時在 G顯帶染色體標本出現(xiàn)的淺帶用 R顯帶法就是深帶。與 G顯帶的對比圖： R顯帶總體圖 G11技術 G11式顯帶是一種特異性顯示 9號染色體 次縊痕的顯帶方法，一般用于 9號染色體次縊痕 多態(tài)分析、家系調查，親子鑒定等研究以及 9號 染色體倒位的細胞遺傳學分析。 實驗用品 光學顯微鏡、恒溫水浴箱、染色缸、自 制新鮮染色體玻片、吸管、計時器、 pH試紙、 蒸餾水、 、 Gimesa染液等。 實驗方法 1. 3 ml Gimesa原液中加入蒸餾水 47 ml，混勻，用氫氧化鈉調 pH至 11。 2. 將染色體玻片放入其中染色 5分鐘左右。 3. 自來水沖洗，干燥。 4. 觀察可見 9號染色體次縊痕染成紫紅色，其它染色體長短臂均顯示藍色。 注意事項： 染色體玻片片齡一般不要超過一周，且在顯 帶之前最好再次 75℃ 烤片 5分鐘。 pH值為 11是顯帶成功的關鍵。 染色時間可先摸索，如整個背景為藍色、次 縊痕未出現(xiàn)，可相應地延長染色時間；如整 個背景為紫紅色、次縊痕不明顯則可相應地縮短染色時間。 顯帶觀察 ： 9號長臂次縊痕顯紫色 Q顯帶 70 年代初期，瑞典的化學家 Caspersson 首先用熒光染料喹丫因氮芥 ( Quinacrine Mustard) 處理染色體標本，發(fā)現(xiàn)在熒光顯微鏡下每條染色體出現(xiàn)了寬窄 和亮度不同的輝紋，即熒光帶，而各條染色體有其獨特的帶，由此可以清楚地鑒別人類的每一條染色體， 稱為 Q— 帶。 實驗原理 染色體用一種易結合于富含 AT的 DNA的熒光染料染色 ， 如 quinacrine， DAPI或 Hoechst33258，通過 UV熒光顯微鏡可以觀察染色體顯示亮度不同的帶紋 ， Q顯帶的帶紋與 G顯帶的非常相似 ， 亮帶相當于 G顯帶的深帶 ， 暗帶相當于 G顯帶的淺帶 。 實驗用品 光學顯微鏡、恒溫水浴箱、立式染色缸、 人外周血淋巴細胞染色體玻片標本（ 75℃ 中烤片 3小 時，未經(jīng)染色）。 ， Soresens緩沖液 ()、 。 實驗方法 將標本置于 5～ 10分鐘 后，再轉浸入用 Soresens緩沖液 ()配制 的 %的喹吖因、阿的平染液中染色 5～ 10 分鐘，用 2次，每次 5分鐘，于玻片上滴加 1～ 2滴新鮮緩沖液，加蓋片，在熒光顯微鏡下觀察。 Caspersson等（ 1971）的方法： 取用空氣干燥標本的玻片 → 浸入 95%、 70%、50%的乙醇和蒸餾水使其吸水 → 浸入 pH7的檸檬酸 /磷酸鹽緩沖液中 → 用預溫至 20℃ 芥子喹吖因（ 50ug/ml）染液染色 20分鐘 → 在上述緩沖液中漂洗三次，每次 5分種 → 然后用緩沖液蓋片封存 → 在熒光顯微鏡下觀察。 顯帶觀察 帶型與 G顯帶標本一致，熒光顯微鏡下觀察染色體上呈現(xiàn)出的亮帶就相當于 G顯帶染色體標本的深帶。 1號染色體： 短臂由遠端的弱熒光節(jié)段逐漸過渡到一中等熒光節(jié)端 ， 后者可分為兩條帶 。 長臂有 5條中等熒光帶 ， 中央一條最明顯 ， 次縊痕的熒光陰性 。 Ｎ顯帶 此技術可以使 1 1 1 21和 22號 染色體的隨體和隨體柄著色。 實驗原理 人類的近端著絲粒染色體 (即 1 1 121和 22號染色體 )的副縊痕處與核仁形成有關，故稱核仁形成區(qū)（ nucleolusanizing region，NOR），它是中期染色體
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