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db51t1210-20xx馬鈴薯x病毒檢驗鑒定技術規(guī)程doc(編輯修改稿)

2024-08-11 11:32 本頁面
 

【文章內容簡介】 M;——漂洗液;——雙蒸水(ddH2O);——2巰基乙醇(MCE)C2H6OS;——液氮 (N2);——引物 PVX上游引物(P1)堿基序列: 5'ACAGGCCACAGGGTCAACTAC3',PVX下游引物(P2)堿基序列:5'CATCTAGGCTGGCAAAGTCGT3',用雙蒸水稀釋至20 μM;——100bp DNA ladder (≤1500 bp);——溴酚藍(Bromophenol blue)C19H10Br4O5S;——瓊脂糖凝膠: g瓊脂糖緩緩倒入250 mL三角瓶內,加入100 mL 1TAE,在微波爐中加熱1 min溶解后,再加入5 181。L Goldview的生物染料,倒入調平并安放適當梳齒的制膠板上,冷凝后小心拔出梳齒。6  儀器及用具儀器及用具包括:——聚乙烯微量滴定板 根據(jù)樣品數(shù)量選用40孔和96孔兩種規(guī)格;——移液器 2 μL~10 μL、10 μL~50 μL、10 μL~200 μL、200 μL~1000 μL和1 mL~5 mL五種規(guī)格及配套吸頭;——天平 1/100 g,1/1000 g;——培養(yǎng)箱;——臺式高速離心機;——酶聯(lián)免疫檢測儀;——水平電泳儀;——凝膠成像系統(tǒng);——PCR擴增儀;——EP管;——研缽 內徑60 mm~80 mm;——剪刀;——冰箱;——超低溫冰箱;——過濾柱 CS過濾柱,CR吸附柱?!獪u旋混勻器7  取樣  植株取樣取樣方法按DB51/T8682009 。  種薯(塊莖)取樣按GB155692009 。8  實驗室檢驗  DAS-ELISA馬鈴薯X病毒檢驗方法見附錄B。如采用認可的試劑盒,按說明操作?!?RTPCR 馬鈴薯X病毒樣品的制備與檢驗方法見附錄C。如采用認可的試劑盒,按說明操作。9  結果判定  DAS-ELISA在陰性對照OD值≤,且陽性對照OD值大于陰性對照OD值2倍的前提下,樣品孔OD值大于陰性對照OD值2倍時,判定為陽性反應,即樣品帶PVX;否則判定為陰性反應,即樣品不帶PVX?!?RTPCR在陰性對照無擴增條帶,且陽性對照出現(xiàn)625bp目標條帶的前提下,樣品RTPCR產(chǎn)物電泳結果在625bp處出現(xiàn)目標條帶,判定為陽性反應,即樣品帶PVX;否則判定為陰性反應,即樣品不帶PVX。10  樣品保存經(jīng)檢驗鑒定后的樣品,應在80 ℃~20 ℃保存三個月,以備復驗、談判和仲裁,保存期滿后,需進行滅活處理。AA附 錄 A (資料性附錄)馬鈴薯X病毒基本信息  分類馬鈴薯X病毒 potato virus X,簡稱PVX,又稱
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