放線菌抗生素的發(fā)酵與目的產(chǎn)物的提取實(shí)驗(yàn)報(bào)告(編輯修改稿)
2024-08-16 01:26 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 2molNaOH溶液加到500ml含有182g酒石酸鉀鈉的熱水溶液中，再加5g結(jié)晶苯酚和5g亞硫酸鈉，攪拌溶解，冷卻后加蒸餾水定容到1000ml 2. ：稱(chēng)取1g葡萄糖，加蒸餾水定容到1L。3. 6mol/l氫氧化鈉溶液：稱(chēng)取氫氧化鈉24g,加蒸餾水定容到100ml。 4. 6mol/l的鹽酸：,加蒸餾水定容到100ml。?測(cè)殘氮的方法甲醛法 1. 甲基紅：，用95%乙醇定容100ml。 2. ：,加蒸餾水定容到100ml。 3. ：,定容100ml。 4. 1%酚酞指示劑：稱(chēng)取1g酚酞指示劑粉末。溶于100ml 95%乙醇溶液中。 5. 95%乙醇：取乙醇96ml,倒入100ml容量瓶中定容值100ml。6. 18%中性甲醛：取48ml 38%的甲醛加入小于100ml容量瓶，往溶液中加兩滴酚酞用氫氧化鈉滴定剛好變紅，定容到100ml。（4） 器材 玻璃試管、試管架、吸管（1ml，2ml，10ml）、吸耳球、離心管、容量瓶、燒杯、三角瓶（250ml，500ml）、量筒（250ml，500ml，1000ml）、玻璃棒、試紙、塑料漏斗、電爐、接種鏟（針）、振蕩培養(yǎng)箱、恒溫箱、臺(tái)秤、5L發(fā)酵罐，無(wú)菌室、培養(yǎng)皿（直徑9 cm）、陶瓦蓋、鋼管、鋼管放置器、恒溫培養(yǎng)室、滅菌刻度吸管、玻璃容器、稱(chēng)量管、毛細(xì)滴管、天平、直尺或游標(biāo)卡尺、超凈工作臺(tái)，無(wú)菌培養(yǎng)皿，酒精燈，牛津杯，鑷子，移液器等等（五）.生物效價(jià)測(cè)定所需材料（1）菌種：大腸桿菌（Escherichia coli），菌液濃度約為106個(gè)/mL。菌株保存的時(shí)間過(guò)久，影響其對(duì)抗生素的敏感度，導(dǎo)致抑菌圈變大、模糊或者出現(xiàn)雙圈。如若菌株不純，也會(huì)造成這樣的結(jié)果。因此，菌液在使用一段時(shí)間后，可以重新配制純化或者減小原來(lái)菌液在使用中的稀釋倍數(shù)。（2）抗生素標(biāo)準(zhǔn)品和供試品：頭孢拉定標(biāo)準(zhǔn)品和供試品。（3）培養(yǎng)基：效價(jià)檢定用培養(yǎng)基1號(hào)。（4）無(wú)菌緩沖液：，加水1000mL，即為pH 。制備緩沖液的試劑應(yīng)為分析純，配制后的緩沖液應(yīng)澄清，分裝于玻璃容器內(nèi)，經(jīng)121℃蒸氣滅菌30 min備用。（5）草酸，10 M NaOH四、實(shí)驗(yàn)步驟 ⑴篩選高產(chǎn)放線菌從土壤里篩選出高產(chǎn)放線菌，于斜面培養(yǎng)基中保藏 ⑵接種 在超凈工作臺(tái)上，1cm2，接種于滅過(guò)菌的高氏一號(hào)培養(yǎng)基中。 ⑶培養(yǎng) 將接種好的種子搖瓶于28℃恒溫室搖床上，轉(zhuǎn)速為200r/min，培養(yǎng)48小時(shí)左右。 ⑷實(shí)罐滅菌 將冷凝水管路斷開(kāi)，拔下電極，打開(kāi)罐蓋，將發(fā)酵培養(yǎng)基裝入發(fā)酵罐及補(bǔ)料瓶，易產(chǎn)生泡沫的培養(yǎng)基盡量不要超過(guò)兩升。 連接管路：取樣管路連接，補(bǔ)料管路連接；空氣過(guò)濾器用硅膠管與罐蓋空氣管連接，并用彈簧夾夾緊；排氣口與過(guò)濾器用硅膠管連接；安裝溫度電極、pH電極、溶氧電極，pH電極用們帽蓋緊電極上端口，溶氧 電極用鋁鉑紙包裹電極上端口，防止受潮。蓋緊其它罐蓋接口。 提起玻璃罐體及補(bǔ)料瓶放入滅菌鍋，蓋好牛皮紙，蓋好鍋蓋，確定發(fā)酵溫度及時(shí)間。 滅菌結(jié)束后，盡快將罐放回原位并盡快通入空氣。 ⑸發(fā)酵操作 將滅菌后的罐體放回原位，連接冷凝水管路，通入冷凝
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