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放線菌抗生素的發(fā)酵與目的產(chǎn)物的提取實(shí)驗(yàn)報(bào)告-在線瀏覽

2024-08-30 01:26本頁(yè)面
  

【正文】 蛋白凝固,所得酸性濾液,在經(jīng)堿處理,進(jìn)一步去除蛋白。管碟法是目前抗生素效價(jià)測(cè)定的國(guó)際通用方法,我國(guó)藥典也采用此法。管碟法的基本原理是在含有高度敏感性試驗(yàn)菌的瓊脂平板上放置小鋼管(177。 mm,高10177。因此,當(dāng)抗生素濃度達(dá)到或高于MIC(最低抑制濃度)時(shí),試驗(yàn)菌就被抑制而不能繁殖,從而呈現(xiàn)透明的無菌生長(zhǎng)的區(qū)域,常呈圓形,稱為抑菌圈。 常用的管碟法有:一劑量法、二劑量法、三劑量法。二劑量法系將抗生素標(biāo)準(zhǔn)品和供試品各稀釋成一定濃度比例(2:1或4:1)的兩種溶液,在同一平板上比較其抗藥活性,再根據(jù)抗生素濃度對(duì)數(shù)和抑菌圈直徑成直線關(guān)系的原理來計(jì)算供試品效價(jià)。先測(cè)量出四點(diǎn)的抑菌圈直徑,按下列公式計(jì)算出檢品的效價(jià)。antilog(IV/W) (式 ) 式中:θ:供試品和標(biāo)準(zhǔn)品的效價(jià)比; D:標(biāo)準(zhǔn)品高劑量與供試品高劑量之比,一般為1 I:高低劑量之比的對(duì)數(shù),即log2或log4。④甲醛滴定法測(cè)定氨基氮含量:水溶液中的氨基酸為兩性離子,因而不能直接用堿滴定氨基酸的羧基。如樣品中只含有某一種已知氨基酸,由甲醛滴定的結(jié)果即可算出氨基氮的含量。甲醛滴定法常用于測(cè)定蛋白質(zhì)的水解程度,隨著水解程度的增加,滴定值增加,當(dāng)水解完全后,滴定值保持恒定。 ≧,呈黃色,因是靠近堿性強(qiáng)的一邊時(shí)的顏色,故又稱之為堿色二、儀器與材料 (一)培養(yǎng)基 高氏一號(hào)培養(yǎng)基: 可溶性淀粉 NaCl KNO3 K2HPO4 蒸餾水 1000ml,PH , 發(fā)酵瓶培養(yǎng)基: ?淀粉3%,葡萄糖2%, %, % , %, MgSO4 %,(NH4)2SO4 %, KH2PO4, %, CaCO3 %, PH 。3. 6mol/l氫氧化鈉溶液:稱取氫氧化鈉24g,加蒸餾水定容到100ml。?測(cè)殘氮的方法甲醛法 1. 甲基紅:,用95%乙醇定容100ml。 3. :,定容100ml。溶于100ml 95%乙醇溶液中。6. 18%中性甲醛:取48ml 38%的甲醛加入小于100ml容量瓶,往溶液中加兩滴酚酞用氫氧化鈉滴定剛好變紅,定容到100ml。ml,500ml)、量筒(250ml,500ml,1000ml)、玻璃棒、試紙、塑料漏斗、電爐、接種鏟(針)、振蕩培養(yǎng)箱、恒溫箱、臺(tái)秤、5L發(fā)酵罐,無菌室、培養(yǎng)皿(直徑9 cm)、陶瓦蓋、鋼管、鋼管放置器、恒溫培養(yǎng)室、滅菌刻度吸管、玻璃容器、稱量管、毛細(xì)滴管、天平、直尺或游標(biāo)卡尺、超凈工作臺(tái),無菌培養(yǎng)皿,酒精燈,牛津杯,鑷子,移液器等等(五).生物效價(jià)測(cè)定所需材料(1)菌種:大腸桿菌(Escherichia coli),菌液濃度約為106個(gè)/mL。如若菌株不純,也會(huì)造成這樣的結(jié)果。(2)抗生素標(biāo)準(zhǔn)品和供試品:頭孢拉定標(biāo)準(zhǔn)品和供試品。(4)無菌緩沖液:,加水1000mL,即為pH 。(5)草酸,10 M NaOH四、實(shí)驗(yàn)步驟 ⑴篩選高產(chǎn)放線菌從土壤里篩選出高產(chǎn)放線菌,于斜面培養(yǎng)基中保藏 ⑵接種 將接種好的種子搖瓶于28℃恒溫室搖床上,轉(zhuǎn)速為200r/min,培養(yǎng)48小時(shí)左右。
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