二元手性選擇體系毛細(xì)管電泳分離檢測未衍生化氨基酸對映體的研究-展示頁
2024-08-19 13:35本頁面
【正文】 氨酸＝ mmol/ L : mmol/L。固定銅和L賴氨酸絡(luò)合物的摩爾配比為1 : 2，在0～ mmol/L濃度范圍內(nèi)考察銅和L賴氨酸絡(luò)合物濃度對苯丙氨酸分離度的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)當(dāng)Cu(II):LLys=1 : 1時，對映體得不到分離；當(dāng)配比為1 : ；當(dāng)配比達(dá)到1 : 2時，對映體已達(dá)到基線分離；當(dāng)配比為1 : 3時，對映體峰的遷移時間增加，分離效果沒有得到改善。在配體交換中，配體和中心離子的選擇、配體與中心離子的濃度比、配體與中心離子形成的絡(luò)合物的濃度對分離度有至關(guān)重要的影響。3 結(jié)果與討論實(shí)驗(yàn)僅采用銅離子作手性選擇劑，苯丙氨酸對映體未能達(dá)到分離，結(jié)果見圖Ⅱ.a；在銅離子存在的運(yùn)行液中，加入L賴氨酸，以CuLLys作配體絡(luò)合手性選擇劑，苯丙氨酸對映體不能達(dá)到基線分離，見圖Ⅱ.b；實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，在上述體系中添加羥丙基甲基纖維素（HPMC），苯丙氨酸對映體的分離度得到改善，如圖Ⅱ.c所示。采用電動進(jìn)樣方式，進(jìn)樣時間為8 s， kV，分離電壓為＋15 kV。D,L苯丙氨酸和L苯丙氨酸配制成1 mg/mL的儲備液，進(jìn)樣時用緩沖液稀釋到所需的濃度。 溶液的配制 mol/L NaOH、 mol/L Cit、25 mmol/L Cu(Ac)25 mmol/L LLys和100 mg/L HPMC儲備液。H2O，天津市科密歐化學(xué)試劑開發(fā)中心，分析純），羥丙基甲基纖維素（HPMC，山東赫達(dá)股份有限公司，分析純），D,L苯丙氨酸、L苯丙氨酸（D,LPhe、LPhe，上?？茖W(xué)院生物化學(xué)研究所，層析純），L賴氨酸（LLys，上海伯奧生物科技有限公司產(chǎn)品，層析純）。m（河北永年光導(dǎo)纖維廠），CQ2B型超聲波清洗器（明珠電器有限公司）。本實(shí)驗(yàn)以銅L賴氨酸作為配體交換選擇劑，與羥丙基甲基纖維素（HPMC）構(gòu)成二元手性選擇體系，用毛細(xì)管區(qū)帶電泳－電導(dǎo)法成功對未衍生的苯丙氨酸對映體進(jìn)行分離，方法高效簡便、分析成本低，可發(fā)展于實(shí)際樣品的分析應(yīng)用。氨基酸由于其結(jié)構(gòu)簡單，分離難度較大，且沒有紫外或熒光吸收，通常需要柱前、在柱或柱后衍生才可得到檢測。配體交換法是氨基酸手性分離的常用方法，基于配體交換原理的分離方式有氣相色譜手性固定相法、液相色譜法、薄層色譜法、膜分離法、毛細(xì)管電泳法[4]等。苯丙氨酸[2]主要用作試劑及醫(yī)藥上的胃腸外營養(yǎng)輸液，亦見用作特殊人員合成膳食、必需氨基酸片等營養(yǎng)強(qiáng)化劑的成分；苯丙氨酸還可作為昆蟲人工飼料的成分；苯丙氨酸對治療蘋果皰茄病亦有效。關(guān)鍵詞 毛細(xì)管電泳 電導(dǎo)檢測 苯丙氨酸 配體交換1前言氨基酸是組成生物大分子的基本單元，在生命起源、發(fā)育、病變及衰老等生命過程中都扮演著重要的角色，是蛋白組學(xué)研究的重要內(nèi)容之一[1]。對影響分離度的影響因素：電泳運(yùn)行液組成和濃度、配體選擇劑摩爾比和濃度、HPMC的濃度等進(jìn)行了詳細(xì)的討論。在選定體系下：+ mmol/L Cit+ mmol/L Cu(Ac)2+ mmol/L LLys +20mg/L HPMC，苯丙氨酸對映體獲得良好的基線分離。二元手性選擇體系毛細(xì)管電泳分離檢測未衍生化氨基酸對映體的研究陳裕富 謝天堯第一作者 陳裕富（1983年出生），男，中山大學(xué)化學(xué)與化工學(xué)院應(yīng)用化學(xué)A專業(yè)2003級指導(dǎo)教師 謝天堯 Email：cesxty.（中山大學(xué) 化學(xué)與化學(xué)工程學(xué)院，廣州 510275）摘要 以銅L賴氨酸作為配體交換選擇劑，與羥丙基甲基纖維素（HPMC）構(gòu)成二元手性選擇體系，在熔融石英毛細(xì)管（50181。m .50 cm）中，用毛細(xì)管區(qū)帶電泳－電導(dǎo)法成功對未衍生化苯丙氨酸對映體（D,LPhe）進(jìn)行分離。其線性范圍為10～200 mg/L，檢出限（S/N=3）為3 mg/L。本實(shí)驗(yàn)高
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