基因克隆的一般流程-wenkub.com
2025-01-09 12:46 本頁(yè)面
【正文】 ? 連接反應(yīng)在滅菌的 。 5℃ 。 備用 。 重復(fù)一次洗柱 。 稱重 。 ? 易從宿主細(xì)胞中分離純化出來(lái)， 便于重組操作?；蚩寺〉囊话懔鞒? 基因的獲得 PCR RTPCR 載體 連接 準(zhǔn)備感受態(tài)細(xì)胞 轉(zhuǎn)化 重組子篩選 下游工作 載體的選擇 ? 基因工程載體一般要求： ? 能在宿主細(xì)胞中復(fù)制繁殖，有較高的自主復(fù)制能力。 ? 有篩選標(biāo)志，當(dāng)其進(jìn)入宿主細(xì)胞、或攜帶著外源序列進(jìn)入宿主細(xì)胞都能容易被辨認(rèn)和分離出來(lái)。 ? 按 300?lS1溶液 /100mg凝膠加入的比例加入 S1溶液 ， 置 50℃ 水浴 10分鐘 ，使凝膠完全溶化 ， 每 2分鐘顛倒混勻一次 。 ? 將吸附柱放入同一收集管中 。 重組子的篩選 ? 耐藥性基因 外源質(zhì)粒賦予宿主抗生素抗性 ? 藍(lán)白斑篩選（ ?互補(bǔ)現(xiàn)象） lacZ＋ plasmid 和 M15△ cell strain
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