htertshrna表達質(zhì)粒的構(gòu)建及鑒定(編輯修改稿)
2025-07-27 16:58 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 液室溫封閉，加入：稀釋的一抗（兔抗人多克隆抗體， ）室溫孵育，洗滌次，每次，加入：稀釋的二抗（辣根過氧化物酶標記的山羊抗兔，北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司）室溫孵育，洗滌三次，然后加入化學發(fā)光底物（公司產(chǎn)品），暗室中光膠片曝光，以曝光條帶的灰度值分析蛋白的表達量高低。同時設立β為內(nèi)參照。預頌圣鉉儐歲齦訝驊糴買闥齙。 端粒酶活性測定：采用以法為基礎的法檢測端粒酶活性，按試劑盒 （）說明操作。端粒酶活性按試劑盒說明書提供的公式計算，以( )表示。滲釤嗆儼勻諤鱉調(diào)硯錦鋇絨鈔。統(tǒng)計學方法：統(tǒng)計學分析采用軟件，兩組間比較采用兩個獨立樣本的檢驗。結(jié)果 的質(zhì)粒構(gòu)建和鑒定：測序結(jié)果顯示，基因的條雙鏈均成功地與質(zhì)粒連接（圖圖）。鐃誅臥瀉噦圣騁貺頂廡縫勵羆。 轉(zhuǎn)染后表達的變化：質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細胞后，各組表達量變化不一，和組變化不明顯，而、和組則明顯降低，以組下降最為明顯（圖）。經(jīng)灰度值比較計算，同對照細胞相比， 組下降（），組下降（），組下降（）。擁締鳳襪備訊顎輪爛薔報贏無。 轉(zhuǎn)染后蛋白的表達變化：質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細胞后，和組蛋白的表達變化不明顯，而、和各組則明顯降低，以組下降最為明顯（圖）?；叶戎当容^顯示，同對照細胞相比，組下降（），組下降（），組下降（），同下降水平基本一致。贓熱俁閫歲匱閶鄴鎵騷鯛漢鼉。 轉(zhuǎn)染后端粒酶活性的變化：同對照細胞相比，轉(zhuǎn)染質(zhì)粒后和組細胞相對端粒酶活性（ ，）下降不明顯，而、和組則分別下降（）、（）和（）（圖）?？梢?、和都能不同程度的降低細胞的端粒酶活性，其中仍以的干擾作用為最強，這同和蛋白變化水平相一致。壇摶鄉(xiāng)囂懺蔞鍥鈴氈淚躋馱釣。討論端粒酶是一種具有逆轉(zhuǎn)錄酶活性的核糖核蛋白，人的端粒酶核心成分為人端粒酶（ ，）、人端粒酶相關(guān)蛋白( ，)和人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶( ，)。其中為端粒酶的活性亞基，它可以在的幫助下以為模板，不斷逆轉(zhuǎn)錄合成重復序列（）并結(jié)合到端粒上使之延伸，從而解決了真核細胞分裂中的末端復制問題。如果細胞內(nèi)端粒酶活性異常表達，就會使細胞獲得“永生性”，進而轉(zhuǎn)化為癌細胞[]。因此在端粒酶導致細胞永生化過程中起重要作用，也是端粒酶的限速步驟。 等[]研究發(fā)現(xiàn)，腫瘤細胞中的過表達可以通過增強細胞的抗氧化防御系統(tǒng)而降低細胞內(nèi)的活性氧簇（ ，）水平，進而加強了線粒體的功能，結(jié)果使腫瘤細胞避免介導的細胞凋亡。研究者將正常人號染色體導入腎癌細胞系，發(fā)現(xiàn)其端粒酶活性降低，端粒縮短，細胞出現(xiàn)衰老，研究證實端粒酶活性的抑制是由于基因表達下調(diào)引起的[]
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