大腸桿菌耐藥株的體外誘導(dǎo)及其acra和mara基因分析doc(編輯修改稿)
2024-08-28 05:40 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 氧氟沙星 Ofloxacin 甲砜霉素 Clinfenicol 16 頭孢噻肟 Antibacterial 諾氟沙星 Norfloxacin 阿米卡星 Amikacin 32四環(huán)素 Tetracycline 4 頭孢西丁 Cefoxitin 環(huán)丙沙星 Ciprofloxacin 土霉素 Oxytetracycline 8 鏈霉素 Streptomycin 64 妥布霉素 Tobramycin 8氯霉素 Chloramphenicol 16 小諾霉素 Micronomicin 1 利福平 Rifampicin 32 表2 誘導(dǎo)菌株的MIC變化Table2 Change for MIC of induced strains 受試藥物antibacterial agents誘導(dǎo)后MIC提高倍數(shù)Increasing power of MIC after induction 四環(huán)素誘導(dǎo)株 環(huán)丙沙星誘導(dǎo)株 氯霉素誘導(dǎo)株strains of Tetracycline strains of Ciprofloxacin trains of Chloramphenicol青霉素鉀Benzylpenicillin K 8 0 2頭孢噻肟Antibacterial 256 8 8四環(huán)素Tetracycline 128 2 0土霉素Oxytetracycline 16 2 0氯霉素Chloramphenicol 4 2 0利副平Rifampicin 4 0 0甲砜霉素Clinfenicol 16 0 0環(huán)丙沙星Ciprofloxacin 4 0 0氧氟沙星Ofloxacin 8 2 2諾氟沙星Norfloxacin 8 2 2頭孢西丁Cefoxitin 4 1 0鏈霉素Streptomycin 1 0 0小諾霉素Micronomicin 1 2 2妥布霉素Tobramycin 0 0 0阿米卡星Amikacin 0 0 1 陽(yáng)性克隆的篩選結(jié)果轉(zhuǎn)化平板經(jīng)過(guò)16~20h 37℃的倒置培養(yǎng)，出現(xiàn)了稀疏的藍(lán)色和白色的克隆菌落。其中藍(lán)色菌落為陰性克隆，為T(mén)載體自身環(huán)化所產(chǎn)生。白色的菌落為疑似陽(yáng)性克隆，需做進(jìn)一步的鑒定。 克隆質(zhì)粒的PCR鑒定分別利用擴(kuò)增引物，PCR鑒定各克隆質(zhì)粒，結(jié)果可見(jiàn)到特異目的帶，見(jiàn)圖4。 克隆質(zhì)粒的酶切鑒定將經(jīng)過(guò)PCR鑒定篩選出的疑似陽(yáng)性克隆質(zhì)粒acrA－pGEM－T和marA－pGEM－T進(jìn)行NcoⅠ和NotⅠ雙酶切，%瓊脂糖凝膠電泳，結(jié)果在約2974bp、1220bp和416bp處分別出現(xiàn)特異的載體、acrA和marA的目的片段。見(jiàn)圖圖6。 acrA、marA基因序列的測(cè)序結(jié)果由DNAsis軟件分析測(cè)序結(jié)果表明，acrA和marA克隆質(zhì)粒序列，在ATCC2592SEMR和SEICI都一致，與GenBank中發(fā)表序列同源性為100%，acrA和marA基因在四環(huán)素誘導(dǎo)株和環(huán)丙沙星誘導(dǎo)株均沒(méi)有發(fā)生突變。3 討論普遍的觀點(diǎn)認(rèn)為，抗
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