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正文內(nèi)容

二元手性選擇體系毛細(xì)管電泳分離檢測(cè)未衍生化氨基酸對(duì)映體的研究(編輯修改稿)

2024-08-31 13:35 本頁(yè)面
 

【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 NaOH+ mmol/L Cit+ 20 mg/L HPMC。 other conditions as Fig.Ⅱ. HPMC濃度對(duì)分離度的影響羥丙基甲基纖維素(hydroxypropyl methyl cellulose, HPMC)是水溶性高分子,其結(jié)構(gòu)單元中含有多個(gè)手性中心,結(jié)構(gòu)式如圖Ⅲ所示。圖Ⅲ 羥丙基甲基纖維素(HPMC)結(jié)構(gòu)式Fig.Ⅲ The structure of hydroxypropyl methyl cellulose纖維素在高效液相色譜中可用作制備手性固定相拆分手性藥物,也可用于毛細(xì)管電泳手性分離中增大對(duì)映體分離度,具有一定的手性識(shí)別作用[11]。在本實(shí)驗(yàn)中,單獨(dú)使用HPMC并不能使苯丙氨酸對(duì)映體分離,在銅和賴(lài)氨酸絡(luò)合的體系中不加HPMC時(shí)苯丙氨酸對(duì)映體的分離度很小,加入HPMC后,樣品的遷移時(shí)間增加,分離度增大,本文認(rèn)為HPMC和CuLLys形成二元手性選擇劑協(xié)同體系,有效提高了手性分離度。考察HPMC濃度為0~40 mg/L,在20 mg/L時(shí)對(duì)映體已達(dá)到基線分離,繼續(xù)增加HPMC的濃度,分離度改變不明顯,且基線不穩(wěn)(如圖Ⅳ)。綜合考慮分離度和分析時(shí)間,本實(shí)驗(yàn)選擇HPMC的最佳濃度為20 mg/L。圖Ⅳ HPMC濃度對(duì)分離度的影響Fig.Ⅳ The effect of HPMC concentration on separation Conditions: + mmol/LCit +(Ac)2+。 other conditions as Fig.Ⅱ. 、濃度及pH的影響通過(guò)對(duì)比檸檬酸(Cit)-氫氧化鈉(NaOH)、乙酸鈉(NaAc)-氫氧化鈉(NaOH)、硼酸(H3BO3)-乙酸(HAc)和乙酸銨(NH4Ac)-乙酸(HAc)這幾種緩沖體系,實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)只有在檸檬酸(Cit)-氫氧化鈉(NaOH)緩沖體系中,苯丙氨酸對(duì)映體才能得到分離,其他的緩沖體系則不能分離。NaOH-Cit 體系在電導(dǎo)檢測(cè)法中有良好的基線和靈敏的響應(yīng),但緩沖溶液濃度太高會(huì)引起基線漂移。實(shí)驗(yàn)選擇 Cit mmol/L。固定檸檬酸濃度后,加入氫氧化鈉以調(diào)節(jié)運(yùn)行液的pH。由于氨基酸具有等電點(diǎn),是兩性物質(zhì),緩沖溶液的pH對(duì)其對(duì)映體的分離影響很大。在0~ mmol/L濃度范圍內(nèi)考察氫氧化鈉濃度對(duì)分離度的影響,~,pH為分離的最佳范圍,對(duì)映體的分離度最好,見(jiàn)表Ⅱ所示。表ⅡNaOH濃度對(duì)分離度的影響Tab.Ⅱ The effect of NaOH concentration on the resolutionThe conc. of NaOH(mmol/L)0pHResolution(Rs)Conditions: + mmol/LCu(Ac)2 + + 20mg/L HPMC。 other conditions as Fig.Ⅱ.本實(shí)驗(yàn)對(duì)比了氣壓進(jìn)樣、重力進(jìn)樣和電動(dòng)進(jìn)樣三種方式對(duì)樣品測(cè)定結(jié)果的影響。電動(dòng)進(jìn)樣具有較好的精密性,且操作簡(jiǎn)單,電動(dòng)進(jìn)樣得到電堆積效果,進(jìn)而提高檢測(cè)靈敏度,但是進(jìn)樣量較大時(shí)會(huì)引起區(qū)帶展寬,使分離度下降,線性范圍較窄;采用壓力進(jìn)樣的峰形較窄,重現(xiàn)性不好,靈敏度較低,分離度沒(méi)有改善;采用重力進(jìn)樣的分離度下降,且會(huì)出現(xiàn)雜質(zhì)峰。綜合上述因素,本實(shí)驗(yàn)采用電動(dòng)進(jìn)樣方式, kV,進(jìn)樣時(shí)間為8 s。本實(shí)驗(yàn)考察了分離電壓從9 kV至21 kV對(duì)分離的影響,電壓較低時(shí),樣品分離度增大,但是分離時(shí)間太長(zhǎng);加大分離電壓,可以縮短分離時(shí)間,但同時(shí)分離電流也增加,產(chǎn)生的焦耳熱也增大,體系運(yùn)行不穩(wěn),甚至有氣泡產(chǎn)生,嚴(yán)重影響實(shí)驗(yàn)效果,柱效和分離度下降。綜合上述因素,本實(shí)驗(yàn)選擇分離電壓為1
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