【文章內(nèi)容簡介】 酸緩沖液沖洗3～4次，然后，立即將其投入4℃的3％戊二醛溶液（）中固定24～48h。取出洗滌，經(jīng)適當修剪后，放入1％的鋨酸鐘后固定1小時，取出后緩沖液洗三次。乙醇系列梯度脫水，醋酸異戊酯置換，臨界點干燥，鍍膜(用常規(guī)掃描電鏡制備方法制備)，經(jīng)掃描電鏡觀察并攝影。2 試驗結果 前腸為第一個折點之前的部分，腸壁厚，腸管粗大，且硬度大，內(nèi)容物多；中腸為第一個折點至第二個折點之間的部分，腸壁較前腸為薄，腸管變小，內(nèi)容物較多；后腸為最后一個折點之后的部分，腸管較細，內(nèi)容物少，偶有充氣現(xiàn)象，沖氣時腸管呈微白色，中腸的長度明顯長于前腸和后腸，中腸是團頭魴消化、吸收食物的主要部位。解剖觀察到試驗用團頭魴腸道在腹腔中回旋盤轉(zhuǎn)，排列復雜，從前腸到后腸，腸管直徑逐漸變細，腸壁逐漸變薄。投喂酵母培養(yǎng)物XP的各試驗組的常規(guī)解剖觀察結果沒有顯著性的差異。 各試驗組團頭魴前腸粘膜褶皺掃描電鏡結果見圖版Ⅰ，前腸褶皺呈S或Z型,排列較為緊密。由圖Ⅰ可見，從XP 1500mg/kg組開始，隨著酵母培養(yǎng)物XP添加量的增加, 前腸褶皺排列更加逐漸緊密；褶皺表面粘附的食糜顆粒在XP1000mg/kg組有明顯的增加，在2000mg/kg和2500mg/kg組更為明顯；相同XP使用的連續(xù)與間斷組相比較，間斷組褶皺表面食糜顆粒明顯少于對應連續(xù)試驗組。各試驗組團頭魴中腸粘膜褶皺掃描電鏡結果見圖版Ⅱ。對照組粘膜褶皺表面粘附的食糜顆粒較多，隨著酵母培養(yǎng)物XP添加量的增加, 粘膜褶皺排列更加逐漸緊密，尤其是在XP 2000mg/kg組中腸褶皺排列更為緊密；各組表面附著顆粒也明顯比前腸減少；相同XP使用的連續(xù)與間斷組相比較，間斷組褶皺形狀逐漸變直，粘膜褶皺排列更加緊密。上述結果表明，在飼料中添加酵母培養(yǎng)物XP后，前腸、中腸的粘膜褶皺排列有更為緊密的趨勢，在XP 1500mg/kg組和2000mg/kg組最為明顯，而在低劑量組（如500mg/kg組）和高劑量組（如2500mg/kg組）不明顯；間斷投喂組與連續(xù)投喂組相比較，在中腸的粘膜褶皺排列有更為緊密的趨勢。各試驗組的前腸粘膜掃描電鏡結果見圖版Ⅲ。根據(jù)各組電子顯微鏡照片，選取適宜的區(qū)域統(tǒng)計絨毛的數(shù)量，并計算絨毛的密度，結果見圖表2。表2 團頭魴腸道微絨毛密度（個／um2） the density of intestinal villus of Megalobramaamblycephala組別group前腸密度 個／um2villus density of foregut 中腸密度 個／um2villus density of midgut 前、中腸平均密度 個／um2average villus density 0 mg/kgthe control group500 mg/kgthe series group1000 mg/kgthe series group1500 mg/kgthe series group2000 mg/kgthe series group2500 mg/kgthe series group1000 mg/kg間斷組 the disconnected group 2000 mg/kg間斷組the disconnected group結合圖Ⅲ和表2結果，前腸對照組的絨毛密度較低少，其它各試驗組粘膜絨毛的密度隨酵母培養(yǎng)物XP的增加而有明顯的變化，其中酵母培養(yǎng)物XP1500 mg/%，為最高；酵母培養(yǎng)物XP 2000 mg/kg連續(xù)組和2000 mg/%%，而其它各組均無明顯提高；相同XP使用的連續(xù)與間斷組相比較，酵母培養(yǎng)物XP 1000 mg/%，而2000 mg/%。各試驗組的中腸粘膜掃描電鏡結果見圖版Ⅳ。中腸對照組的絨毛排列也較為均勻，表面附著食糜顆粒較少，其它各試驗組絨毛的密度均比對照組有所提高，其中連續(xù)組1500的絨毛密度最大，%，%～%之間；%%。從前、中腸綜合考慮來說，團頭魴腸道微絨毛呈規(guī)則的六邊形簇狀分布，前、中腸微絨毛密度基本相同。添加酵母培養(yǎng)物XP后，各試驗組與對照組相比，絨毛密度有不同程度的提高，其中以連續(xù)組1500的效果最好，%，其中間斷使用效果與連續(xù)使用相比并無顯著差異。在攝食添加酵母培養(yǎng)物XP的飼料后，前腸、中腸粘摸粘膜絨毛密度均有不同程度的增加；前腸和中腸相比較，中腸粘摸粘膜絨毛密度變化較前腸的結果更顯著；連續(xù)投喂組與間斷投喂組相比較，在前腸XP 1000 mg/%，而2000 mg/%，%%。各試驗組的前腸、中腸粘膜斷面掃描電鏡結果見圖版Ⅴ、Ⅵ。根據(jù)電子顯微鏡照片，選取適宜的區(qū)域統(tǒng)計絨毛的高度，結果見圖表3。表2 團頭魴腸道粘膜絨毛高度（um） The height of the intestinal villus of Megalobramaamblycephala組別group前腸絨毛高度 umheight of foregut villus中腸絨毛高度 umheight of midgut villus前、中腸平均高度 umaverage height of villus0 mg/kgcontrol group1000 mg/kgthe series group2000 mg/kgthe series group2500 mg/kgthe series group1000 mg/kg間斷組the disconnected group2000 mg/kg間斷組 the disconnected group從表3中我們可以看出，前腸微絨毛高度的變化受酵母培養(yǎng)物的增加而具有顯著的變化，其中連續(xù)組2000mg/kg和間斷組1000mg/%%，其它各組則出現(xiàn)了不同程度的下降。而間斷組1000mg/kg、2000mg/%%。 中腸呈現(xiàn)同樣的變化趨勢，其中連續(xù)組2000mg/kg和2500mg/%%，其它各組也出現(xiàn)了不同程度的下降，間斷組1000mg/kg與2000mg/%%。前、中腸綜合考慮來說，團頭魴腸絨毛高度的順序為中腸前腸，這與聶國興[1]等（2007）在小麥基礎飼料添加木聚糖（xylan）酶后對尼羅羅非魚腸道絨毛的影響得出的結論相似：腸絨毛高度的順序為中腸前腸后腸。添加了酵母培養(yǎng)物，腸道粘膜絨毛高度發(fā)生顯著性的變化，連續(xù)組2000mg/%外，其它各組均出現(xiàn)了高度降低的現(xiàn)象，但差異并不明顯。間斷組絨毛高度與相應連續(xù)組相比出現(xiàn)明顯的降低趨勢，表明間斷使用效果不如連續(xù)使用。3 討論腸道是機體與外界環(huán)境接觸表面積最大的器官，也是營養(yǎng)物質(zhì)消化和吸收的主要場所，同時腸粘膜屏障系統(tǒng)具有阻礙腸腔內(nèi)細菌入侵和毒素吸收的功能，因此腸粘膜形態(tài)結構和功能的正常對動物機體來說是十分重要的。腸道粘膜屏障主要由腸道粘膜機械屏障、免疫屏障、化學屏障和生物屏障四部分組成，這些功能分別有相應的結構基礎，如機械屏障由腸道粘膜上皮細胞、細胞間緊密連接等構成，能有效阻止細菌穿透粘膜進入深部組織。腸道粘膜上皮的完整性及正常的再生能力是腸粘膜屏障的結構基礎。腸道粘膜絨毛的發(fā)育主要取決于養(yǎng)殖動物的生理狀況和飼料營養(yǎng)條件，此外，腸道環(huán)境也是影響絨毛發(fā)育的主要因素。許多研究表明酵母培養(yǎng)物對動物腸道形態(tài)結構具有改善作用。張運濤等(2000)對蛋用仔雞在大腸桿菌攻毒條件下，酵母培養(yǎng)物對小腸粘膜的保護作用進行了研究，掃描電鏡觀察表明，對照組小腸絨毛變形、微絨毛脫落，而試驗組小腸絨毛和微絨毛生長發(fā)育正常。Garyl(1998)飼喂酵母培養(yǎng)物后公雞回腸絨毛杯狀細胞減少、腺窩深度減小，并認為這是由于飼喂酵母培養(yǎng)物飼料后腸道細菌產(chǎn)生的有毒物質(zhì)減少的結果。 劉觀忠等（2005）研究發(fā)現(xiàn)添加酵母培養(yǎng)物對蛋雛雞小腸絨毛長度的影響不顯著,但具有增加絨毛長度的趨勢。酵母培養(yǎng)物XP的主要構成物質(zhì)包括：酵母菌體物質(zhì)，酵母細胞外的代謝產(chǎn)物如括肽、有機酸、寡糖、氨基酸、核苷酸、維生素、芳香物質(zhì)、“未知生長因子”等，活酵母細胞，殘余的培養(yǎng)基等。XP主要有效活性物質(zhì)是酵母次級代謝產(chǎn)物，這類物質(zhì)的主要作用對象是腸道微生物，能夠促進益生菌的生長而抑制有害菌的生長。同時，酵母培養(yǎng)物XP能夠促進腸道粘膜的生長發(fā)育和再生能力，這寫作用可以使養(yǎng)殖魚類在不良的內(nèi)、外環(huán)境下也能夠維持正常的生理機能，并獲得良好的生產(chǎn)性能。本試驗中，團頭魴在攝食以酵母培養(yǎng)物XP作為變量因素的飼料100天后，腸道粘膜絨毛的高度、密度變化非常顯著。添加酵母培養(yǎng)物XP后，各試驗組與對照組相比，絨毛密度有不同程度的提高，其中以連續(xù)組1500mg/kg的效果最好，%%，%，而間斷使用效果與連續(xù)使用相比并無顯著差異。在相同試驗組中，腸絨毛密度變化的順序為中腸前腸。添加了酵母培養(yǎng)物XP，腸道粘膜絨毛高度發(fā)生顯著性的變化，前腸連續(xù)組2000mg/%，中腸連續(xù)組2500mg/%，其它各組均出現(xiàn)了高度變化現(xiàn)象，但差異并不明顯。間斷組絨毛高度與相應連續(xù)組相比出現(xiàn)明顯的降低趨勢，表明間斷使用效果不如連續(xù)使用。綜上所述，在團頭魴基礎飼料中添加酵母培養(yǎng)物XP可以顯著改善腸道粘膜結構的發(fā)育，適宜的添加量可以顯著促進腸道粘膜絨毛的生長，對維持腸道粘膜的完整性和再生能力具有非常重要的作用和意義。主要表現(xiàn)為腸道粘膜褶皺的排列更為緊密，前腸、中腸粘膜絨毛密度排列更為緊密，前腸、中腸粘膜絨毛高度有顯著的提高。在飼料中添加酵母培養(yǎng)物XP對團頭魴前腸和中腸粘膜發(fā)育和完整性具有良好作用的適宜添加量為1500mg/kg～2000mg/kg。相同XP使用的連續(xù)與間斷組相比較，以連續(xù)投喂含有酵母培養(yǎng)物XP飼料的團頭魴腸道粘膜褶皺、絨毛密度、絨毛高度變化更為顯著。參考文獻：[1] 聶國興，王俊麗，朱命煒，、微絨毛發(fā)育的影響[J]. 水產(chǎn)學報, 2007,1(1):546110] 劉觀忠,安勝英,姜國均,[J].中國畜牧獸醫(yī),2005,32(2):10 12.酵母培養(yǎng)物對團頭魴生長的影響李高鋒 收稿日期：作者簡介：李高鋒（1983），男，漢，河南省襄城縣人，廣州市澳洋實業(yè)有限公司，碩士，主要從事水產(chǎn)動物營養(yǎng)與飼料學方面的研究。Email:lgf1983@作者簡介：葉元土（1964），男，漢，四川廣安人，蘇州大學基礎醫(yī)學與生物科學學院，教授，主要從事水產(chǎn)動物營養(yǎng)與飼料學方面的研究。Email：yeyuant@ *通訊作者：葉元土，Email：yeyuant@，2 葉元土1* 張俊1 蔡春芳1 李婧1 諸葛燕1 甑玉國3，蘇州 215123；，廣州 5105453；，深圳 518038摘 要：本試驗通過不同劑量梯度（0、500、1000、1500、2000、2500mg/kg）的酵母培養(yǎng)物連續(xù)投喂組和（1000、2000mg/kg）兩個間斷投喂組對團頭魴的養(yǎng)殖試驗，研究酵母培養(yǎng)物在團頭魴養(yǎng)殖中的適宜添加量及其對生長、飼料效率、蛋白質(zhì)效率的影響，同時比較分析酵母培養(yǎng)物在養(yǎng)殖過程中連續(xù)投喂與間斷投喂對生長等方面的影響。選用初重為9g左右的團頭魴，隨機分為8組、每組3個重復，每個養(yǎng)殖桶15尾魚，以0mg/kg的投喂組為對照組，飼養(yǎng)100天，定期稱重取樣。試驗結果表明，連續(xù)投喂組2000mg/kg的特定生長率SGR最高，且連續(xù)投喂組SGR均顯著高于對應的間斷投喂組（P）；飼料系數(shù)FCR是連續(xù)投喂組2000mg/kg的最低，且連續(xù)投喂組FCR均低于對應的間斷投喂組；蛋白質(zhì)效率 (PER) 以連續(xù)投喂組2000mg/kg的最高，且連續(xù)投喂組(PER)均高于對應的間斷投喂組（P）；各組肥滿度之間無顯著差異（P），但內(nèi)臟指數(shù)均明顯小于對照組（P），魚體可食部分明顯增加（P）；各組魚肌肉、肝胰臟、全魚中的蛋白含量均顯著高于對照組（P），且連續(xù)投喂組均高于對應間斷投喂組，連續(xù)投喂組2000mg/kg肌肉中蛋白最高?？梢哉J為：在團頭魴飼料中，以2000mg/kg的酵母培養(yǎng)物添加劑量為適宜添加量，且連續(xù)使用的效果好于間斷使用。 關鍵詞：酵母培養(yǎng)物；生長；團頭魴酵母培養(yǎng)物是一種復雜的發(fā)酵產(chǎn)品，它是根據(jù)微生物代謝理論及生物發(fā)酵技術生產(chǎn)的含有多種代謝產(chǎn)物成分的純天然產(chǎn)品。在反芻動物、豬、禽養(yǎng)殖領域應用較為普遍并為人們所熟悉，但在水產(chǎn)養(yǎng)殖生產(chǎn)在中的應用相對較晚，作為一種天然的發(fā)酵產(chǎn)品，酵母培養(yǎng)物在維持魚蝦的存活能力和促進魚蝦的生長方面具有相當大的應用潛力，同時，由于具有良好的耐熱性、不受制粒加工的影響，因此在水產(chǎn)飼料中添加使用非常方便。目前為止，國內(nèi)外對酵母培養(yǎng)物在魚類養(yǎng)殖生產(chǎn)中的應用方面還僅局限于鯉魚、鰱魚、斑點叉尾鮰、銀鯽、羅非魚、鰻魚、牙鲆、紅鱒魚等幾個魚種。而在蝦養(yǎng)殖生產(chǎn)的應用方面則主要集中在南美白對蝦和沼蝦兩個品種上[1,2,3]。團頭魴是我國特有的淡水名優(yōu)經(jīng)濟魚類，作為養(yǎng)殖試驗對象，對酵母培養(yǎng)物的開發(fā)利用具有重大意義。本試驗通過不同劑量梯度連續(xù)投喂組和間斷投喂組對團頭魴的養(yǎng)殖試驗，研究酵母培養(yǎng)物在團頭魴養(yǎng)殖中的適宜添加量及其對生長、飼料效率、蛋白質(zhì)效率的影響，同時比較分析酵母培養(yǎng)物在養(yǎng)殖過程中連續(xù)使用與間斷使用的養(yǎng)殖效果，為團頭魴配合飼料的優(yōu)化提供理論依據(jù)。1 材料與方法 試驗魚及分組團頭魴為當年池塘養(yǎng)殖魚種，177。，體質(zhì)健壯。按體重接近的原則隨機分為8組，每組均設3個平行，共24個養(yǎng)殖桶，每桶放魚15尾。 試驗飼料使用生產(chǎn)實用飼料原料組成試驗配方，粗蛋白質(zhì)含量均為28%，見表1。主要原料為進口魚粉、豆粕、棉粕、菜粕、麥麩、面粉、混合油（豆油菜油1：1）、預混料等。㎜的硬顆粒飼料,作為本試驗基礎飼料。共設0、500、1000、1500、2000、2500mg/kg的劑量梯度投喂組，1000、2000mg/kg兩個間斷投喂組，累計8個試驗組，每個試驗組設3個平行，合計24個養(yǎng)殖桶。酵母培養(yǎng)物在配方中增加時，相應減少面粉的用量，以保持配方總量的平衡。每個養(yǎng)殖桶與試驗飼料的對應采用隨機方法，以避免養(yǎng)殖桶位置不同帶來的養(yǎng)殖效果的差異。表1 基礎飼料配方和營養(yǎng)成分(風干基礎,%)Table 1 Formul