放線菌抗生素的發(fā)酵與目的產(chǎn)物的提取實(shí)驗(yàn)報告-閱讀頁
2024-08-08 01:26本頁面
【正文】 連接管路：取樣管路連接，補(bǔ)料管路連接；空氣過濾器用硅膠管與罐蓋空氣管連接，并用彈簧夾夾緊；排氣口與過濾器用硅膠管連接；安裝溫度電極、pH電極、溶氧電極，pH電極用們帽蓋緊電極上端口，溶氧 電極用鋁鉑紙包裹電極上端口，防止受潮。 提起玻璃罐體及補(bǔ)料瓶放入滅菌鍋，蓋好牛皮紙，蓋好鍋蓋，確定發(fā)酵溫度及時間。 ⑸發(fā)酵操作 將滅菌后的罐體放回原位，連接冷凝水管路，通入冷凝水，連接通氣管路，調(diào)整通氣量至3～5L/min。 補(bǔ)料管連接：打開補(bǔ)料蠕動泵防護(hù)蓋，搬開進(jìn)出口處的白色管夾，將硅膠管嵌入入口處的管夾并夾緊，用手轉(zhuǎn)動泵頭，將硅膠管沿凹槽安裝直至出口處，開手動開關(guān)約十秒后夾緊出口處管夾，關(guān)手動開關(guān)；將酒精棉球放在罐蓋補(bǔ)料口內(nèi)，將針頭插入并穿透密封蓋；打開蠕動泵手動開關(guān)，使輸液管中充滿料液，置于自動狀態(tài)。 ⑹接種接種后立即進(jìn)行第一次取樣。 ?發(fā)酵液狀態(tài)觀察：粘度、顏色、氣味、菌絲形態(tài)沸水浴加熱5min，冷水冷卻定容至25ml搖勻，在520nm按波長測吸光度。 ，冷水冷卻后定容至25ml搖勻，以空白作對照在520nm波長測吸光度。取2ml發(fā)酵液濾液于三角瓶內(nèi),加蒸餾水10ml,甲基紅指示劑2滴,(中性),加18%中性甲醛溶液4ml,搖勻,靜置10min,加l%酚酞指示劑8滴,。 ⑼放線菌次級代謝物的初步純化及牛津杯實(shí)驗(yàn)的 配制培養(yǎng)基高壓滅菌。 涂布指示菌。 收集發(fā)酵液，緩緩加入草酸將發(fā)酵液酸化至pH ，70 ℃，2 min， 以10000 rpm離心20 min。 吸取中和液100 μL 加入牛津杯中，37℃培養(yǎng)16hr，觀察結(jié)果。供試品與標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)用同一天平；吸濕性較強(qiáng)的抗生素在稱量前1~2小時更換天平內(nèi)干燥劑。標(biāo)準(zhǔn)品或供試品溶液的稀釋應(yīng)采用容量瓶，每步稀釋，取樣量不得少于2 mL，稀釋步驟一般不超過3步。稀釋標(biāo)準(zhǔn)品與供試品用的緩沖液應(yīng)同一批和同瓶，（預(yù)計(jì)不夠時，應(yīng)事先與另一瓶混勻后再用），以免因pH或濃度不同影響預(yù)定結(jié)果。標(biāo)準(zhǔn)品與供試品高低濃度之比為2:1或4:1，但所選用的濃度必須在劑量反應(yīng)直線范圍內(nèi)。取出試驗(yàn)用菌懸液，按已試驗(yàn)適當(dāng)?shù)木浚ǜ邼舛人碌囊志χ睆?8~22 mm），用滅菌吸管吸取菌懸液加入已融化并保溫在水浴中（一般細(xì)菌48~50℃，芽孢可至60℃）的培養(yǎng)基內(nèi)，搖勻作為菌層用。4. 放置鋼管 用鋼管放置器，或其他方法將鋼管一致、平穩(wěn)地放入培養(yǎng)基上，鋼管放妥后，應(yīng)使雙碟靜置5~10 min，使鋼管在瓊脂內(nèi)稍下沉穩(wěn)定后，再開始滴加抗生素溶液。在雙碟的4個鋼管中以對角線滴加標(biāo)準(zhǔn)品與供試品溶液的高、低二種濃度的溶液，滴加順序?yàn)镾H→TH→SL→TL，也可用SL→TL→TH→SH。滴加完畢，用陶瓦蓋覆蓋雙碟，平穩(wěn)置于雙碟托盤內(nèi)，雙碟疊放不可超過3個，避免受熱不均，影響抑菌圈大小，以水平位置平穩(wěn)移入35~37℃恒溫培養(yǎng)室，培養(yǎng)至所需時間。五、結(jié)果與計(jì)算根據(jù)實(shí)驗(yàn)測量的抑菌圈大小，計(jì)算抗生素供試品的效價單位。2. 若不是心寬似海，哪有人生風(fēng)平浪靜。用一些事情，總會看清一些人。既糾結(jié)了自己，又打擾了別人。4. 歲月是無情的，假如你丟給它的是一片空白，它還給你的也是一片空白。你必須努力，當(dāng)有一天驀然回首時，你的回憶里才會多一些色彩斑斕，少一些蒼白無力。
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