【文章內(nèi)容簡介】 肺癌 以 Kras突變?yōu)橹?， 如第 12位密碼子突變 ， 由編碼甘氨酸的 GGT突變?yōu)?TGT、GTT或 GAT， 少數(shù)突變?yōu)?GCT。 急性淋巴細(xì)胞白血病 ，慢性淋巴細(xì)胞白血病等以Nras突變?yōu)橹鳎?泌尿系統(tǒng)腫瘤 則以 Hras突變?yōu)橹鳌? 目 錄 目 錄 PCR 及 PCRSSCP分析： 擴(kuò)增 ras 基因第12位密碼子點(diǎn)突變部位 ， 再用 SSCP技術(shù)進(jìn)行分析 ， 或者直接測序確定患者 ras原癌基因的點(diǎn)突變 。 核苷酸雜交技術(shù)（如 ASO）： 檢測 ras基因第 12位密碼子點(diǎn)突變。 2. ras原癌基因突變常用的檢測方法 目 錄 目 錄 3．抑癌基因 p53的檢測 ? p53的基因診斷方法有 （ 1） PCRSSCP分析技術(shù) （ 2） DNA序列分析 （ 3） PCRRFLP分析 基因診斷在法醫(yī)學(xué)上的應(yīng)用 Application of Gene Diagnosis in Forensic Medicine 目 錄 目 錄 目 錄 ? 重復(fù)序列以各自核心序列（重復(fù)單元）首尾相連多次重復(fù)，稱為串聯(lián)重復(fù)序列，其重復(fù)次數(shù)在人群中存在變異，形成多態(tài)性。 ? 串聯(lián)重復(fù)序列散在分布于染色體上。 ? 重復(fù)單位 6～ 25 bp長，稱為小衛(wèi)星 DNA。 重復(fù)單位 2～ 6 bp長，如（ TA） n, (CGG)n等，稱為微衛(wèi)星 DNA。 一、 DNA指紋與多態(tài)性遺傳標(biāo)記 目 錄 目 錄人類 DNA指紋圖 目 錄 目 錄 二、 DNA指紋與法醫(yī)學(xué)診斷 ? 個(gè)體識別和親子鑒定： DNA指紋技術(shù)是從基因水平檢測 DNA的高度多態(tài)性 ， 個(gè)體識別率高 。 ? 以往在刑事案件的法醫(yī)學(xué)鑒定中應(yīng)用的是血型 、 血清蛋白型 、 紅細(xì)胞酶型和 HLA分型 ，個(gè)體分辨能力不夠 ， 只能排除 ， 不能做到統(tǒng)一認(rèn)證 。 基因治療的概念及策略 Concept and Strategy of Gene Therapy 目 錄 ? 基因治療： 指將目的基因通過基因轉(zhuǎn)移技術(shù)（病毒載體介導(dǎo)或者非病毒載體介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移技術(shù)）導(dǎo)入靶細(xì)胞內(nèi)，目的基因表達(dá)產(chǎn)物對疾病起治療作用。 目 錄 狹義基因治療： 指目的基因?qū)氚屑?xì)胞后與宿主細(xì)胞內(nèi)的基因發(fā)生整合、成為宿主基因組的一部分，目的基因表達(dá)產(chǎn)物起治療疾病的作用。 廣義基因治療： ①外源正?；?qū)氩∽兗?xì)胞，產(chǎn)生正?；虻谋磉_(dá)產(chǎn)物以補(bǔ)充缺失的或失去正常功能的蛋白質(zhì)； ②采用適當(dāng)?shù)募夹g(shù)抑制細(xì)胞內(nèi)過度表達(dá)的基因； ③將特定的基因?qū)敕遣∽兗?xì)胞，在體內(nèi)表達(dá)特定產(chǎn)物； ④向功能異常的細(xì)胞（腫瘤細(xì)胞）中導(dǎo)入該細(xì)胞中本來不存在的基因（如自殺基因），利用這些基因的表達(dá)產(chǎn)物達(dá)到治療疾病的目的。 目 錄 目 錄 基因治療分類 ? 體細(xì)胞 (somatic cell)基因治療 ? 生殖細(xì)胞 (germline)基因治療 ? 只限于某一體細(xì)胞的基因的改變 ? 只限于某個(gè)體的當(dāng)代 ? 對缺陷的生殖細(xì)胞進(jìn)行矯正 ? 當(dāng)代及子代 目 錄 目 錄 一、基因治療的基本方法 目 錄 （一）基因置換 （ gene replacement） 定義： 將特定目的基因?qū)胩囟?xì)胞 ， 通過定位重組 ， 導(dǎo)入的 正?；?， 以 臵換 基因組內(nèi)原有的缺陷基因 。 目的： 將缺陷基因的異常序列進(jìn)行橋正。 對缺陷基因的缺陷部位進(jìn)行精確的原位修復(fù) ， 不涉及基因組的任何改變 。 目 錄 ? 定向整合的條件 :轉(zhuǎn)導(dǎo)基因的載體與基因組DNA具有相同的序列 。 帶有目的基因的載體就能找到同源重組的位點(diǎn) ， 進(jìn)行部分基因序列的交換 。 ? 基因 同源重組 技術(shù)又稱為 基因打靶 ( gene targeting） ? 細(xì)胞內(nèi)基因同源重組的發(fā)生率很低 。 基因同源重組技術(shù) 目 錄 （二） 基因增補(bǔ) （ gene augmentation） 定義 : 通過 導(dǎo)入外源基因 使靶細(xì)胞表達(dá)其本身 不表達(dá)的基因 。 類型 : ? 有缺陷基因細(xì)胞中導(dǎo)入正?；?， 而細(xì)胞內(nèi)的缺陷基因并未除去 ， 通過導(dǎo)入正常基因的表達(dá)產(chǎn)物 ， 補(bǔ)償缺陷基因的功能； ? 向靶細(xì)胞中導(dǎo)入靶細(xì)胞本來不表達(dá)的基因 ，利用其表達(dá)產(chǎn)物達(dá)到治療疾病的目的 。 目 錄 （三）基因干預(yù) （ gene interference） 定義： 采用特定的方式抑制某個(gè)基因的表達(dá) ， 或者通過破壞某個(gè)基因的結(jié)構(gòu)而使之不能表達(dá) ，以達(dá)到治療疾病的目的 。 目 錄 ? 定義： 將 “ 自殺 ” 基因?qū)胨拗骷?xì)胞中 ， 這種基因編碼的 酶 能使無毒性的藥物前體轉(zhuǎn)化為細(xì)胞毒性代謝物 ， 誘導(dǎo)靶細(xì)胞產(chǎn)生 “ 自殺 ”效應(yīng) ， 從而達(dá)到清除腫瘤細(xì)胞的目的 。 ? 應(yīng)用： 是惡性腫瘤基因治療的主要方法 。 （四）自殺基因治療 (Suicide Gene Therapy) 目 錄 （五）基因免疫治療 通過將抗癌免疫增強(qiáng)的細(xì)胞因子或 MHC基因?qū)肽[瘤組織，以增強(qiáng)腫瘤微環(huán)境中的抗癌免疫反應(yīng)。 目 錄 基因轉(zhuǎn)移 (gene transfer)技術(shù) 目 錄 病毒載體 介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移效率較高 ， 因此它也是使用最多的基因治療載體 。 據(jù)統(tǒng)計(jì) ，有 72%的臨床實(shí)驗(yàn)計(jì)劃和 71%的病例使用了病毒載體 ， 其中用得最多的是反轉(zhuǎn)錄病毒載體 。 目 錄 反轉(zhuǎn)錄病毒的結(jié)構(gòu)及生活周期 （ 1） 反轉(zhuǎn)錄病毒 目 錄 （ 2） 腺病毒 (adenovirus)載體 腺病毒是一種大分子 (36 kb)雙鏈無包膜 DNA病毒 。 它通過受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用進(jìn)入細(xì)胞內(nèi) ， 然后腺病毒基因組轉(zhuǎn)移至細(xì)胞核內(nèi) ， 保持在染色體外 ，不整合進(jìn)入宿主細(xì)胞基因組中 。 腺病毒是人類呼吸道感染的病原體 ， 但目前尚未發(fā)現(xiàn)與腫瘤發(fā)生有關(guān)聯(lián) 。 宿主細(xì)胞范圍廣 ， 可感染分裂和非分裂終末分化細(xì)胞 ， 如神經(jīng)元等 。 目 錄 目 錄 腺病毒的優(yōu)點(diǎn) ? 基因?qū)胄矢?，對人類安全? ? 宿主范圍廣； ? 基因轉(zhuǎn)導(dǎo)與細(xì)胞分裂無關(guān)； ? 重組腺病毒可通過口服經(jīng)腸道吸收、或噴霧吸入或氣管內(nèi)滴注； ? 腺病毒載體容量較大，可插入 kb外源基因。 目 錄 目 錄 腺病毒載體缺點(diǎn) ? 宿主的免疫反應(yīng)導(dǎo)致腺病毒載體表達(dá)短暫 。 ? 有兩個(gè)環(huán)節(jié)可能產(chǎn)生復(fù)制型腺病毒 。 ? 靶向性差 。 ? 不能整合到靶細(xì)胞的基因