【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 掌。宋蘇頌《嘉祐圖經(jīng)本草》對(duì)虎掌的描述更加詳細(xì)，寫(xiě)道：虎掌生漢中 山谷及冤句，今河北州郡亦有之，初生根如豆大，漸長(zhǎng)大似半夏而扁，累年者根圓及寸， 大者如雞卵，周回生圓芽二三枚或五六枚，三月四月生苗，高尺余，獨(dú)蓬上有葉如爪，五 六出分布，尖而圓，一棄生七八塞。時(shí)出一基，作糖直上如鼠尾(指肉糖花序)，中生一葉 如匙(指佛焰荀)，裹蓬作房，傍開(kāi)一口，上下尖，中有花，微青揭色，結(jié)實(shí)如麻子，大熟 即白色，自落布地，一子生一巢，九月苗殘。*的遺待多樣性研究如前所述，半夏的分布范圍非常廣，國(guó)內(nèi)除青海、新疆、西藏內(nèi)蒙古等省外，其余各 省區(qū)都有分布。但是由于全國(guó)范圍內(nèi)半夏引種頻繁、生態(tài)環(huán)境的破壞、遺傳侵蝕作用及過(guò) 度不合理采挖等原因，導(dǎo)致了中國(guó)半夏資源蘊(yùn)藏量和產(chǎn)量都在大幅下降【2】，遺傳差異【3]十 分明顯，也使得半夏道地藥材出現(xiàn)了混滑，目前對(duì)于半夏遺傳多樣性研究也逐漸成為研究 的熱點(diǎn)。研究表W夏存在著豐富的遺傳多態(tài)性，對(duì)半夏遺傳多樣性的研究是保護(hù)半夏種質(zhì)資 源的核心之一，也為區(qū)域性優(yōu)良半夏種質(zhì)資源的蹄選與利用、提高半夏的繁殖力和質(zhì)量打 下基礎(chǔ)。 臨床用藥安全、遺傳育種及半夏規(guī)?；a(chǎn)奠定基礎(chǔ)。遺傳多樣性(geneticdiversity)—般指種內(nèi)的遺傳多樣性，即種內(nèi)個(gè)體之間或一個(gè)群休內(nèi) 不同個(gè)體的遺傳變異總和。遺傳變異、生活史特點(diǎn)、種群動(dòng)態(tài)及其遺傳結(jié)構(gòu)等定或影響著 一個(gè)物種與其它物種及其環(huán)境相互作用的方式。遺傳多樣性可以表現(xiàn)在多個(gè)層次上，如分 子、細(xì)胞、個(gè)休等。遺傳多樣性分析的方法常用的有：a) DNA標(biāo)記方法，包括小衛(wèi)星、ISSR(Intersimple sequence repeat polymorphisms)簡(jiǎn)單序列重復(fù)區(qū)間擴(kuò)增多態(tài)性技術(shù)、 SRAP(Sequencerelated amplified polymorphism)相關(guān)序列擴(kuò)增多態(tài)性技術(shù)【6】、特異DNA探 針雜交、AFLP(amplled fragment length polymorphism)擴(kuò)增片段長(zhǎng)度多態(tài)性技術(shù)【力、 RAPD(random amplified polymorphie DNA)隨機(jī)擴(kuò)增 DNA 多態(tài)性技術(shù)、 PCRRFLP(polymerase chain reaction restriction fragment length polymorphism)多聚酶鏈反應(yīng) 限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性【*】、等；b)同工酶【9]、等位酶分析；C)蛋白質(zhì)水平上，用凝膠電泳 技術(shù)檢驗(yàn)蛋白質(zhì)條帶的多態(tài)性(這是也比較常用的)；也可以直接蛋白質(zhì)測(cè)序，但是這個(gè)成 本高，并且有些蛋白測(cè)序難度大。本節(jié)將對(duì)近幾年對(duì)半夏遺傳多樣性研究的做一綜述。張理【101等利用ISSRPCR技術(shù)對(duì) 江蘇4個(gè)產(chǎn)地共20份野生半夏單株的遺傳多樣性進(jìn)行了研究，結(jié)果表明半夏存在較豐富 的遺傳變異，基因型豐富，具有較高的遺傳多態(tài)性，同時(shí)也有較高的地域性特征。楊要利 用ISSR和SRAP分子標(biāo)記技術(shù)對(duì)全國(guó)不同產(chǎn)區(qū)和表型的半夏進(jìn)行了研究，結(jié)果顯示半夏 ISSP帶型表現(xiàn)出很高的多態(tài)性，對(duì)半夏種質(zhì)資源的地域劃分有明息優(yōu)勢(shì)，ISSR和SRAP 技術(shù)都可用于評(píng)估半夏遺傳多樣性。張杰等利用AFLP技術(shù)對(duì)甘肅、浙江、江蘇等地 的半夏遺傳多樣性、親緣關(guān)系及種質(zhì)鑒別進(jìn)行了分析，研究結(jié)果顯示甘肅半夏資源有豐富 的遺傳多樣性，%,江浙地區(qū)半夏栽培品與其他地區(qū)栽培品有明顯 的遺傳獨(dú)立性。薛梅等也利用AFLP技術(shù)對(duì)采自我國(guó)30個(gè)不同地理居群的半夏遺傳多 樣性進(jìn)行了分析,揭示了我國(guó)半夏種質(zhì)資源豐富的遺傳多樣性，其平均多態(tài)性位點(diǎn)達(dá)91%, 。劉波【I4]等利用RAPD技術(shù)對(duì)不同群居半夏 的遺傳多樣性進(jìn)行了研究，結(jié)果表明在DNA 7jC平上遺傳多樣性較形態(tài)性狀表現(xiàn)的遺傳多 樣性豐富，也進(jìn)一步證明了不同居群半夏在DNA分子水平上明顯存在遺傳多樣性。同工酶技術(shù)也應(yīng)用于半夏遺傳多樣性的研究，張袖麗等【!5^[究指出同工酶可以鑒別不同種類(lèi)半 夏，可以作為鑒定原植物及其產(chǎn)地的生化指標(biāo)。郭巧生等【16】也對(duì)同一生境下的不同半夏居 群進(jìn)行了同工酶酶譜比較分析，他認(rèn)為，各居群間甚至同一居群內(nèi)同工酶酵譜除少數(shù)共有 特征譜帶外都存在較明顯的差異。Choi等【17]利用電泳技術(shù)對(duì)半夏外植體可溶性蛋白進(jìn)行了 研究，結(jié)果表明不同外植體可溶蛋白電泳譜型存在顯著的差異。但同工酶的研究還存在較 大的局限性，等位酶分析則能有更好的效果，同工酶是功能相同的一類(lèi)蛋白質(zhì)，但是它們 的編碼基因不同，因此并不能很好的反應(yīng)同種不同種群或近緣種間的遺傳多樣性關(guān)系；等 位酶是由同一個(gè)基因的不同等位基因編碼的，有進(jìn)化上的關(guān)系，更適合用于遺傳多樣性分 析。但目前利用等位酶分析半夏遺傳多樣性的研究還較少。半夏遺傳多樣性的研究為半夏的臨床用藥安全提供標(biāo)準(zhǔn)，但目前關(guān)于半夏可靠的分類(lèi) 鑒定方法尚沒(méi)有確定。1丄4半夏的AX栽培半夏是一味常用名貴中藥，主要靠采集野生資源提供商品，近年來(lái)由于國(guó)內(nèi)外對(duì)半夏 需求的不斷增長(zhǎng)，人們大量盲目采挖，致使野生半夏資源遭到嚴(yán)重破壞并額臨枯竭，因此 半夏的人工栽培也就顯得尤為重要。半夏塊基入藥歷史雖久，但是人工馴化栽培只是近幾十年的事。我國(guó)從70年代開(kāi)始 半夏的人工栽培研究，弁取得了成功，隨后在全國(guó)范圍內(nèi)進(jìn)行了引種推廣種植，山東、安 徽、河南、甘肅、四川、浙江等省在半夏的人工栽培方面都有較成熟的經(jīng)驗(yàn)，人工栽培技 術(shù)曰益成熟。由于我國(guó)出口的半夏不能滿足國(guó)內(nèi)外市場(chǎng)的需求，韓國(guó)和日本等80年代就 開(kāi)始了半夏的引種種植。近年來(lái)，隨著生物技術(shù)的發(fā)展，植物組織培養(yǎng)技術(shù)日績(jī)成熟，利用組織培養(yǎng)技術(shù)生產(chǎn) 高繁殖系數(shù)，品質(zhì)優(yōu)帛的半夏成為了解料夏縣矛jfln做航野生資源的有效途 徑。人工栽培在一定程度上緩解了半夏資源緊缺的狀況，但是目前半夏的供需矛盾仍曰趨 緊張，而且人工栽培面臨種質(zhì)資源退化、繁殖系數(shù)低、病毒病侵染、藥材質(zhì)量不穩(wěn)定和品 質(zhì)下降的同時(shí)也對(duì)半夏資源夠樣性構(gòu)成了挑戰(zhàn)?？蒲腥穗x對(duì)半夏快速 繁殖與培養(yǎng)體系的建立等方面進(jìn)行了大量研究，主要包括培養(yǎng)基的選擇、外植體的選擇、 植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)的選擇、再生器官發(fā)生的途徑等，并取得了一定的成果，但半夏的組織 培養(yǎng)還有不少向題需要更進(jìn)一步的探討研究。半夏性溫、味辛、有毒，自古以來(lái)被列為中藥毒品，歷代半夏入藥都需經(jīng)炮制緩解其 毒性。文獻(xiàn)記載半夏的炮制方法繁多，有關(guān)半夏炮制最早的記載是戰(zhàn)國(guó)時(shí)代《黃帝內(nèi)經(jīng)》 中的治半夏，既是經(jīng)過(guò)炮制的半夏。漢唐時(shí)代的湯洗、姜制、水煮、微火炮等法，從 宋到清代的制曲、研制、姜帆制、姜蘿卜制、姜甘草制、酒姜制、阜角研生姜制、法制、 姜青鹽制等炮制方法?，F(xiàn)行半夏炮制品主要有：生半夏、姜半夏、清半夏、法半夏。半夏 炮制后，能降低毒性’緩和藥性，消除副作用【2171。21]。半夏因炮制方法不同其功效而有差異， 生半夏有毒，使人嘔吐，Pg喉腫痛，失音，一般不作內(nèi)服，多外用于瘡?fù)茨[毒，進(jìn)?？人裕?姜半夏可增強(qiáng)降逆止嘔，以溫中化痰、降逆止嘔為主，用于疲飲嘔吐，胃院痛滿；淸半夏 可增強(qiáng)燥濕化痰作用’多用于濕瘋咳嗽、疲熱內(nèi)結(jié)，風(fēng)疲吐逆，疲誕凝聚，略吐不出；法 半夏偏于法寒痰，同時(shí)具有調(diào)和脾胃的作用，用于痰多咳嗽，痰飲弦棒，亦多用于成方制 劑中。不同胞制品具有不同的功能與主治，與其化學(xué)成分有密切的關(guān)系。張躍進(jìn)等【22]對(duì)現(xiàn) 行豐夏炮制品的化學(xué)成分含量進(jìn)行了測(cè)定，結(jié)果顯示，炮制半夏的化學(xué)成分與生豐夏相比 較，在生物堿、鳥(niǎo)帶、蛋白質(zhì)和總糖含量上都有所降低。郁紅禮等【23]則比較分析了半夏及 其炮制品中總游離有機(jī)酸的含量差異，結(jié)果指出半夏經(jīng)過(guò)炮制后，總游離有機(jī)酸含量有不 同程度提高。部菊英等[24]比較了半夏炮制前后HPLC圖譜，指出半夏經(jīng)炮制后化學(xué)成分存 在質(zhì)和量的變化。半夏炮制后化學(xué)成分的變化或新組分的產(chǎn)生與功效改變的關(guān)系，需要進(jìn) 一步研究，以便為了臨床用藥的安全而又能有效的保持藥效提供理論基礎(chǔ)。由于不同地區(qū)的用藥習(xí)慣，并且半夏臨床用量大、資源緊缺，市場(chǎng)出現(xiàn)了很多半夏偽 品，從中藥學(xué)角度而言，每味中藥、同一中藥的不同制品都各有其功效，不可浦用。因此， 為保證半夏臨床用藥有效且安全合理，半夏及其偽品的鑒別就顯得尤為重要了。目前主要 采用的鑒別方法有：性狀鑒別、顯微鑒別、理化鑒別及分子鑒別。半夏性狀特征：類(lèi)球形，有的稍扁斜。 Cm。表面乳白色或淺黃色，頂端 有基痕，周?chē)懿几?。底部純圓，較光滑。質(zhì)堅(jiān)實(shí)，斷面潔白，富粉性。氣微，味辛， 麻舌而刺喉飲片多呈圓形或桃圓形*半夏偽品可以此為鑒。半夏的顯微鑒別特征：粉末類(lèi)白色，淀粉粒較多，單粒類(lèi)球形或圓多角形，直徑為230胳點(diǎn)裂隙狀、三叉狀、人字狀或星狀稍偏心形。大?？梢?jiàn)層紋，復(fù)粒28分粒組成， 草酸1190。針晶眾多，針晶長(zhǎng)20?144^1111。導(dǎo)管多為螺紋，少數(shù)為環(huán)紋，多破碎【圳。半夏偽品 可以此為鑒。半夏的理化鑒別特征：趙正榮【27】對(duì)半夏及其偽品進(jìn)行了紫外光譜測(cè)定’發(fā)現(xiàn)半夏與其 偽品紫外吸收波長(zhǎng)有較大差別，半夏的紫外最大吸收波長(zhǎng)約在261nm處；高效液相色譜法 (HPLC)也是目前中藥鑒定的方法之一,吳睹等【28】利用該法研究發(fā)現(xiàn)半夏有一特征峰區(qū)別于 天南星、掌葉半夏和水半夏，可以該峰為標(biāo)準(zhǔn)鑒別半夏及其偽品。薄層色譜(TLC)也可用 于鑒別半夏黃亞芳與田未【3]等研究發(fā)現(xiàn)半夏與水半夏甲醇提取物在TLC上有明雖 差別。黃必勝對(duì)半夏及其偽品蛋白進(jìn)行了 SDSPAGE凝膠電泳，結(jié)果顯示半夏及其偽品 電泳圖譜具有顯著性差異，可據(jù)電泳譜帶位置、數(shù)目、著色程度等對(duì)半夏及其偽品進(jìn)行鑒 別。TLC也可用以鑒別半夏【33],研究發(fā)現(xiàn)云南產(chǎn)半夏類(lèi)藥材的甲醇和氣仿的提取物在TLC 上有明顯差異。半夏的分子鑒別特征：崔光紅等【34]利用等位基因特異聚合酶鏈反應(yīng)對(duì)半夏及其偽品進(jìn) 行了鑒別，結(jié)果現(xiàn)在半夏的ITS區(qū)域存在唯一的SNP位點(diǎn)，可用以鑒別半夏及其偽品。成 玉等利用擴(kuò)增酶切片段多態(tài)性(AFLP)法擴(kuò)增了十倍體和八倍休半夏及其偽品的DNA, 并構(gòu)建了進(jìn)化樹(shù)，對(duì)比研究表明此法可以在一定程度上鑒別半夏。吳志明等【36]利用隨機(jī)擴(kuò) 增多態(tài)性DNA(RAPD)法對(duì)半夏及水半夏基因組進(jìn)行了擴(kuò)增，半夏和水半夏同一隨機(jī)引物 擴(kuò)增出的亮帶有明顯差異，可用來(lái)鑒別半夏和水半夏。半夏作為中國(guó)的傳統(tǒng)中藥，在我國(guó)已有兩千多年的用藥史，十幾年來(lái)，科研工作者對(duì) 半夏進(jìn)行了廣泛且較深入的研究，使得半夏在臨床應(yīng)用越來(lái)越廣泛，現(xiàn)將半夏的理作用 綜述如下：半夏具有鎮(zhèn)咳桂痰的作用，半夏的鎮(zhèn)咳作用與可待因相似但稍弱，半夏的炮制品生半 夏、清豐夏均有明顯的鎮(zhèn)咳作用，清半夏更長(zhǎng)于化疲I37’3*1。半夏因能激活迷走神經(jīng)傳出活 動(dòng)而具有鎮(zhèn)吐作用【39】，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明，半夏生品和制品均能減少動(dòng)物嘔吐次數(shù)，半夏的水 煎醇沉液具有消炎止痛抗胃浪蕩，保護(hù)胃粘膜、促進(jìn)胃粘膜修復(fù)的作用【4171。】。近年來(lái)，國(guó)內(nèi)外對(duì)半夏的研究表明半夏有確切的抗腫瘤作用，半夏蛋白、多糖、生物 堿均是半夏抗腫瘤作用的有效成分。半夏蛋白能凝集人肝癌細(xì)胞QGY7707402,明顯抑 制人肝癌細(xì)胞Bel7402【4U、慢性骨髓性白血癥細(xì)胞K562腫瘤株的細(xì)胞生長(zhǎng)【42]、小鼠S180 肉瘤的生長(zhǎng)[43】《趙永娟等研究表明半夏多糖對(duì)小鼠肉瘤(S180)、小鼠肝癌(H22)、小鼠 艾氏腹水瘤(EAC)有抑制作用，并對(duì)其機(jī)制進(jìn)行了研究。半夏生物堿對(duì)人肝癌細(xì)胞Bel7402 的生長(zhǎng)也有抑制作用，其機(jī)制可能與上調(diào)Bax和下調(diào)Bcl2蛋白有關(guān)【45】。實(shí)驗(yàn)研究證明，半夏蛋白具有抗早孕的活性，給懷孕7天的小鼠每只皮下注射半夏蛋 白250Mg, 50%小鼠流產(chǎn)【46]。半夏蛋白直接注入子宮能產(chǎn)生明顯的抗兔胚泡著床作用。半夏的其他作用：半夏能抑制中樞神經(jīng)系統(tǒng)，具有一定程度的鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜催眠作用， 此外，半夏還有一定的生殖毒性和輕微的致崎作用。綜上所述，半夏具有廣泛的臨床應(yīng)用價(jià)值，科研工作者已對(duì)此做了廣泛的研究，但對(duì) 半夏藥理作用的機(jī)理的研究還很少，隨著現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，我們可以從多水平、多方 位、多IG點(diǎn)等不同層面對(duì)半夏藥效機(jī)制進(jìn)行研究，以使半夏最大的藥用價(jià)值得到發(fā)揮。Limmmmm凝集素(lectin)是一類(lèi)具有糖結(jié)合專(zhuān)一性、可促使細(xì)胞凝集的蛋白質(zhì)或糖蛋白。植物凝 集素(phytohem agglutinin。 PHA； lectin)是一類(lèi)具高度特異性糖結(jié)合活性的植物糖蛋白，這 是它們區(qū)別于所有其他植物蛋白的標(biāo)志。,1 植物凝集素的研究植物凝集素最早發(fā)現(xiàn)于1888年,俄國(guó)Dorpt大學(xué)的Stillmark在菌麻(Ricinus munis L.)桿萃取物中首次發(fā)現(xiàn)了萬(wàn)麻凝集素，它具有凝集紅細(xì)胞的作用，從而開(kāi)始了植物凝集素 的研究。1936年，Summer第一次分離純化到植物凝集素伴刀豆球蛋白A(ConA),并發(fā) 現(xiàn)凝集素專(zhuān)一性結(jié)合糖的性質(zhì)。1960年Nowell報(bào)道了植物細(xì)胞凝集素有促進(jìn)有絲分翦的 作用。1975年Becker等研究了刀豆凝集素分子的三級(jí)結(jié)構(gòu)，從而開(kāi)始了對(duì)植物凝集素分 子空間結(jié)構(gòu)和功能的研究[47】。1995年Willy Damme對(duì)植物凝集 素作了新的定義，即含有一個(gè)或多個(gè)可與單糖或寡聚糖特異可逆結(jié)合的非催化結(jié)構(gòu)域的植 物蛋白。1998年，Peumans等報(bào)道植物凝集素存在于儲(chǔ)藏器官中，它旣是一種氨源，又具 有防御功能科研工作者對(duì)植物凝集素從發(fā)現(xiàn)到給予恰當(dāng)?shù)亩x經(jīng)歷了近百年的歷史， 至目前發(fā)現(xiàn)的植物凝集素有1000多種，主要分布于豆科、未本科、石蒜科、天南星科及 大戟科等植物中。隨著對(duì)植物凝集素研究的展開(kāi)，人們對(duì)植物凝集素的分類(lèi)、結(jié)構(gòu)、性質(zhì)、 生物學(xué)功能有了較深的認(rèn)識(shí)，并逐漸把它應(yīng)用到腫瘤、細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué)等諸多方面， 因其在醫(yī)學(xué)、農(nóng)業(yè)上也潛在巨大的應(yīng)用價(jià)值，越來(lái)越受到科研工作者的重視。植物凝集素是一類(lèi)高度異質(zhì)性的具有糖特異性可逆結(jié)合活性的蛋白或糖蛋白，因其能 凝集紅細(xì)胞，故名凝集素，亦稱外源凝集素。其由蛋白質(zhì)和糖兩個(gè)部分構(gòu)成，蛋白質(zhì)占的 百分比大，糖的含量較少【49], 一般是幾個(gè)單糖構(gòu)成寡糖鏈，寡糖鏈再與蛋白質(zhì)妝鏈相連。 其與糖的結(jié)合是通過(guò)分子肚鏈中的活性部位實(shí)現(xiàn)的，與其分子中共價(jià)結(jié)合的糖無(wú)關(guān)[5^171。植 物凝集素這種專(zhuān)一性可逆結(jié)合糖的生物學(xué)功能與其結(jié)構(gòu)是密不可分的。20世紀(jì)70年代， 科研工作者就開(kāi)始了對(duì)植物凝集素分子結(jié)構(gòu)的研究，70年代末，已完成了 6種植物凝集 素的全序列測(cè)定，