db51t1203-20xx馬鈴薯m病毒、馬鈴薯s病毒檢疫鑒定技術(shù)規(guī)程doc(編輯修改稿)
2024-08-11 11:33 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 ——PCR擴(kuò)增儀；——EP管；——研缽 內(nèi)徑60 mm～80 mm；——剪刀；——冰箱；——超低溫冰箱；——過(guò)濾柱 CS過(guò)濾柱，CR吸附柱；——渦旋混勻器。7 取樣 植株取樣取樣方法按DB51/T8682009 。 種薯（塊莖）取樣按GB155692009 。8 實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn) DAS－ELISA 馬鈴薯M病毒檢驗(yàn)方法見(jiàn)附錄B。如采用認(rèn)可的試劑盒，按說(shuō)明操作?！?馬鈴薯S病毒檢驗(yàn)方法見(jiàn)附錄C。如采用認(rèn)可的試劑盒，按說(shuō)明操作?！?RTPCR 馬鈴薯M病毒樣品的制備與檢驗(yàn)方法見(jiàn)附錄D。如采用認(rèn)可的試劑盒，按說(shuō)明操作?！?馬鈴薯S病毒樣品的制備與檢驗(yàn)方法見(jiàn)附錄E。如采用認(rèn)可的試劑盒，按說(shuō)明操作。9 結(jié)果判定 DAS－ELISA在陰性對(duì)照OD值≤，且陽(yáng)性對(duì)照OD值大于陰性對(duì)照OD值2倍的前提下，樣品孔OD值大于陰性對(duì)照OD值2倍時(shí)，判定為陽(yáng)性反應(yīng)，即樣品帶相應(yīng)的被檢病毒；否則判定為陰性反應(yīng)，即樣品不帶相應(yīng)的被檢病毒。 RTPCR在陰性對(duì)照無(wú)擴(kuò)增條帶，且陽(yáng)性對(duì)照出現(xiàn)630 bp目標(biāo)條帶的前提下，樣品RTPCR產(chǎn)物電泳結(jié)果在630 bp處出現(xiàn)目標(biāo)條帶，判定為陽(yáng)性反應(yīng)，即樣品帶PVM病毒；否則判定為陰性反應(yīng)，即樣品不帶PVM病毒。在陰性對(duì)照無(wú)擴(kuò)增條帶，且陽(yáng)性對(duì)照出現(xiàn)435 bp目標(biāo)條帶的前提下，樣品RTPCR產(chǎn)物電泳結(jié)果在435 bp處出現(xiàn)目標(biāo)條帶，判定為陽(yáng)性反應(yīng)，即樣品帶PVS病毒；否則判定為陰性反應(yīng)，即樣品不帶PVS病毒。10 樣品保存經(jīng)檢疫鑒定后的樣品，應(yīng)在80℃～20℃保存三個(gè)月，以備復(fù)驗(yàn)、談判和仲裁，保存期滿后，需進(jìn)行滅活處理。AA附 錄 A （資料性附錄）馬鈴薯M病毒、馬鈴薯S病毒基本信息 分類 馬鈴薯M病毒 potato virus M簡(jiǎn)稱PVM。屬香石竹潛隱病毒屬。病毒粒體微曲線狀，大小65012nm，致死溫度65～71℃，稀釋限點(diǎn)100～1000倍，20℃體外存活期幾天。引起馬鈴薯小葉病?！?馬鈴薯S病毒 potato virus S簡(jiǎn)稱PVS。屬香石竹潛隱病毒屬。病毒粒體線形，長(zhǎng)650nm，病汁液稀釋限點(diǎn)1～10倍，鈍化溫度55～60℃，體外存活期3～4天。在馬鈴薯上引起輕度皺縮花葉或不顯癥，其寄主范圍較窄，系統(tǒng)侵染的植物僅限于茄科的少數(shù)植物 為害 馬鈴薯M病毒為害癥狀馬鈴薯M病毒寄主范圍窄，主要侵染茄科，還可侵染藜科和豆科植物。PVM強(qiáng)株系侵染后，馬鈴薯幼苗期小葉片表面有油脂狀光澤，同時(shí)小葉迅速開(kāi)始向下卷曲，葉背出現(xiàn)條斑壞死；隨著馬鈴薯生長(zhǎng)發(fā)育，產(chǎn)生明顯花葉，葉片嚴(yán)重變形，并很快黃化至干枯；病株嚴(yán)重萎縮和矮化，其株高只相當(dāng)于健株的1/3高度。PVM的弱株系侵染馬鈴薯后，常引起病株小葉脈間花葉、畸形和頂葉卷曲。植株受PVM浸染后，溫度在24℃以上，病癥隱蔽。該病毒是馬鈴薯上常見(jiàn)的病害，可引起較大的產(chǎn)量損失，在東歐引起的產(chǎn)量損失達(dá)40%。PVM和同屬的PVS常常同時(shí)在馬鈴薯植株中存在?！?馬鈴薯S病毒為害癥狀馬鈴薯S病毒單獨(dú)侵染時(shí)常常不表現(xiàn)癥狀，可持續(xù)存在馬鈴薯薯塊中，并通過(guò)薯塊作遠(yuǎn)距離傳播。在田間該病毒傳播很快，傳播范圍廣，既可通過(guò)葉片接觸傳播，也可通過(guò)蚜蟲傳播，種植一季后感染率可高達(dá)70%，可使馬鈴薯減產(chǎn)1020%。當(dāng)與馬鈴薯X病毒混合侵染時(shí)，可減產(chǎn)2030%?！?傳播途徑兩種病毒田間通過(guò)蚜蟲和農(nóng)事操作進(jìn)行傳播，遠(yuǎn)距離傳播主要通過(guò)人為的引種、商品流通等，帶毒塊莖和種苗是該病毒傳播的主要載體。BB附 錄 B （資料性附錄）馬鈴薯M病毒DASELISA檢驗(yàn)程序 包被抗體 包被向酶聯(lián)反應(yīng)板每孔加入100 μL用包被緩沖液稀釋的PVM捕捉抗體，將酶聯(lián)
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