染色體與dna(chromosomeanddna)(編輯修改稿)
2025-02-15 00:47 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 rithing number , W） 拓?fù)洚悩?gòu)體（ Topological isomer）： 具有不同連接數(shù)的相同 DNA分子 拓?fù)洚悩?gòu)酶（ Topoisomerase）： 能夠改變 DNA連接數(shù)從而改變 DNA分子超 螺旋水平的酶 （ 1） 拓?fù)洚悩?gòu)酶 I （ topoisomerase I ） 作用機(jī)制：切開(kāi)環(huán)狀一條鏈， 連接數(shù)改變 177。 1， 不需 ATP （ 2） 拓?fù)洚悩?gòu)酶 Ⅱ 作用機(jī)制： 切開(kāi)環(huán)狀兩條鏈 ，連接數(shù)改變 177。 2， 需要 ATP 細(xì)菌中的 拓?fù)洚悩?gòu)酶 Ⅱ （促旋酶）：引入負(fù)超螺旋 二、核酸的性質(zhì) （一）酸堿性質(zhì)： DNA等電點(diǎn) 4~， RNA 等電點(diǎn) 2~ 帶負(fù)電荷 （ 瓊脂糖凝膠電泳 ） （二）浮力密度 (buoyant density) 應(yīng)用 ： （ 1）密度梯度離心 DNA的純化 8M CsCl（ RNA DNA protein) （ 2）確定 DNA平均 GC含量 ρ=+% (G+C) 蛋白質(zhì) 染色體 /線形 DNA 超螺旋質(zhì)粒 CsCl+EB RNA （三）紫外吸收 ： DNA/RNA： ?max=260nm protein： ?max=280nm A260： nucleotides 〉 ssDNA /RNA 〉 dsDNA 應(yīng)用： （ 1） DNA 純度鑒定 A260 / A280 =， pure dsDNA A260 / A280 =， pure RNA A260 / A280 ， pure protein （ 2） 核酸定量 1mg/ml： A260 =20（ dsDNA） 1mg/ml： A260 =25（ ssDNA/RNA） （ 3） 判斷 DNA是否變性 DNA的變性 ， 紫外吸收增大 （ 增色效應(yīng) ） DNA的復(fù)性 ， 紫外吸收減小 （ 減色效應(yīng) ） （四）核酸的變性和復(fù)性 變性 (Denaturation) ： 核酸雙螺旋區(qū)的氫鍵斷裂，變成單鏈， 不涉及共價(jià)鍵斷裂。 （ 1） 堿處理 （ alkali） DNA：酮 （ keto） 烯醇式 （ enolate） 變性 RNA：水解 （ hydrolysis） 附： （ 2） 化學(xué)試劑 尿素（ Urea）， 甲酰胺（ formamide） 高 PH 酸處理 acid ( 不是變性） 水解 （ hydrolysis） 高溫高酸 HClO4 脫嘌呤 apurinic （ 無(wú)機(jī)酸） （ 3）熱變性（ Thermal denaturation） 熔解溫度 （ Tm） ： DNA的雙螺旋結(jié)構(gòu)失去一半時(shí)對(duì)應(yīng)的溫度 。 Melting curve 測(cè)定 Tm，可推知 GC含量 GC%=（ ) Tm與（ G+C）含量的
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