酵母擴大培養(yǎng)過程關鍵控制點(編輯修改稿)
2025-08-26 03:37 本頁面
【文章內容簡介】 過程中，不同的擴大比，會影響到起始細胞濃度、擴陪時間、酵母菌齡一致性以及在擴大培養(yǎng)中抵抗雜菌污染的能力。擴大比遵循的原則如下:在漢生罐以前各級，由于采用較高培養(yǎng)溫度（25～27176。C），酵母倍增時間短，無菌操作條件好，可采用1:10～20；反之，漢生罐以后各級，采用低溫培養(yǎng)（不大于13176。C），酵母倍增時間長，雜菌污染機會多，擴大比宜小，一般1:4～5。五、 恰當?shù)囊品N時間酵母在一次培養(yǎng)基中培養(yǎng)，將經(jīng)歷滯緩期、對數(shù)生長期、穩(wěn)定期、死亡期等階段。我們都清楚在對數(shù)期移種，可獲得出芽最多、死亡率最低、最強壯的種細胞，而滯緩期最短，增殖最旺盛。困難在于如何判別接種后的對數(shù)期。1)培養(yǎng)時間估算法在優(yōu)良麥汁培養(yǎng)基中，正確的擴大培養(yǎng)，酵母飽和期細胞數(shù)可達到～107個/ml，在對數(shù)后期移種濃度一般在～107個/ml。若采用10176。C培養(yǎng)，世代時間為9h，接種后細胞濃度為107個/ml，規(guī)定移種細胞濃度為107個/ml。酵母在對數(shù)增殖期遵循如下公式：=A。式中n增殖次數(shù)；A移種細胞濃度；a0起始增殖細胞濃度，不等于起始細胞濃度，一般接種后僅有50%以下細胞能出芽增殖，余下細胞雖然可能是活細胞，但不出芽。)設a0=10750%，則培養(yǎng)時間t=t0+ntm式中t0滯緩期時間（h），和培養(yǎng)溫度有關，10176。C培養(yǎng)一般為1～13h，取8h；n增殖次數(shù)；tm酵母在培養(yǎng)溫度下倍增時間（h）。則t=8+=，若采用12176。C培養(yǎng)，則t0=6h，tm=6h，t=6+6h；由上計算，如在10176。C培養(yǎng)需38h，如12176。C培養(yǎng)培養(yǎng)26h移種。2)降糖判別法啤酒酵母在1112176。P麥汁中通風培養(yǎng)，當酵母使麥汁還原糖降至1/32/5時，酵母增殖曲線一般在對數(shù)的中期或中偏后，此時外觀泡沫最高并開始下降。結合鏡檢，漢生罐出芽率45～50%、細胞數(shù)經(jīng)通風攪拌后約～107個/ml，死亡率在0～1%。增殖罐出芽率在35～45%，細胞數(shù)在～107個/ml，死亡率在～%。對于凝聚性好的酵母，必須經(jīng)通風攪拌后取樣檢測細胞數(shù)。移種太早，雖然出芽率高，但細胞太嫩，不但會延遲下一級擴大培養(yǎng)時間，而且會增加下一級酵母的死亡率；移種太遲，雖然細胞數(shù)多，但出芽率低，下一級培養(yǎng)后酵母形態(tài)大小差異大。六、 嚴格控制培養(yǎng)條件1.無菌室的消毒與滅菌：1)每月一次酵母無菌室應經(jīng)常保持清潔，無灰塵，在使用前一個星期用甲醛和高錳酸鉀熏蒸滅菌。方法是按甲醛用量的一半稱取高錳酸鉀于一瓷碗或玻璃容器內，再量取定量的甲醛溶液，室內準備妥當后，甲醛液倒在盛有高錳酸鉀的器皿內，立即關門。幾秒鐘后、甲醛溶液即沸騰而揮發(fā)。高錳酸鉀是一種強氧化劑，當它與一部分甲醛液作用時，由氧化作用產生的熱可使其余的甲醛液揮發(fā)為氣體。2)每周一次另一種方法是用硫磺熏蒸，硫的殺菌作用要通過燃燒氧化后才得以實現(xiàn)，硫燃燒產生SO2，與水作用生成亞硫酸，它可以附著在菌體細胞上，奪取菌體的氧形成硫酸，同時使微生物脫氧，造成死亡。燃燒硫磺的方法是將硫磺粉放在小鐵合內，倒入少量酒精，然后點火燃燒，此時SO2氣體散布于空氣中。二氧化硫具有強烈的
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