堿性磷酸酶基因表達載體的構(gòu)建及在大腸桿菌中的表達-本科基因工程實驗論文開題報告(編輯修改稿)
2025-02-17 18:04 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 結(jié)構(gòu)異常、軟骨病、食欲降低、生長遲緩、生產(chǎn)性能下降等。年幼動物血液AP主要來自骨骼，隨著動物長大成熟和骨骼成年化，來自骨骼的AP逐漸減少。在動物營養(yǎng)研究中，血清AP活性常作為重要的生化檢測指標協(xié)助評定日糧鈣、磷水平的適宜程度。在動物疾病診斷上，依據(jù)骨質(zhì)疏松等骨骼疾病發(fā)生時AP活性的變化規(guī)律，可應(yīng)用血清AP活性來診斷因鈣、磷及VD失調(diào)所引起的骨質(zhì)疾病。臨床骨型AP的檢測比血鈣測定體內(nèi)鈣營養(yǎng)水平更具敏感性，因此，國內(nèi)外研究一致認為骨型AP是反映骨改變?nèi)^程最正確的指標，其特異性、靈敏度及準確性優(yōu)于其它物質(zhì)的檢測。另外，在動物患肝疾患、胃腸疾患、腎臟疾病和缺鋅時，血清AP均會有改變，如果繼續(xù)對臟器特異性、AP變化機制、AP在不同動物體內(nèi)生理功能深入研究，會使AP在獸醫(yī)臨床上意義更大。 在免疫學(xué)研究方面，已廣泛應(yīng)用AP標記抗體進行酶聯(lián)免疫熒光反應(yīng)(ELISA)和Western印跡分析，即將AP與顯色劑或去磷酸化后能發(fā)光的底物相互作用來揭示靶與檢測酶復(fù)合物的存在，與辣根過氧化物酶相比，AP用作標記酶的優(yōu)點是穩(wěn)定性高、靈敏度高,缺點是成本高、標記困難。在生物化學(xué)和分子生物學(xué)方面，用AP催化除去DNA分子的5c末端磷酸基團以防止載體自連是基因克隆中的常規(guī)手段之一。用AP脫去5c末端磷酸基團，再用(C32P)ATP標記5c末端，可用于化學(xué)測序，RNA測序和特異性DNA或RNA片段的圖譜構(gòu)建。應(yīng)用AP代替同位素標記核苷酸探針用于分子雜交。研究中最常用的AP有：（1）細菌堿性磷酸酶(BAP)；（2）SAP(來源于一種北極蝦)；（3）小牛腸堿性磷酸酶(CIAP)；（4）胎盤堿性磷酸酶(PLAP)和分泌性堿性磷酸酶(SEAP)，后者是前者的C末端短缺版，與PLAP相比，SEAP沒有PLAP的C末端最后24個氨基酸(這24個氨基酸構(gòu)成了與糖基化磷脂酰肌醇靶向錨定的區(qū)域)。另外，將phoA基因與其它基因融合表達雜合蛋白可用于基因表達的研究。目前工業(yè)上一個普遍的應(yīng)用是基于巴氏殺菌可破壞AP，因此將AP作為檢驗牛奶的巴氏滅菌的標志。4 展望AP的研究已經(jīng)有近百年的歷史，對于AP的結(jié)構(gòu)、功能、性質(zhì)、作用機理、活性調(diào)控等方面的研究均已取得了不小的成就。近年來，科研工作者將研究目光聚焦在AP的生理功能及應(yīng)用上，取得了許多新成果，如Lall?s研究結(jié)果認為，腸型AP在保持腸道平衡中發(fā)揮重要作用，膳食可以影響它的活性，腸型AP具有參與調(diào)節(jié)碳酸氫鹽分泌和十二指腸pH、通過脫磷酸作用控制細菌內(nèi)毒素誘發(fā)的腸道炎癥等功能。但對該酶在生物體內(nèi)確切的生物學(xué)功能、工作機理，以及哺乳類AP的晶體結(jié)構(gòu)分析等方面還有待進一步研究，相信隨著科學(xué)
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