【正文】 自然條件下主要靠植株不同部位之間直接接觸和帶病種薯傳播。按市售產(chǎn)品要求進(jìn)行稀釋，貯藏于4 ℃條件下備用；——包被緩沖液（Coating buffer） g碳酸氫鈉（NaHCO3）、 g碳酸鈉（Na2CO3）、 g疊氮化鈉（NaN3），用1000 mL蒸餾水溶解，貯藏于4℃條件下備用；——洗滌液(PBST Buffer) g無(wú)水磷酸氫二鈉（Na2HPO4）、 g氯化鉀（KCl）、 g無(wú)水磷酸二氫鉀（KH2PO4） 、 g氯化鈉（NaCl）、 g吐溫－20 ，用1000 mL蒸餾水溶解，；——樣品提取液（GEB buffer） g無(wú)水硫酸鈉（Na2SO4）、 g聚乙烯吡咯烷酮（（C6H9NO）2440000）、 g疊氮化鈉（NaN3）、 g Ⅱ級(jí)雞蛋清白蛋白粉、 g吐溫－20，用1000 mL洗滌液溶解，貯藏于4℃條件下備用；——酶標(biāo)抗體稀釋緩沖液（ECI Buffer） g牛血清白蛋白（或脫脂奶粉）、 g聚乙烯吡咯烷酮（（C6H9NO）n）、 g疊氮化鈉（NaN3），用100 mL洗滌緩沖液溶解，貯藏于4℃條件下備用；——底物緩沖液（PNP Buffer） 用80 g氯化鎂（MgCl2）、 g疊氮化鈉（NaN3）、 mL二己醇胺CH2CH2OH）溶解后，定容到100 mL，貯藏于4℃條件下備用；——底物溶液（PNP substate） 將5 mg 對(duì)硝基苯磷酸鹽（C6H5NO3）溶解于5 mL 底物緩沖液中。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：四川省植物檢疫站。4　 原理馬鈴薯X病毒田間通過(guò)蚜蟲(chóng)和農(nóng)事操作進(jìn)行傳播，遠(yuǎn)距離主要通過(guò)人為的引種、商品流通等途徑傳播，帶毒塊莖和種苗是該病毒遠(yuǎn)距離傳播的主要載體，該病毒具有潛隱性，根據(jù)病害癥狀很難確定馬鈴薯X病毒，薯塊上一般不表現(xiàn)癥狀。9　 結(jié)果判定　 DAS－ELISA在陰性對(duì)照OD值≤，且陽(yáng)性對(duì)照OD值大于陰性對(duì)照OD值2倍的前提下，樣品孔OD值大于陰性對(duì)照OD值2倍時(shí)，判定為陽(yáng)性反應(yīng)，即樣品帶PVX；否則判定為陰性反應(yīng)，即樣品不帶PVX。加樣完成后將酶聯(lián)反應(yīng)板置于保濕容器中，室溫孵育2h或4℃冰箱12h。將勻漿液轉(zhuǎn)移至CS過(guò)濾柱上，12000 rpm 離心2 min～5 min，小心吸取上清液至無(wú)RNA酶（RNasefree）的離心管中，吸頭盡量避免接觸收集管中的細(xì)胞碎片沉淀?！?擴(kuò)增產(chǎn)物檢測(cè)　 瓊脂糖凝膠電泳將制膠板同制好的瓊脂糖凝膠一并放入水平電泳槽，取5 181。L）41　 程序反轉(zhuǎn)錄程序?yàn)椋?2 ℃，50 min；94 ℃，5 min；4 ℃保存。CC附　錄　C （資料性附錄）馬鈴薯X病毒RTPCR檢驗(yàn)程序　 PVX模板RNA的制備采用TIANGE