中草藥抗耐藥性大腸桿菌的抑菌初步實驗研究(編輯修改稿)
2024-10-08 08:08 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 激素相似的作用，并能減輕或防止、消除外激素的毒副作用，而被認為是類激素樣作用物；抗應(yīng)激作用，目前在防治家畜應(yīng)激綜合征的研究中，發(fā)現(xiàn)一些中草藥有提高機體防御抵抗力和調(diào)節(jié)緩和應(yīng)激的作用；毒副作用小，不易產(chǎn)生耐藥性，具有改善畜禽產(chǎn)品品質(zhì)的作用，中草藥所含絕大多數(shù)成分對畜禽有 益無害，即是是用來防止疾病的一些有毒中草藥，亦可以經(jīng)自然炮制或精制提取和科學配方而使毒性減弱或消除。 [56] 正 文 實驗儀器與材料 ：黃連、黃芩、夏枯草、秦皮、苦參、甘草、石榴皮、連翹、黨參、大黃（均購于市場） 、大腸桿菌菌液（由江西中醫(yī)藥大學實 驗室提供） 水煎劑的制備 ： [7] 將草藥烘干后各稱取 100g 加水 1— 2L，浸泡 30min 后煎煮，煮沸后文化煎 30min，用紗布過濾藥液，藥渣加水 — 煮沸后煎 30min，過濾藥液，合并兩次藥液，濃縮、離心后定容至生藥濃度為 ，并消毒滅 菌備用。 中藥提取物藥敏紙片的制備 ： 將普通定性濾紙用打孔機打成若干圓形紙片，直徑 6mm，置于干燥潔凈的試管內(nèi)，放入高壓蒸汽滅菌器中，經(jīng) 121℃ 1520min 高壓滅菌后，取出，放入干燥箱內(nèi)進行干燥，然后取經(jīng)干燥后的紙片一定數(shù)量，分別放入各種中藥提取液中，浸泡 40min，取出放置在超凈臺內(nèi) 24 h，晾干置 4 ℃冰箱內(nèi)保存?zhèn)溆?。 培養(yǎng)基： MH 瓊脂、麥康凱瓊脂、營養(yǎng)肉湯 （ 均購于北京奧博星生物技術(shù)責任 有限公司） 營養(yǎng)肉湯 ：稱取 18g 加入 1000mL 蒸餾水，加熱煮沸溶解， 121℃高壓滅菌 15min 備用。 麥康凱瓊脂 ：稱取 52g 加入 1000ML 蒸餾水中， 116℃高壓滅菌 20min。 營養(yǎng)瓊脂 ：稱取 45g，加入 1L 蒸餾水中， 121℃高壓滅菌備用。 江西中醫(yī)藥大學畢業(yè)論文 5 糖發(fā)酵培養(yǎng)基的制備方法 試劑 蛋白胨 NaCl %溴甲酚紫乙醇溶液 蒸餾水 用量 10g 5g 1~2mL 1000mL pH 另配 20%糖溶液（葡萄糖，乳糖）各 10mL。 制法 : ⑴ 將上述含指示劑的蛋白胨水培養(yǎng)基（ ）分裝于試管中 ,在每管中放一倒置的小玻璃管。 ⑵將已分裝好的蛋白胨水和 20%的各種糖溶液分別滅菌，蛋白 胨水 121℃滅菌 20min；糖溶液 112℃滅菌 30 分鐘。 ⑶滅菌后，每管以無菌操作分別加入 20%的無菌糖溶液 (按每 10mL 培養(yǎng)基中加入 20%的糖液 ，則成 1%的濃度 )。 配制后的試管必須洗干凈，避免結(jié)果混亂。 蛋白胨水培養(yǎng)基的制備方法 121℃ 滅菌 20min。 試劑 蛋白胨 NaCl 蒸餾水 用量 10g 5g 1000mL pH 葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基的制備方法 試劑 蛋白胨 葡萄糖 K2HPO4 蒸餾水 用量 5g 5g 2g 1000mL 將上述各成 分溶于 1000mL 水中，調(diào) ~，過濾。分裝試管，每管 10mL， 112℃滅菌 30 分鐘。 細菌純化培養(yǎng)： 無菌條件下將保存的大腸桿菌涂布麥康凱瓊脂平板， 37℃培養(yǎng) 12h16h 后挑菌于營養(yǎng)肉湯， 37℃再培養(yǎng) 12h16h，保存?zhèn)溆谩? 在無菌操作臺內(nèi)，將接種環(huán)用酒精燈灼燒滅菌并冷卻后，在 LB 培養(yǎng)平板（大腸桿菌）中挑選單個菌落，伸入液體培養(yǎng)基試管中，在接近液面的管壁上輕輕研磨，并沾取江西中醫(yī)藥大學畢業(yè)論文 6 少量肉湯調(diào)和，使菌混合于肉湯中，并塞好瓶塞。將接種后的 LB 培養(yǎng)基試管（ 5mL 培養(yǎng)基）放入恒溫搖床（ 37℃， 250 次 /分）過夜。 大腸 細菌的 生化鑒定試驗： [8] a、糖發(fā)酵試驗 取可疑菌分別接種葡萄糖、乳糖、麥芽糖、甘露醇和蔗糖發(fā)酵管，37℃培養(yǎng) 2～ 3d，觀察各管產(chǎn)酸產(chǎn)氣情況。 b、甲基紅（ MR）試驗 取可疑菌接種葡萄糖蛋白胨水， 37℃培養(yǎng) 2～ 3d，加入 甲基紅試劑兩滴，立即觀察結(jié)果，紅色者為陽性，黃色者為陰性。 c．吲哚試驗 取可疑菌接種至蛋白胨水培養(yǎng)基中， 37℃培養(yǎng) 2～ 3d。先加入 34滴乙醚，塞緊棉塞振搖試管，使乙醚與培養(yǎng)液充分混勻，靜置試管架上片刻，待乙醚浮于液面上層時，沿管壁加入吲哚試劑 2～ 3 滴，在接觸面呈紅色者即為陽性反應(yīng)。 d．
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