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正文內(nèi)容

基因克隆的一般流程(編輯修改稿)

2025-02-08 12:46 本頁(yè)面
 

【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 收集管中的液體 , 再將吸附柱放入同一收集管中 。 重復(fù)一次洗柱 。 ? 將吸附柱放入同一收集管中 。 9000g 1分鐘 。 ? 將吸附柱放入一新 , 在吸附膜中央加入 30?lddH2O, 靜置 1分鐘 , 9000g 1分鐘 。 備用 。 重組子的篩選 ? 耐藥性基因 外源質(zhì)粒賦予宿主抗生素抗性 ? 藍(lán)白斑篩選( ?互補(bǔ)現(xiàn)象) lacZ+ plasmid 和 M15△ cell strain 關(guān)于連接酶 ? 定義: ATP存在下,在 3’ OH和 5’ P之間形成磷酸二酯鍵。 ? 特性:連接粘端的效率遠(yuǎn)高于平端。 ? 策略: 1. 首選不匹配粘端 2. 次選匹配粘端,載體脫磷 3. 平端連接,延長(zhǎng)時(shí)間,提高酶量 平端連接圖示 匹配粘端連接圖示 不匹配粘端連接圖示 連接反應(yīng)的建立 ? 連接反應(yīng)的溫度:
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