基因診斷ppt課件(編輯修改稿)
2025-05-25 22:56 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 P) 分析 把 PCR后獲得的雙股 DNA加熱變性后形成單鏈 DNA，相同長度的 DNA單鏈由于堿基順序不同，它們在中性聚丙烯酰胺凝膠中可有不同的構(gòu)象而導致電泳速度的不同，這種現(xiàn)象稱為單鏈構(gòu)象多態(tài)性。 PCR產(chǎn)物變性后經(jīng)由 SSCP分析，可能有效的檢出 DNA順序變異。不是所有的核苷酸序列改變都引起可檢測的單鏈構(gòu)象改變，因此 SSCP方法并不能鑒別所有的突變。 PCR/單鏈構(gòu)象多態(tài)性分析（ SSCP） PCR產(chǎn)物 變性 后， 經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠 電泳 ， 正常基因和變異基因的 遷移位置 不同， 可 分析 確定致病基因的存在。 四、限制酶酶譜分析 基因突變導致酶切位點的丟失或相對位置發(fā)生改變 以此酶消化待測 DNA和野生型對照 DNA，通過比較二者的酶切片段，的長度，數(shù)量上的差異就可判斷待測 DNA的突變情況。 ㈤ DNA序列測定 是進行基因突變檢測的最直接、最準確的方法。不僅可確定突變的部位，而且可確定突變的性質(zhì)。 分子克隆到 T載體上，或直接對擴增產(chǎn)物進行測序。 ?DNA芯片 (DNA chip) ?cDNA芯片 (cDNA chip) 是指將許多特定的 DNA片段或 cDNA片段作為探針，有規(guī)律地緊密排列固定于單位面積的支持物上 。 （六） DNA芯片技術(shù) 基因芯片 (gene chip) 目 錄 二、基因診斷的基本方法 基因變異致病的類型： 1. 內(nèi)源基因的變異 基因結(jié)構(gòu)的突變 點突變、插入、缺失、重排、異位、 基因擴增， 基因表達異常 mRNA剪接異常 2. 外源基因的插入 ㈠ 基因突變的診斷 1. 點突變的診斷 ①診斷已知的點突變 （ PCR/ASO） ASO allele specific oligonucleotide 等位基因特異性寡核苷酸探針 突變堿基置探針中央 控制雜交條件 結(jié)果分析： A T C G 探針定位 正常 C T (純合子 ) C T C G C A (雜合子 ) （新突變） （新突變） ② 診斷未知的突變 PCR/SSCP/測序 DNA芯片技術(shù)（大規(guī)模未知突變的篩查） N 4 n cm 16000個寡核苷酸 2 .大片段丟失或插入的診斷 外側(cè)確定有無缺失及缺失片斷的相對大小 內(nèi)側(cè)確定缺失部位 . ㈡ 多態(tài)性連鎖分析 DNA多態(tài)性 —— 在同種生物不同個體的基因組中，常存在一些不影響基因功能的 DNA順序變異，稱為 DNA多態(tài)性（ polymorphism） DNA多態(tài)性標記 1. 限制性片段長度多態(tài)性（ restriction fragment length polymorphism, RFLP) 2. 短串聯(lián)重復序列（ short tandom repeat, STR） 3. 單核苷酸多態(tài)性（ single nucleotide polymorphism, SNP） 1. 限制性片段長度多態(tài)
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