基因診斷ppt課件(2)(編輯修改稿)
2025-05-25 22:35 本頁面
【文章內容簡介】 —— 定性分析 左側缺失型基因序列 右側缺失型基因序列 ac擴增 ab無擴增片段 ab擴增 + ﹣ 正常人 右側缺 失患者 地中海貧血患者基因組的 PCR分析 左側缺失患者 四、杜氏肌營養(yǎng)不良癥（ DMD） 1. DMD是常見的性連鎖隱性遺傳病， 2. 主要特征是進行性肌萎縮和腸肌假性肥大， — 因突變形式不同。 DMD多在 5歲發(fā)病， 10歲左右癱瘓，在 20歲左右由于心力和呼吸衰竭而死亡，其發(fā)病率為活產(chǎn)男嬰的 1/3500。 （一） DMD分子基礎： 抗肌萎縮蛋白基因長約 2900kb，含 79個外顯子。抗肌萎縮蛋白基因突變分為基因缺失型和非基因缺失型。 （ 1） DNA片段缺失（ 60%的病例 →導致閱讀框移碼 →移碼實變 →致 DMD，整碼缺失 →BMD）。缺失的 2個熱點區(qū)①該基因 5’端處② 45~55外顯子范圍內。 （ 2）非基因缺失型部分重復（病例的 5%） （ 1）基因組探針法 用 XP21區(qū)分離得到的不同探針如（ P20）來進行相應內切酶酶譜分析、檢出率取決于探針數(shù)和酶切位點數(shù)目。 （ 2） cDNA探針法 抗肌萎縮蛋白基因系列 cDNA探針分析患者基因缺失 、外顯子拼接改變和基因內部分重復 。 （ 3） 多重 PCR法 如有人設計多對引物進行多重 PCR擴增該基因的 9個易發(fā)缺失 “ 熱點區(qū) ” DNA片段 ， 可檢出 80%有基因缺失的DMD患者 。 （ 4） 多態(tài)性分析法 基因內及其旁側探針進行 RFLP連鎖分析 。 （ 5） RT— PCR擴增該基因外顯子 （ 全長 、 外顯子起來全長 c14kb、 用多對引物 ） 可檢出：外顯子拼接異常 。聯(lián)用測序：可定位基因缺失的起始和終止 。 苯丙酮尿癥是一種常見的隱性遺傳性氨基酸代謝病 。 主要特征： （ 1） 苯丙氨酸 酪氨酸 →多巴 →兒茶酚胺 苯丙酮酸 酪胺 黑色素 （ 2） 患兒出生后須及早得到低 phe飲食治療 ， 否則發(fā)生不可逆大腦損害和嚴重智力發(fā)育障礙 。 苯丙氨酸 羥化酶 ↓ （肝） 五 、 苯丙 酮尿癥 （ PKU） （一 ） PKU分子基礎 （ 1） 迄今約 3/4的導致中國人 PKU的突變基因已被查清 ， 它們分屬 11種 PAH基因點突變 。 體外研究表明 ， 這些突變導致 PAH活力 ↓或喪失 。 （ 2） PAH第 11外顯子的第 399密碼 GTA（ val）→GTT（ val） 中性突變： ① 不改變任何限制酶識別位點 ， 故又稱 “ 序列多態(tài)性 ” 。 ② 這一“ 序列多態(tài)性 ” 在 PKU患者和正常人中存在著連鎖不平衡性 ， 故可作為一種 “ 遺傳標記 ” 應用于產(chǎn)前診斷 。 ① PCR/ASO探針法和 PCRRFLP連鎖分析法 。 ② PCR/SSCP ③ 直接測序法 — 若待診斷的 PKU家系的基因突變類型尚屬 “ 未知 ” 或無 RFLP信息 。 （二） PKU的 DNA診斷 先合成 ASO 如： 正常探針： TCCATTAAC
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