基因工程克隆方案設(shè)計(jì)(編輯修改稿)
2025-06-21 18:19 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 2） 粘 平連接 ：適用于外源基因僅與載體有一個(gè)相同酶切位點(diǎn)，可將另一末端補(bǔ)平 ? 特點(diǎn) : (1) 基因和載體都用兩種酶切割； (2) 連接效率高； (3) 外源基因插入方向固定，不用鑒定。 定向克隆的 注意點(diǎn) ： （ 1）兩個(gè)同尾酶切出的末端一樣，相當(dāng)于單酶切不定向克??； （ 2) 載體 MCS中的兩個(gè)酶切位點(diǎn)要遠(yuǎn)一點(diǎn)，防止一端沒切透；（可選用中間插入其它基因片斷的載體酶切回收制備）。 引物的設(shè)計(jì) ? 常規(guī)設(shè)計(jì)原則 ? 特殊用途設(shè)計(jì)技巧 引物常規(guī)設(shè)計(jì)原則 1. 長度：１５～３ 7 nt, 一般２０ nt左右 。 (僅 binding , 不含接頭 ) 2. G + C 含量４０％～６０％ 3. 避免聚嘌呤或聚嘧啶或有回文對稱結(jié)構(gòu)； 4. 引物自身不能互補(bǔ)（ 3個(gè)） 5. 引物之間不能互補(bǔ)（ 5 個(gè)） 6. 引物３端不能錯(cuò)配 , 不能修飾，盡量不用 A, 不能超過３個(gè)連續(xù)的 G或 C； 7. ５端可
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