基因診斷(編輯修改稿)
2025-01-25 17:44 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 CR擴(kuò)增后電泳來檢出，并用于致病基因的連鎖分析，這種診斷方法稱為擴(kuò)增片段長度多態(tài)性（ AFLP）連鎖分析法。 PCR擴(kuò)增后，產(chǎn)物即等位片段之間的差別有時只有幾個核苷酸，故需用聚丙烯酰胺凝膠電泳分離鑒定。此法多用于突變性質(zhì)不明的連鎖分析。 2. AFLP（ amplified fragment length polymorphism） 當(dāng)基因的突變部位和性質(zhì)已完全明了時，可以合成等位基因特異的寡核苷酸探針（ allelespecific oligonucleotide，ASO）用同位素或非同位素標(biāo)記進(jìn)行診斷。探針通常為長 20bp左右的核苷酸。用于探測點(diǎn)突變時需要合成兩種或兩種以上的探針，一種與正?；蛐蛄型耆恢?，能與之穩(wěn)定地雜交，但不能與突變基因序列雜交；另一種與突變基因序列一致，能與突變基因序列穩(wěn)定雜交，但不能與正常基因序列穩(wěn)定雜交，這樣，就可以把只有一個堿基發(fā)生了突變的基因區(qū)別開來 . PCR可結(jié)合 ASO，即 PCR－ ASO技術(shù)，即先將含有突變點(diǎn)的基因有關(guān)片段進(jìn)行體外擴(kuò)增，然后再與 ASO探針作點(diǎn)雜交，這樣大大簡化了方法，節(jié)約了時間，而且只要極少量的基因組 DNA就可進(jìn)行。 3. ASO（ allelespecific oligonucleotide） 異常探針 T A G 正常人 患者 DNA DNA 正常人 患者 DNA DNA 雜交結(jié)果 點(diǎn)雜交 正常探針 G A G 正常人 患者 DNA DNA 雜交結(jié)果 正常人 患者 DNA DNA 點(diǎn)雜交 等位基因特異的寡核苷酸探針 (ASO)檢測點(diǎn)突變 基因診斷的臨床檢測應(yīng)用 1. 基因診斷在感染性疾病檢測中的應(yīng)用 乙型肝炎病毒（ HBV）、人乳頭瘤病毒（ HPV）： 其 DNA可以使用點(diǎn)雜交、 PCR方法直接檢出。 丙型肝炎病毒（ HCV）、人免疫缺陷病毒（ HIV）： 其 RNA可以使用 RTPCR方法直接檢出。 結(jié)核桿菌和瘧原蟲的分型可以使用探針雜交和 PCR方法檢出。 丙型肝炎 (HCV)基因診斷實(shí)例 丙型肝炎為 RNA病毒， 9500mer，編碼 30113033個氨基酸，具有高變異性。基因組組成： E1 NS2 NS3 N
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