【正文】 　 PCR反應(yīng)體系反應(yīng)物10PCR BufferdNTPP1P2cDNATaqDNA聚合酶MgCl2無(wú)RNA酶的ddH2O加入量（181?！?RTPCR擴(kuò)增　 反轉(zhuǎn)錄　 反應(yīng)體系。記錄檢測(cè)結(jié)果，存檔備查?！?洗板向每個(gè)反應(yīng)孔中加入200 μL洗滌液，迅速倒出，重復(fù)2次。剩余樣品于20℃冰箱保存?zhèn)洳?，在制樣時(shí)應(yīng)注意防止樣品的交叉污染。屬香石竹潛隱病毒屬。如采用認(rèn)可的試劑盒，按說(shuō)明操作?！?去蛋白液?！?洗滌液(PBST Buffer) g無(wú)水磷酸氫二鈉（Na2HPO4）、 g氯化鉀（KCl）、 g無(wú)水磷酸二氫鉀（KH2PO4）、 g氯化鈉（NaCl）、 g吐溫－20 ，用1000 mL蒸餾水溶解?！? 目標(biāo)條帶 target band根據(jù)某種病毒RNA序列中一段保守的、特異的堿基序列設(shè)計(jì)特異引物，通過(guò)RTPCR擴(kuò)增和電泳檢測(cè)，得到的與引物設(shè)計(jì)長(zhǎng)度吻合的RTPCR擴(kuò)增條帶。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件?！?用堿性磷酸酶標(biāo)記的馬鈴薯S病毒的免疫球蛋白抗體?！?RT增強(qiáng)劑（RT Ehancer）。7　 取樣　 植株取樣取樣方法按DB51/T8682009 。病毒粒體微曲線狀，大小65012nm，致死溫度65～71℃，稀釋限點(diǎn)100～1000倍，20℃體外存活期幾天?！?洗板向每個(gè)反應(yīng)孔中加入200 μL洗滌液，迅速倒出，重復(fù)2次。記錄檢測(cè)結(jié)果，存檔備查?！?顯色每孔加入100 μL 底物溶液。將吸附柱放入一個(gè)新的RNasefree離心管中，向膜中央加入50 181。　 馬鈴薯S病毒RT反應(yīng)體系反應(yīng)物模板RNAP2RNasinRT Ehancer5 RT bufferdNTPMMLV無(wú)RNA酶的ddH2O加入量（181。L的溴酚藍(lán)上樣緩沖液混勻，以及2 181。　 PCR反應(yīng)　 反應(yīng)體系。稱取50 mg～100 mg的馬鈴薯葉片或莖桿（薯塊需經(jīng)發(fā)芽后切取幼芽），在液氮中迅速研磨成粉末狀， mL的EP管中，加入500 181。剩余樣品于20℃冰箱保存?zhèn)洳椋谥茦訒r(shí)應(yīng)注意防止樣品的交叉污染。加樣完成后將酶聯(lián)反應(yīng)板置于保濕容器中，室溫孵育2 h或4℃冰箱12 h。PVM強(qiáng)株系侵染后，馬鈴薯幼苗期小葉片表面有油脂狀光澤，同時(shí)小葉迅速開(kāi)始向下卷曲，葉背出現(xiàn)條斑壞死；隨著馬鈴薯生長(zhǎng)發(fā)育，產(chǎn)生明顯花葉，葉片嚴(yán)重變形，并很快黃化至干枯；病株嚴(yán)重萎縮和矮化，其株高只相當(dāng)于健株的1/3高度?！?RTPCR　 馬鈴薯M病毒樣品的制備與檢驗(yàn)方法見(jiàn)附錄D。　 漂洗液?！?底物緩沖液（PNP Buffer） 用80 g氯化鎂（MgCl2）、 g疊氮化鈉（NaN3）、 mL二己醇胺CH2CH2OH）溶解后，定容到100 mL，貯藏于4℃條件下備用。注：改寫(xiě)DB51/T8682009,。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：寧紅、萬(wàn)佳、劉可、郭迪金、吳志平、黃玲、李耄IIDB51/T 1203—2011馬鈴薯M病毒、馬鈴薯S病毒檢疫鑒定技術(shù)規(guī)程1　 范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了馬鈴薯M病毒（見(jiàn)附錄A）、馬鈴薯S病毒（見(jiàn)附錄A）的取樣、實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)、結(jié)果判斷及樣品保存的技術(shù)要求和方法。貯藏于4℃條件下備用?！?10 PCR 緩沖液 100 mM TrisHCl ()， 500 mM KCl?！?瓊脂糖凝膠 g瓊脂糖緩緩倒入250 mL三角瓶?jī)?nèi)，加入100 mL 1TAE，在微波爐中加熱1 min溶解后，再加入5 181。10　 樣品保存經(jīng)檢疫鑒定后的樣品，應(yīng)在80℃～20℃保存三個(gè)月，以備復(fù)驗(yàn)、談判和仲裁，保存期滿后，需進(jìn)行滅活處理。當(dāng)與馬鈴薯X病毒混合侵染時(shí)，可減產(chǎn)2030%