【文章內(nèi)容簡介】 31 GC7890Ⅱ氣相色譜儀的檢測條件 32 GC 法測定 α細(xì)辛腦的含量 32 小結(jié) 39 第 5 章 總結(jié)與展望 40 總結(jié) 40 展望 40 參考文獻(xiàn) 42 附錄 A 攻讀學(xué)位期間所發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄 47 0 謝 48 插圖索引圖 α細(xì)辛腦的藥時(shí)曲線 3圖 利用乙烯化反應(yīng)合成 α細(xì)辛腦的反應(yīng)路線 11圖 利用 Wittig 反應(yīng)合成 α細(xì)辛腦的反應(yīng)路線 12圖 利用 Grignard 反應(yīng)合成 α細(xì)辛腦的反應(yīng)路線 12圖 利用 Vilsmeier 反應(yīng)合成 2,4,5三甲氧基苯的反應(yīng)機(jī)理 13圖 利用 Wittig 反應(yīng)合成 α細(xì)辛腦的反應(yīng)機(jī)理 16圖 Grignard 試劑在乙醚中形成穩(wěn)定的溶劑化物示意圖 18圖 THF 精制的實(shí)驗(yàn)裝置圖 19圖 α細(xì)辛腦的 1HNMR 譜圖 24圖 中間體醇的 1HNMR 譜圖 25圖 原料醛的 1HNMR 譜圖 26插?\索引表 α細(xì)辛腦生物利用度參數(shù) 3表 三氯氧磷的用量對(duì)產(chǎn)物收率的影響 14表 不同脫水劑的脫水情況 23表 GC 法測定 α細(xì)辛腦的含量對(duì)照表 33第 1 章 緒 論自上世紀(jì) 60 年代起，國內(nèi)外對(duì) α細(xì)辛腦進(jìn)行了廣泛的研究，已證實(shí)其有很 強(qiáng)的藥理活性，具止咳、祛痰、平喘、鎮(zhèn)靜、解痙以及抗驚厥作用。對(duì)肺炎雙球 菌、金黃色葡萄球菌和大腸桿菌的生長也有不同程度抑制作用。提取的單體臨床 應(yīng)用于肺炎、哮喘、癲癇大發(fā)作等收到良好效果[1]。目前國內(nèi)有四家細(xì)辛腦注射 液生產(chǎn)廠家，市場需求量較大，它的身上蘊(yùn)藏著巨大的商業(yè)價(jià)值。 α細(xì)辛腦簡介 α細(xì)辛腦（αAsarone），又名 α細(xì)辛醚，化學(xué)名為 2((E)1丙烯基)1,4,5 三甲氧基苯，分子式為 C12H16O3，分子量為 ，結(jié)構(gòu)式為： OCH3OCH3H3COHHCH3其順反異構(gòu)體為 β細(xì)辛腦，結(jié)構(gòu)式為：OCH3OCH3H3COHCH3Hα細(xì)辛腦呈微黃色針狀結(jié)晶，熔點(diǎn) 61 ℃，不溶于水，溶于乙醚，乙醇，氯 0 ，脂溶性極強(qiáng)，它和其異構(gòu)體 β 細(xì)辛腦是天南星科植物石菖蒲（Acorus gramineus soland ）的主要有效成份之一，主要存在于中藥石菖蒲（Acorus gramineus soland）等植物的揮發(fā)油中。α細(xì)辛腦口服吸收迅速，15 分鐘可達(dá)峰， 血漿蛋白結(jié)合率為 61 %，可迅速分布于肝、腎、膽汁及心、腦、肺、脾等臟器， 絕對(duì)生物利用度極低，膠囊為 %，片劑為 %，半衰期長為 3~4 小時(shí)， 個(gè)體差異大，表觀分布容積為 126 L/㎏。 α細(xì)辛腦具有鎮(zhèn)咳、祛痰、平喘作用，臨床用于治療慢性支氣管炎，慢性阻 塞性肺病。具有鎮(zhèn)靜抗驚作用，臨床用于抗癲癇，是初發(fā)癲癇患者首選藥之一。 除此之外還有降壓、降脂[2]、利膽作用。通過對(duì) α細(xì)辛腦的毒理學(xué)研究發(fā)現(xiàn) α細(xì)辛腦小鼠口服 LD60 為 mg/㎏，腹腔注射 LD50 為 310 mg/㎏，實(shí)驗(yàn)表明 α 0 1 細(xì)辛腦對(duì)鼠傷寒沙門氏菌 TA98 有致突變作用[3]。當(dāng)劑量大于 mg/㎏是產(chǎn)生 致畸作用[4]。 α細(xì)辛腦的研究進(jìn)展 0 10多年來α細(xì)辛腦的研究不斷深入，在基礎(chǔ)藥理、體內(nèi)代謝、臨床應(yīng)用， 及在毒理學(xué)方面的研究有很大進(jìn)展。以下為α細(xì)辛腦在體內(nèi)代謝、藥理作用、臨 床應(yīng)用和毒理學(xué)方面的研究進(jìn)展?fàn)顩r。 體內(nèi)代謝 血藥濃度測定楊巷菁等[5] 在1987年報(bào)道了用氣相色譜法測定兔血液中α細(xì)辛腦濃度的方 法，采用FID檢測器，最低檢出濃度為400 ngml1。Tsai等[6]1992年用HPLCUV法將兔血清中的最低檢出濃度提高到100 ngml1。但是仍不能滿足人體內(nèi)藥動(dòng)學(xué) 研究的要求，因?yàn)棣良?xì)辛腦進(jìn)入人體后濃度極低，達(dá)1~100 ngml1。1994年劉宗 河等[7]首次報(bào)道了測定人血中α細(xì)辛腦的方法，其主要是依據(jù)α細(xì)辛腦化學(xué)結(jié)構(gòu) 在苯環(huán)上接有3個(gè)氧基和1個(gè)丙烯基，在紫外光的照射下可發(fā)射出極強(qiáng)的熒光，故 可用熒光檢測器檢測，最后使血清最低檢出濃度達(dá)到1~200 ngml1。而后，又有 改進(jìn)此法的報(bào)道， ngml1， ml，更適合藥 動(dòng)學(xué)和生物利用度的研究[8] 。 體內(nèi)代謝過程α細(xì)辛腦口服吸收迅速，15 min即可達(dá)到血濃度高峰，血漿蛋白結(jié)合率61%， 并迅速分布于肝、腎、膽汁及心、腦、肺、脾等臟器。其中肝、腎濃度接近于血 漿濃度，其余依次遞減，部分由膽汁排泄后，仍經(jīng)腸肝再吸收，最后主要隨小便 排出，小部分被肝臟代謝[10]。主要代謝物為2,4,5三甲氧丙烯酸(肉桂酸) [9]。 藥動(dòng)學(xué)新西蘭兔靜脈給予不同劑量5，10，20 mgkg1后，α細(xì)辛腦表現(xiàn)為二室模型， 分布容積沒有改變， Lh1kg1，而t1/ 2β ， h。故認(rèn)為α細(xì)辛腦在兔體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)屬非線性 [18]。α細(xì)辛腦在人體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)研究，首先由楊正鴻等[10]于1993年報(bào)道。在10 名健康志愿者單劑量口服合成α細(xì)辛腦片劑120 mg后，測得t1/ h，達(dá)峰時(shí)( tmax) h，峰濃度(cmax) 120 ngml–1，藥時(shí)曲線下面積(AUC) 149 nghml1，吸 2 收速度常數(shù)( Ka) h1，口服顯二室模型。該藥在人體內(nèi)吸收快，分布廣泛，但 存在較大的個(gè)體差異。 生物利用度楊正鴻[11]對(duì)12名健康受試者單劑量用藥后，通過HPLC法測定血藥濃度，測 定了α細(xì)辛腦片劑和膠囊劑在人體中的生物利用度。12名受試者的平均血藥濃度 時(shí)間曲線見附圖。附表列出了α細(xì)辛腦片劑和膠囊劑的絕對(duì)生物利用度, 分別為 %%?？梢姦良?xì)辛腦的絕對(duì)生物利用度極低。α細(xì)辛腦是脂溶性很強(qiáng)的 藥物，水溶性差可能是其生物利用度低的重要原因。故有必要對(duì)其生產(chǎn)工藝和處 方組成做一改進(jìn)。關(guān)于α細(xì)辛腦體外溶出速率與體內(nèi)生物利用度的相關(guān)性正待進(jìn) 一步研究中。0 α細(xì)辛腦藥時(shí)曲線 ○○注射劑(16 mg)；△△片劑(120 mg)；●●膠囊劑(120 mg) 0 α細(xì)辛腦生物利用度參數(shù) 劑型AUC0~∞F*TLagTmaxCmax(ngh/ml)(%)(h)(h)(ng/ml)注射劑396177。250片劑135177。118177。177。177。54177。55膠囊劑72177。70177。177。177。31177。40α細(xì)辛腦片劑的絕對(duì)生物利用度明顯高于膠囊劑(P ) , 膠囊劑與片劑 %。究其原因, 可能是生產(chǎn)過程中α細(xì)辛腦的粒度、輔 料及工藝不同造成。α細(xì)辛腦的吸收迅速, 口服后滯留時(shí)間均較小, 達(dá)峰時(shí)較快。 靜脈給藥平均藥時(shí)曲線最佳擬合為三室模型(權(quán)重選擇1/C2) , 口服給藥最佳擬合 則為二室模型(權(quán)重選擇1/C2)。實(shí)驗(yàn)證明α細(xì)辛腦片劑和膠囊劑的絕對(duì)生物利用 度不僅低, 而且個(gè)體差異很大, 有待進(jìn)一步研究。生物利用度低的產(chǎn)品，其吸收 3 更易受生理等因素變化的影響, 往往出現(xiàn)個(gè)體差異大的情況。 通過對(duì)12名健康受試者單劑量交叉給予人工合成的α細(xì)辛腦膠囊劑120 mg、片劑120 mg和針劑16 mg后，HPLC熒光法測定血藥濃度。結(jié)果發(fā)現(xiàn)膠囊劑和片 劑的絕對(duì)生物利用度極低，這可能與α細(xì)辛腦是脂溶性極強(qiáng)的化合物，且熔點(diǎn)低 有關(guān)。說明制成生物利用度高的固體制劑還有一定困難。 藥理作用 抗癌活性胡伯淵等[12]通過觀察人癌細(xì)胞的形態(tài)學(xué)改變、活細(xì)胞染色計(jì)數(shù)和測定細(xì)胞 生長率等方法，進(jìn)行了α細(xì)辛腦對(duì)人癌細(xì)胞株抗癌活性的定量研究。發(fā)現(xiàn)在α細(xì)辛腦的作用下，SGC7901，Detroit6和Hela人癌細(xì)胞發(fā)生變形，最終導(dǎo)致脫落、 破壞、溶解且生長稀疏，繁殖受到抑制，而環(huán)磷酰胺對(duì)照組的作用遠(yuǎn)較α細(xì)辛腦 弱。α細(xì)辛腦對(duì)SGC和D6細(xì)胞產(chǎn)生圓縮和脫落的時(shí)間可隨劑量加大而縮短，與對(duì) 照組相比有明顯差別。測得對(duì)SGC 細(xì)胞株有效抑制濃度(ED50)接近于25 181。gml 1。 對(duì)SGC細(xì)胞株的生長抑制，比環(huán)磷酰胺對(duì)照組強(qiáng)。在細(xì)胞接種48 h后，才將α細(xì) 辛腦(25 181。gml1) 加入到生長液中，6 萬ml1，而環(huán) 磷酰胺(100 181。gml1) 萬ml1。如果在細(xì)胞接種同時(shí)加入α細(xì)辛腦，則6 d 后的細(xì)胞染色計(jì)數(shù)可降到零， 萬ml1。研究顯示了α細(xì)辛 腦對(duì)SGC，D6和Hela等人癌細(xì)胞株有一定抗癌活性。 降血脂作用α細(xì)辛腦是肝內(nèi)HMGCoA還原酶的抑制劑，Pazed等[13]將成年雄鼠按80 mgkg1 的α細(xì)辛腦口服用藥8 d后，可降血漿中膽固醇38 %。α細(xì)辛腦的治療主 要是影響血漿中LDL，而HDL不受影響，結(jié)果是LDL∕HDL的比值降低74 %。此 結(jié)果說明α細(xì)辛腦可抑制脂類的合成和降血脂作用。Hernandez等[14]用成年鼠的肝細(xì)胞進(jìn)行體外試驗(yàn)，于培養(yǎng)物中加入10 mgml1 的α細(xì)辛腦1~2周后，發(fā)現(xiàn)各種脂類明顯減少。三酰甘油減少80 %~97 %，膽固 醇酯減少50 %~92 %，膽固醇減少64 %~70 %，磷脂減少70 %~87 %，磷酸鹽脫 氫酶和蘋果酸酶(由甘油脂類和脂肪酸合成的標(biāo)記酶)的活性也同樣分別減少22 %~50 %和30 %~70 %。此結(jié)果說明α細(xì)辛腦可明顯地抑制脂類的合成和分泌，具 有降血脂作用。Chamorro等[25]也用成年鼠肝細(xì)胞試驗(yàn)，同樣顯示了上述的結(jié)果。 并且作了動(dòng)物體內(nèi)的研究，對(duì)高血膽固醇癥模型雄性鼠，每日口服80 mgkg1，7 % %。 4 利膽作用α細(xì)辛腦能刺激高膽固醇大鼠的膽汁運(yùn)輸，增加膽鹽、磷脂和膽固醇的分泌， 它還能降低膽囊中膽固醇的水平，這是由于α細(xì)辛腦對(duì)膽結(jié)石細(xì)胞溶解酶的影響[13]。經(jīng)腸道給予1/5的LD50劑量(約136 mgkg1)的α細(xì)辛腦后，大鼠的膽汁引流量 可顯著升高，作用較去氫膽酸持久，但沒有去氫膽酸的膽汁后抑制現(xiàn)象。另一項(xiàng) %的大田鼠體內(nèi)的膽石[15]。 臨床應(yīng)用 止咳祛痰實(shí)驗(yàn)證明α細(xì)辛腦通過增強(qiáng)氣管纖毛運(yùn)動(dòng)，且能減少纖毛與粘液之間的粘附， 引起分泌物增加,使?jié)馓底兿?減低痰液粘滯，易于咳出；同時(shí)對(duì)咳嗽中樞也有較 強(qiáng)的抑制作用；從而達(dá)到顯著的祛痰、鎮(zhèn)咳目的，現(xiàn)已被臨床實(shí)驗(yàn)所證實(shí)[16]。劉露等[17]對(duì)有咳嗽、咳痰等癥狀的50例患兒在常規(guī)治療的基礎(chǔ)上輔以α細(xì)辛腦 注射液治療， ~ mgkg1d1，稀釋于5 %的葡萄糖注射液中,最大量不 超過24 mgd1稀釋于5 %%~%，靜脈 滴注，%。陳國水等[18]抽取112例喘息性疾病，按1∶1隨 機(jī)分組，其中治療組56例，對(duì)照組56例，~ mgkg1 d1 稀釋于5%或 10%的葡萄糖注射液