二元手性選擇體系毛細管電泳分離檢測未衍生化氨基酸對映體的研究(編輯修改稿)
2024-08-31 13:35 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 NaOH+ mmol/L Cit+ 20 mg/L HPMC。 other conditions as Fig.Ⅱ. HPMC濃度對分離度的影響羥丙基甲基纖維素（hydroxypropyl methyl cellulose, HPMC）是水溶性高分子，其結(jié)構(gòu)單元中含有多個手性中心，結(jié)構(gòu)式如圖Ⅲ所示。圖Ⅲ 羥丙基甲基纖維素（HPMC）結(jié)構(gòu)式Fig.Ⅲ The structure of hydroxypropyl methyl cellulose纖維素在高效液相色譜中可用作制備手性固定相拆分手性藥物，也可用于毛細管電泳手性分離中增大對映體分離度，具有一定的手性識別作用[11]。在本實驗中，單獨使用HPMC并不能使苯丙氨酸對映體分離，在銅和賴氨酸絡(luò)合的體系中不加HPMC時苯丙氨酸對映體的分離度很小，加入HPMC后，樣品的遷移時間增加，分離度增大，本文認為HPMC和CuLLys形成二元手性選擇劑協(xié)同體系，有效提高了手性分離度?？疾霩PMC濃度為0～40 mg/L，在20 mg/L時對映體已達到基線分離，繼續(xù)增加HPMC的濃度，分離度改變不明顯，且基線不穩(wěn)（如圖Ⅳ）。綜合考慮分離度和分析時間，本實驗選擇HPMC的最佳濃度為20 mg/L。圖Ⅳ HPMC濃度對分離度的影響Fig.Ⅳ The effect of HPMC concentration on separation Conditions: + mmol/LCit +(Ac)2+。 other conditions as Fig.Ⅱ. 、濃度及pH的影響通過對比檸檬酸(Cit)－氫氧化鈉(NaOH)、乙酸鈉(NaAc)－氫氧化鈉(NaOH)、硼酸(H3BO3)－乙酸(HAc)和乙酸銨(NH4Ac)－乙酸(HAc)這幾種緩沖體系，實驗發(fā)現(xiàn)只有在檸檬酸(Cit)－氫氧化鈉(NaOH)緩沖體系中，苯丙氨酸對映體才能得到分離，其他的緩沖體系則不能分離。NaOH－Cit 體系在電導(dǎo)檢測法中有良好的基線和靈敏的響應(yīng)，但緩沖溶液濃度太高會引起基線漂移。實驗選擇 Cit mmol/L。固定檸檬酸濃度后，加入氫氧化鈉以調(diào)節(jié)運行液的pH。由于氨基酸具有等電點，是兩性物質(zhì)，緩沖溶液的pH對其對映體的分離影響很大。在0～ mmol/L濃度范圍內(nèi)考察氫氧化鈉濃度對分離度的影響，～，pH為分離的最佳范圍，對映體的分離度最好，見表Ⅱ所示。表ⅡNaOH濃度對分離度的影響Tab.Ⅱ The effect of NaOH concentration on the resolutionThe conc. of NaOH（mmol/L）0pHResolution(Rs)Conditions: + mmol/LCu(Ac)2 + + 20mg/L HPMC。 other conditions as Fig.Ⅱ.本實驗對比了氣壓進樣、重力進樣和電動進樣三種方式對樣品測定結(jié)果的影響。電動進樣具有較好的精密性，且操作簡單，電動進樣得到電堆積效果，進而提高檢測靈敏度，但是進樣量較大時會引起區(qū)帶展寬，使分離度下降，線性范圍較窄；采用壓力進樣的峰形較窄，重現(xiàn)性不好，靈敏度較低，分離度沒有改善；采用重力進樣的分離度下降，且會出現(xiàn)雜質(zhì)峰。綜合上述因素，本實驗采用電動進樣方式， kV，進樣時間為8 s。本實驗考察了分離電壓從9 kV至21 kV對分離的影響，電壓較低時，樣品分離度增大，但是分離時間太長；加大分離電壓，可以縮短分離時間，但同時分離電流也增加，產(chǎn)生的焦耳熱也增大，體系運行不穩(wěn)，甚至有氣泡產(chǎn)生，嚴重影響實驗效果，柱效和分離度下降。綜合上述因素，本實驗選擇分離電壓為1
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