【文章內(nèi)容簡介】 菌苔有透明的、半透明或不透明的，表面有暗色的或發(fā)亮的。 [3]瓊膠平板培養(yǎng)性狀 了解平板上菌落的特征，有助于判斷分離是否正確和挑取所需的菌落。瓊膠平板上菌落的觀察主要是：形狀和大小、顏色和光澤、表面是否隆起或凹陷、邊緣的形狀、透明度和粘度、培養(yǎng)基顏色的變化等。 非水溶性色素 :不能擴散到培養(yǎng)基中，所以菌落表現(xiàn)不同的顏色，而培養(yǎng)基則不改變顏色。黃單胞菌屬的細菌能夠形成非水溶性的黃色素，所以菌落是黃色的。 不能將形成黃色菌落的植物病原細菌都當作黃單胞菌屬的細菌 。如玉米蔫萎病細菌，曾經(jīng)分在黃單胞菌屬中，但是根據(jù)它的黃色素與黃單胞菌屬的細菌顯然不同，現(xiàn)在已經(jīng)分在泛生菌屬 (Pantoea)。歐文氏菌屬的細菌，除去有些可產(chǎn)生非水溶性的藍色素外，有的也能產(chǎn)生非水溶性的黃色素，菌落也呈黃色。有些棒桿菌屬細菌也能形成黃色菌落。 水溶性色素 : 擴散到培養(yǎng)基中就能使培養(yǎng)基變色，其中有些色素是熒光性的。假單胞菌屬細菌能否產(chǎn)生熒光性色素，是很重要的分類特征。 色素的產(chǎn)生與培養(yǎng)基有關，如在新鮮牛肉配成的培養(yǎng)基上，熒光性色素的產(chǎn)生要比用牛肉浸膏配成的更為明顯。為了測定假單胞菌屬細菌色素的產(chǎn)生，可用特殊的如金氏培養(yǎng)基 ,有兩種配方： 培養(yǎng)基 I 培養(yǎng)基 Ⅱ 蛋白胨 2g 2g 硫酸鉀 (K2SO4) lg 一 甘油 1g 1g 氯化鎂 (MgCl2) 一 磷酸氫二鉀 (K2HPO4) 一 硫酸鎂 (MgSO47H2O) 一 瓊膠 (水洗 ) 2g 2g 蒸餾水 100ml 100ml 酸度調(diào)節(jié)到 。培養(yǎng)基 I 適用于觀察非熒光性色素，培養(yǎng)基 Ⅱ 適用于觀察熒光性色素。熒光性色素的產(chǎn)生可以直接觀察或用紫外線照射觀察。 四、細菌的計數(shù) ? 細菌的繁殖量、植物接種和血清學方面的研究都要求知道細菌的數(shù)量。細菌計數(shù)的方法有： ① 測數(shù)器計數(shù)法； ② 混濁度計數(shù)法； ③ 平板菌落計數(shù)法。 ? 前兩種方法是計數(shù)活的和死的細菌的總數(shù)，后一種方法是測定活細菌數(shù)目。 （ 1）測數(shù)器計數(shù)法 紐鮑爾 (Neubauer)血球計數(shù)板是常用的一種。它是一塊很厚的載玻片，上面劃有每邊長為 ，方格的深度是 mm。 測數(shù)時，先將蓋玻片放在計數(shù)計上有刻度的位置，從蓋玻片的一側加小滴適當稀釋的孢子懸浮液，然后在顯微鏡下觀察每小格中孢子的數(shù)目；觀察 80小格，以它的平均數(shù)乘以 4000000，就是每毫升懸浮液中孢子的數(shù)目。 ? 測定時注意事項： ? （ 1）取待測稀釋菌懸液向血球計數(shù)板加樣前，須將菌懸液充分搖勻。 ? （ 2）加樣過程中，應避免將菌液滴在蓋玻片 ? （ 3）由于菌體在計數(shù)室中處于不同空間位置，須在不同焦距下才能觀察到，故觀察時須不斷調(diào)節(jié)微調(diào)，計數(shù)菌液中全部菌體，盡量避免遺漏。 實驗步驟 ? 鏡檢計數(shù)室：對計數(shù)室進行鏡檢，若內(nèi)有污物，清洗后才能計數(shù)。 ? 加樣液：先在血球計數(shù)板兩個計數(shù)室部位加蓋玻片，再用無菌玻棒或滴管沾取待測菌懸液稀釋液（已搖勻），從蓋玻片邊緣滴加，使菌液沿縫隙靠毛細作用自行進入計數(shù)室內(nèi)。靜置 5min。 ? 顯微鏡計數(shù)：將血球計數(shù)板置于載物臺上，先用低倍鏡觀察，后換高倍鏡觀察計數(shù)。位于格線上菌體只計上邊線和左邊線上的，如果出芽酵母芽體大小達到母細胞一半時，可計作兩個菌體。選擇五個視野，在每個視野內(nèi)任意選擇五個小方格計數(shù)，求出每個小方格菌體數(shù)量平均值。 ? 根據(jù)公式計算每 ml菌液含菌數(shù)。 ? 測量完畢后，取下蓋玻片用水沖洗血球計數(shù)板（嚴禁用硬物刷洗），晾干，放入盒內(nèi)保存。 (2)混濁度計數(shù)法 ? 測定懸浮液中細菌、酵母菌或孢子的數(shù)目，可先測定它的混濁度，然后與標準比較而后決定數(shù)目。 麥法蘭云度計 可作為混濁度的比較標準。測定混濁度更精確的方法是用 光度計 。測定無色細菌懸浮液，一般是用波長 450nm的光，或者用藍色濾色片；如是有色的肉汁凍培養(yǎng)液，則用波長 650nm的光較好，或用橙紅色濾色片。 (3)平板菌落計數(shù)法 將細菌懸浮液定量稀釋后，取一定量不同稀釋度的細菌懸浮液，分別在瓊膠平板上培養(yǎng)，從形成菌落的數(shù)目和稀釋度，可算出每毫升中細菌數(shù)： ? 細菌懸浮液一般都是按 10倍的比例稀釋，稀釋以后，每管中吸 lml或 ，然后加溶化并冷卻到 50℃ 左右的瓊膠培養(yǎng)基，充分混合后培養(yǎng)，計算平板上菌落的數(shù)目。 ? 還有一種方法是先制成瓊膠平板，取稀釋的懸浮液加在平板上，然后用滅菌的 “ L”形玻棒將菌液涂勻，培養(yǎng)后計算菌落數(shù)目。涂抹法的好處是細菌都在平板的表面，可以避免培養(yǎng)基中下層細菌的生長條件不同的影響。一般是只將 3個稀釋度較高的 (如 5