心肌肥厚動物模型建立方法研究進展doc(編輯修改稿)
2025-08-28 10:36 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 物疾病模型?；瘜W法誘發(fā)CH主要為藥物誘導法， 具有操作簡單、 耗時少、 形成快、 心肌病變明顯、 動物死亡率低的優(yōu)勢， 并能模擬機體腎上腺素分泌量增加導致CH的病理過程。具體來說， 藥物誘導主要通過注射給藥或植入滲透泵等方式， 持續(xù)性地給予某種藥物， 使受試動物在藥物的持續(xù)刺激下誘發(fā)CH。其機制是通過激活動物腎上腺素促進信號轉(zhuǎn)導通路和多種神經(jīng)內(nèi)分泌激素的形成， 如去甲腎上腺素 （NE） 、 異丙腎上腺素 （ISO） 等兒茶酚胺類能激動α、 β受體， 刺激心肌細胞內(nèi)調(diào)節(jié)蛋白DNA的合成， 促進蛋白合成、 膠原沉著、 心肌纖維化， 最后出現(xiàn)CH。白崇峰等 [22] 選用SD大鼠， mg/kg、 每日2次、 持續(xù)28 d形成CH模型； Chowdhury D等 [23]以ISO皮下注射、 5 mg/kg、 1 次/d、 14 d得到SD大鼠CH模型；Takeshita D 等 [24] 利用皮下植入 ISO 滲透泵方式， 考察了 （kg d） 、 3 mg/ （kg d） 、 7 d不同劑量的ISO對CH的影響， 結果顯示3 d和7 d不同ISO劑量誘導的CH形狀和功能無顯著性差異， 3 d的ISO劑量足以誘發(fā)CH。3 生物法生物法主要指通過動物自身的遺傳因素和轉(zhuǎn)基因技術獲得某種疾病模型的方法。該法復制CH模型主要有自發(fā)性高血壓大鼠 （SHR） 模型和轉(zhuǎn)基因CH動物模型。 SHR模型SHR多由基因遺傳決定。SHR大鼠在出生后， 血壓隨著鼠齡的增長而不斷升高， 4周齡時大鼠的心肌質(zhì)量即開始增加， 3～4個月時血壓即已穩(wěn)定升高， CH亦加重， SHR CH以左心室肥厚為主， 但亦可能伴發(fā)肺動脈高壓及右心室肥厚。有研究表明， SHR大鼠至14周齡時會出現(xiàn)明顯的左心室肥厚， 24周時進一步加劇， 但差異并不明顯 [25] 。Rysa J等 [26] 通過對SHR大鼠基因表達的觀察， 發(fā)現(xiàn)編碼細胞外基質(zhì)蛋白基因表達的增加與CH的發(fā)展有一定聯(lián)系。 轉(zhuǎn)基因型CH轉(zhuǎn)基因動物維持著遺傳背景的高度真實， 故通過轉(zhuǎn)基因動物研究得出的結論具有其他實驗系統(tǒng)所不具備的真實性；同時， 轉(zhuǎn)基因動物也是新的治療方法研究體系和新的藥物篩選系統(tǒng)。轉(zhuǎn)基因型CH模型的建立為CH等心血管疾病的研究提供了更新、 更全面的舞臺。 肌球蛋白突變模型 肌球蛋白由2條重鏈 （MHC） 和2條輕鏈 （MLC） 組成， MHC分α、 β 2種亞型。小鼠αMHC基因第403密碼子產(chǎn)生錯義突變， 即R403Q。小鼠模型表現(xiàn)為肌細胞排列紊亂、 纖維化、 心臟功能障礙， 且雌性的病理變化比雄性更顯著， CH局限于左心房。R403Q是首個發(fā)現(xiàn)的與家族性心肌病 （FHC） 相關的突變基因。Lowey S等 [27] 研究顯示， 在小鼠αMHC和βMHC中R403Q突變將對CH產(chǎn)生相反的作用：小鼠αMHC中R403Q突變使小鼠肌動蛋白絲滑行速度增加，而βMHC中R403Q突變的小鼠肌動蛋白絲滑行速度下降。 肌球蛋白結合蛋白C （MYBPC） 突變模型 MYBPC突變可導致CH， 突變類型為插入、 缺失或剪接位點突變， 導致肌球蛋白和肌聯(lián)蛋白結合位點缺少。Cheng Y等 [28] 通過基因敲除技術， 將小鼠心肌上MYBPC基因敲除， 導致肌小節(jié)收縮功能障礙和結構破壞， 從而影響小鼠心肌收縮與心室結構改變，證實MYBPC基因敲除會影響心肌收縮和心室重構， 誘發(fā)代償性心肌肥大。 肌鈣蛋白T突變模型 董偉等 [29] 用反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應擴增人心肌肌鈣蛋白T （cTnT） 全長互補DNA （cDNA） ， 用點突變方法使cDNA在275堿基產(chǎn)生G→A的突變， 編碼的氨基酸由精氨酸 （Arg） 突變?yōu)楣劝滨０?（Gln） ， 將cTnT R92Q （cTnT基因第92密碼子產(chǎn)生錯義突變， 即R92Q） 基因克隆入小鼠心臟特異表達的αMHC的下游構建cTnT R92Q轉(zhuǎn)基因載體。然后， 用顯微注射法將線性化的轉(zhuǎn)基因載體注射到C57BL/6J （小鼠品系， 純系） 小鼠的受精卵中。待小鼠出生后9月齡cTnTR92Q轉(zhuǎn)基因小鼠的心臟進行病理解剖， 觀察到cTnT R92Q轉(zhuǎn)基因小鼠的心臟明顯大于同窩陰性小鼠， 表明CH造模成功。轉(zhuǎn)基因動物模型在分子、 細胞和整體水平上有機結合起來， 為研究人類疾病、 揭示各個基因的各種功能起到了重大作用； 而且， 轉(zhuǎn)基因動物模型的建立為人類疾病的深入研究開辟了新的思路， 有助于認識疾病的本質(zhì)、 確定治療方案及藥物開發(fā)。但同時， 轉(zhuǎn)基因動物模型研究耗時較長、 費用昂貴， 因而受到了一定限制。4 結語近年來， 國內(nèi)外學者采用物理、 化學、 生物等方法建立的各種CH動物模型， 均能較好地模擬人類心肌疾病的發(fā)病過程， 并隨著研究不斷深入， 實驗的成功率、 仿真度等都在逐漸提高。在這些模型中， 目前使用最廣的是通過部分縮窄主動脈這一經(jīng)典的造模方法， 是目前研究CH較為理想的模型。此外， 轉(zhuǎn)基因CH小鼠也逐漸參與到CH疾病研究的過程中來， 為研究CH提供了一種新的工具， 并且在分子水平更深的層次上實現(xiàn)CH疾病模型的復制， 突破了傳統(tǒng)造模方式受外界因素的干擾。轉(zhuǎn)基因CH小鼠模型的建立在其功能及與疾病關系的研究中具有廣闊的應用前景。筆者相信， 隨著人類對轉(zhuǎn)基因技術理論與實踐研究的深入， 轉(zhuǎn)基因動物模型可能將會成為未來發(fā)展的方向。參考文獻[ 1 ] Yang FY， Liu Z， Wang YJ，
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