基因克隆ppt課件(編輯修改稿)
2025-06-08 08:04 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 idromic as in “ABBA”. . EcoRⅠ 5? GAATTC 3? 3? CTTAAG 539。 These sites are DNA sequence that are identical on both DNA strands. Q: Which of the following 2 DNA sequences is a potentional RE recognition site? Ⅰ . 5? AGTTGA 3? Ⅱ . 5? GCACGTGC 3? Q: If show below is 189。 of a RE site, what is the DNA sequence for the remaining 189。? 5? TCA _ _ _ 3? 從理論上講 ， 如果 DNA鏈上的 A、 T、C和 G四種堿基隨機(jī)分布 ， 根據(jù)限制酶識別堿基的個數(shù)可估算限制酶的切割幾率 ，同時(shí)也決定了它切割 DNA后產(chǎn)生的 DNA片段的長度 。 實(shí)際上 ， 限制酶對 DNA的切割是 “ 全 ” 或 “ 無 ” 。 識別 4個堿基 1/44=1/256 識別 6個堿基 1/46=1/4096 識別 8個堿基 1/48=1/65536 5 Ⅱ 型酶切割雙鏈 DNA產(chǎn)生的切口 (1)在識別順序的對稱軸上 ， 對雙鏈 DNA同時(shí)切割 ， 產(chǎn)生平頭末端 (blunt end). 5’GG↓ CC3’ HaeⅢ 5’GG CC3’ → ＋ 3’CC↑ GG5’ 3’CC GG5’ (2)在識別順序的兩個對稱點(diǎn)切開 DNA雙鏈，產(chǎn)生帶單鏈尾巴的粘性末端 (cohesive end)； 從 5?端切割產(chǎn)生 5?端突出的粘性末端。 (3)從 3?端切割產(chǎn)生 3端突出的粘性末端。 6 限制酶使用中的注意事項(xiàng) 酶的活性單位： l小時(shí)內(nèi)在 50μl 容積中酶解 l μg DNA 所需要的酶量。 一般都要求較純的底物 DNA；都需要 Mg2＋和 Tris－ HCl緩沖體系；通常在 37℃( 有些酶需要在 50—65℃) 反應(yīng)； 對離子強(qiáng)度的要求分為 3個級別 ， 即高鹽(100mmol/LNaCl)、 中鹽 (50mmol/LNaCl)和低鹽 (0~l0mmol/LNaCl)。 星號活力：限制酶在非標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)條件下 ， 能切割一些與其識別順序類似的序列 ， 降低酶切的特異性 。 EcoRI
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