【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 /L)。 53 緩沖液濃度對(duì)電泳分離的影響 54 (五 )添加劑的影響 有三類(lèi)重要的添加劑： ? 荷電表面活性劑，非電解質(zhì)高分子添加劑，功能性添加劑 牛血清白蛋白多肽的 CZE快速鑒定 55 56 57 膠束電動(dòng)毛細(xì)管色譜（ MECC）分離示意圖 58 59 毛細(xì)管電色譜（ CEC） 60 Nonaqueous capillary electrophresis (NACE) ? 非水毛細(xì)管電泳是在 有機(jī)溶劑為主要的非水體系 中進(jìn)行的毛細(xì)管電泳 ? 有機(jī)溶劑中要加入電解質(zhì) ? 非水溶液中直接測(cè)得的 pH值稱(chēng)為表觀 pH值，與水溶液中的 pH概念不同，即便表觀 pH與水中一樣，解離常數(shù)也會(huì)有很大的差別 61 示例：虎杖藥材 NACE指紋圖譜研究 ? 虎杖為廖科植物虎杖的干燥根莖和根，用藥歷史悠久，具有祛風(fēng)利濕，散瘀定痛，止咳化痰之功效，傳統(tǒng)憂郁關(guān)節(jié)痹痛，濕熱黃疸等。 ? 主要活性成分是蒽醌和二苯乙烯苷類(lèi)。 ? 藥典對(duì)大黃素和虎杖苷進(jìn)行含量測(cè)定。 ? 大黃素 —— C18，甲醇－ ％磷酸水 (80:20) ? 虎杖苷 —— C18，乙腈－水 (23:77) ? 非水毛細(xì)管電泳增加了分離分析的選擇性，減少了毛細(xì)管內(nèi)壁的吸附改善分離，提高分離靈敏度。 知母及虎杖藥材色譜指紋圖譜研究，黃晟，第二軍醫(yī)大學(xué)碩士論文， 2022 1虎杖苷 2大黃素甲醚 3大黃素 S內(nèi)標(biāo)厚樸酚 對(duì)照品 供式品 ? 前處理：虎杖中蒽醌類(lèi)成分不溶于水，可溶于甲醇和乙酸乙酯，因此用甲醇和乙酸乙酯為提取溶劑考察溶劑及超聲提取的時(shí)間 —— 甲醇超聲提取 60分鐘 ? 波長(zhǎng)選擇：虎杖苷、大黃素、大黃素甲醚、厚樸酚 —— 225nm 知母及虎杖藥材色譜指紋圖譜研究，黃晟，第二軍醫(yī)大學(xué)碩士論文， 2022 ? 背景電解質(zhì)溶液：溶解度與分離選擇性 —— 甲醇 :水 1:1 ? 波長(zhǎng)選擇：虎杖苷、大黃素、大黃素甲醚、厚樸酚 —— 225nm 知母及虎杖藥材色譜指紋圖譜研究，黃晟，第二軍醫(yī)大學(xué)碩士論文， 2022 虎杖藥材 60分鐘電泳圖 虎杖對(duì)照藥材電泳疊加圖 ? 確認(rèn)有 12個(gè)吸收峰為共有峰，通過(guò)紫外吸收光譜和對(duì)照溶液添加法確定 1－虎杖苷， 2－大黃素甲醚， 7－大黃素。 ? 以參照物厚樸酚的保留時(shí)間和峰面積為 1，計(jì)算相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積。 ? 提取對(duì)照藥材的共有模式作為虎杖樣品的對(duì)照指紋圖譜。 知母及虎杖藥材色譜指紋圖譜研究，黃晟，第二軍醫(yī)大學(xué)碩士論文， 2022 知母及虎杖藥材色譜指紋圖譜研究， 黃晟，第二軍醫(yī)大學(xué)碩士論文， 2022 67 漢中的虎杖樣品的指紋圖譜與對(duì)照?qǐng)D譜相似性最好，其次是貴陽(yáng)虎杖，安徽金寨虎杖相似度最低。 知母及虎杖藥材色譜指紋圖譜研究，黃晟，第二軍醫(yī)大學(xué)碩士論文， 2022 68 第四節(jié) 毛細(xì)管電泳儀 69 一、毛細(xì)管電泳系統(tǒng)的基本結(jié)構(gòu) 70 二、進(jìn)樣系統(tǒng) 電動(dòng)進(jìn)樣、壓力進(jìn)樣、擴(kuò)散進(jìn)樣 + 電動(dòng)進(jìn)樣 進(jìn)樣量 Qin = ?r2c0(?ef +?os)E? 優(yōu)點(diǎn)： 普適方法 可完全實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化 缺點(diǎn)： 存在歧視效應(yīng) 71 壓力進(jìn)樣 進(jìn)口端加壓 出口端減壓 虹吸作用 ? ????PLrScQ in ??840HgP ??? ?虹吸進(jìn)樣 緩沖液 的密度 液面落差 重力 加速度 優(yōu)點(diǎn)： 無(wú)組分歧視效應(yīng) 缺點(diǎn)： 選擇性差 73 擴(kuò)散進(jìn)樣 毛細(xì)管插入樣品溶液，管口界面存在 濃度差 ，樣品分子向管內(nèi)擴(kuò)散，將樣品引入毛細(xì)管中。 進(jìn)樣量 Qin = 400c0S(2D?)1/2 普適性進(jìn)樣方法 無(wú)歧視效應(yīng) 74 三、溫度控制 風(fēng)冷控溫 液冷控溫 商品儀器常用氟代烷烴作冷卻劑 75 四、檢測(cè)系統(tǒng) ? 紫外檢測(cè)器 ? 柱上檢測(cè)：簡(jiǎn)單方便 ? 柱后檢測(cè)：適合于 CEC、 CGE等采用填充灌的分離模式 ? 激光誘導(dǎo)熒光 ? 由激光器、光路系統(tǒng)、檢測(cè)池和光電轉(zhuǎn)換器件等部分組成。也分為柱上檢測(cè)和柱后檢測(cè) ? 質(zhì)譜檢測(cè)器 ? 柱后檢測(cè) 已經(jīng)顯示出極其廣泛的應(yīng)用前景 76 類(lèi)型 檢測(cè)限 /mol 特點(diǎn) 紫外 可見(jiàn) 1013～ 1015 加二極管陣列，光譜信息 熒光 1015～ 1017 靈敏度高，樣品需衍生 激光誘導(dǎo)熒光 1018～ 1020 靈敏度極高，樣品需衍生 電導(dǎo) 1018～ 1019 離子靈敏，需專(zhuān)用裝置 77 毛細(xì)管電泳紫外檢測(cè) 刀片刮除法 火焰灼燒 檢測(cè)窗口 23 mm 利用球鏡聚焦增強(qiáng)紫外檢測(cè)靈敏度 78 線性掃描激光誘導(dǎo)熒光檢測(cè)器 由激光器、光路系統(tǒng)、 檢測(cè)池和光電轉(zhuǎn)換器 件等部分組成 79 CCD lens filter laser filter lens Microchip 80 線性激光誘導(dǎo)熒光檢測(cè)器 81 82 83 Microfluidic Chip Blue Laser High Voltage Cables 3D Regulator 84 高效毛細(xì)管電泳與高效液相色譜的比較 HPCE HPLC 分離依據(jù) 電荷、大小、分配、 pI 疏水性、分子大小 分離對(duì)象 無(wú)機(jī)離子 細(xì)胞 小分子 蛋白 峰容量 大于 100 7— 8 操作形式 高自動(dòng)化 自動(dòng)化 操作費(fèi)用 很低 高 制備能力 低 高 85 Separation and determination of coumarins in Fructus idii extracts by pressurized capillary electrochromatography using a packed column with a monolithic outlet frit Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis 50 (2022) 695–702 ? 蛇床子為傘形科蛇床屬植物蛇床 Cnidium monnieri (L.) Cusson 的果實(shí) 。 ? 蛇床子廣泛分布于我國(guó)大部分地區(qū) ， 因地理位置和生態(tài)環(huán)境的不同 ， 其種內(nèi)的化學(xué)成分發(fā)生了較大的變異 。 86 六個(gè)香豆素化學(xué)結(jié)構(gòu)圖 （ 1）佛手柑內(nèi)酯 （ 2）蛇床子素 （ 3）歐前胡素 （ 4）歐山芹素 （ 5） 2’乙酰白芷素 （ 6） O乙酰哥倫比亞內(nèi)酯。 87 通過(guò)在毛細(xì)管填充柱或內(nèi)涂層柱兩端施加直流高壓電場(chǎng)，使樣品在毛細(xì)管柱中的保留行為同時(shí)受到電泳及其在流動(dòng)相與固定相之間分配系數(shù)的影響，在雙重分離機(jī)制的作用下，毛細(xì)管電色譜對(duì)于被分離樣品細(xì)微之處的分辨能力得到了極大的加強(qiáng) 毛細(xì)管電色譜原理 88 ? 電色譜（ CEC） 作為一種新的微分離技術(shù)，結(jié)合了毛細(xì)管電泳技術(shù)的 高柱效 和高效液相色譜（ HPLC）的 高選擇性 的特點(diǎn)。 ? 缺點(diǎn)：來(lái)源于由毛細(xì)管色譜填充柱帶來(lái)的 氣泡 和柱干燥 問(wèn)題。 加壓毛細(xì)管電色譜 （ pCEC） ? 結(jié)合了 EOF和外加壓力的優(yōu)點(diǎn) ? 增加了峰容量 ? 縮短分析時(shí)間 ? 抑制了氣泡的產(chǎn)生 89 ? 色譜柱是 pCEC 分析中的關(guān)鍵，而同時(shí)能用于HPLC的反相 C18填料的填充柱是 pCEC 中較常用的色譜柱。 ? 常規(guī)的填充柱在柱子兩端燒結(jié)塞子以固定填料，燒塞不好將導(dǎo)致在使用中易產(chǎn)生一系列問(wèn)題： ? 塞子的重現(xiàn)性不好 ? 柱子在燒塞處易折斷 ? 燒塞處峰擴(kuò)展和易形成氣泡等 ? 本文在 pCEC系統(tǒng)上使用一種改進(jìn)后的電色譜填充柱，它的出口端用一段整體柱作為塞子代替?zhèn)鹘y(tǒng)燒結(jié)的塞子而進(jìn)口端則為無(wú)塞子的開(kāi)口端。 90 加壓毛細(xì)管電色譜儀搭建 91 出口端整體柱制備 聚合液 冰浴超聲震蕩 5 min