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正文內(nèi)容

第10章基因診斷genediagnosischinamedi(編輯修改稿)

2024-08-16 07:11 本頁面
 

【文章內(nèi)容簡介】 CR擴(kuò)增后電泳來檢出,稱擴(kuò)增 片段長度多態(tài) ( amplified fragment length polymorphism, AmpFLP) 26 VNTR 酶切,電泳后的檢測結(jié)果 大 小 27 PCRVNTR檢測 28 PCRVNTR 29 30 三 )單核苷酸多態(tài)性( SNP) ( Single Nucleiotide Polymorphism) SNP:發(fā)生在基因組中的單個(gè)核苷酸的替代 根據(jù) SNP在基因中的位置,分為: 基因編碼區(qū) SNP 基因周邊 SNP 基因間 SNP 在人類基因組中每 100~300個(gè)核苷酸就有一個(gè) SNP 31 二、基診斷方法及實(shí)例 直接檢測致病基因本身的異常。通常使用基因 本身或鄰近 DNA序列 作為探針,進(jìn)行 Southern 雜交 ,或通過PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物 ,以檢測基因點(diǎn)突變、缺失、插入等異常及性質(zhì)。主要適用于已知基因異常疾病的診斷。 直接 基因診斷及實(shí)例 32 直接基因診斷 — 突變型 遺傳病的 直接 基因診斷 . 鐮形細(xì)胞貧血的 Gene診斷 33 1) Southern blot β珠蛋白鏈基因第 6位密碼子發(fā)生突變 GAG—— GTG 谷 Aa—— 纈 Aa . 鐮形細(xì)胞貧血的 Gene診斷 34 ? 已知限制酶 Mst 1識(shí)別序列 ( CCTNAGG) ? ? ? CCTGAGG ? ? CCTGTGG ? 突變后不能識(shí)別, ? 酶切位點(diǎn)消失,限制酶切片段長度發(fā)生變化。 35 2) ASO探針診斷 已知突變 Gene部位和性質(zhì),合成寡核苷酸探針, 32P標(biāo)記,進(jìn)行斑點(diǎn)雜交。 Normal βΑGene Probe—— 與正常 Probe βΑ雜交穩(wěn)定 Mutation βS Gene Probe—— 與異常 βS雜交 穩(wěn)定 36 等位基因特異性寡核苷酸探針( ASO) ( Allelespecificoligonucleotide ) 37 斑點(diǎn)雜交結(jié)果: βΑ/βΑ βΑ/βS βS/βS 正常探針 突變探針 突變 型 遺傳病的 直接 基因診斷 38 突變 型 遺傳病的 直接 基因診斷 39 BamHI BamHI α2 α1 α2 10 kb 14 kb probe 1) ?地中海貧血的基因診斷 ?基因不同程度的缺失可引起不同類型的 ?地中海貧血。 直接基因診斷 — 缺失 型 遺傳病的 直接 基因診斷 40 Southern blot 檢測結(jié)果: αα/αα αα/α αα/ α / / 正常 缺 1 缺 2 缺 3 缺 4 14kb 10kb 缺失 型
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