淺析亮丙瑞林的固相合成分析畢業(yè)論文(編輯修改稿)
2025-07-25 15:35 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 第二章 實(shí)驗(yàn)部分本實(shí)驗(yàn)通過采用不同的縮合劑（HBTU、HOBT、TBTU）在相同的工藝條件下進(jìn)行對比實(shí)驗(yàn)，觀察實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象和實(shí)驗(yàn)結(jié)果，了解和探索最佳的亮丙瑞林合成反應(yīng)方法。 實(shí)驗(yàn)儀器和材料 實(shí)驗(yàn)儀器 實(shí)驗(yàn)所需儀器如表21所示。上海舜宇恒平科學(xué)儀器有限公司電子天平鄭州長城工貿(mào)SHBIII循環(huán)水式多用真空泵國華TBZ82A恒溫振蕩器瑞江RJTDC40B低速離心機(jī)（無錫市瑞江分析儀器有限公司）日本SHIMADZU公司LCMS2020質(zhì)譜儀日本SHIMADZU公司高效液相色譜儀SPD10AVP紫外可變波長檢測器LC10AVTP泵表21 實(shí)驗(yàn)所需儀器表 CTC樹脂(2Chlorotrityl chloride resin，2氯三苯甲基氯樹脂) [ 2]；二異丙基碳二亞胺(DIC)、DIC)、HBTU、HATU、TBTU、HOBt、二異丙基乙胺(DIEA)、三氟乙酸(TFA)、三異丙基硅烷(TIS)(上海吉爾生化公司)；乙胺(Sigma公司)；二甲基甲酰胺(DMF)、吡啶(Py)、哌啶(Pip)； Fmoc氨基酸[脯氨酸、精氨酸、亮氨酸、D型亮氨酸、酪氨酸、絲氨酸、色氨酸、組氨酸、焦谷氨酸]。（1）取三支反應(yīng)器用甲醇洗凈，放入烘箱烘干待用；（2）連好反應(yīng)裝置，保持裝置的氣密性，檢查橡膠管的老化情況；（3）取氮?dú)庖黄浚B通好真空泵和抽濾瓶，用來收取廢液 （1）確定要制備的亮丙瑞林的數(shù)量，根據(jù)氨基酸：縮合劑：堿試劑=3::6的比例確定每次需要加入的反應(yīng)物的量；（2）取已制備好的CTC樹脂（）[3]，按照所要制備的亮丙瑞林粗品的量確定要稱取的樹脂質(zhì)量（根據(jù)樹脂質(zhì)量=粗品的mmol數(shù)/樹脂取代度），稱取3份，分別裝入三支反應(yīng)器內(nèi)，貼上標(biāo)簽編號1 2 3；（3）將三支反應(yīng)器放到裝置上，用DCM浸泡2030min，使樹脂膨脹，方便后續(xù)氨基酸的連接，通入少量氮?dú)鈹嚢瑁ㄏ挛耐舛际侵傅氖峭ㄈ氲獨(dú)猓厥饬碜髡f明）；（4） 三個實(shí)驗(yàn)反應(yīng)分別用不同的堿和縮合劑連接,1號反應(yīng)器用HB、NMM連接，2號反應(yīng)器用HOBT、DIC連接，3號反應(yīng)器用HOBT、TBTU、DIEA連接；（5） 根據(jù)第一步確定的縮合劑、氨基酸量用天平稱取所需質(zhì)量（誤差177。）（6） 樹脂浸泡的時間滿足條件后，抽出DCM，加入哌啶對載體樹脂進(jìn)行去保護(hù)，時間約為30min；（7） 去保護(hù)后抽出哌啶，用DMF洗滌6次后，按照反應(yīng)器的順序分別加入各個的反應(yīng)物，加入堿試劑，通入氮?dú)膺M(jìn)行反應(yīng)，一號反應(yīng)器NMM反應(yīng)30min，二號反應(yīng)器DIC反應(yīng)2h，三號反應(yīng)器DIEA反應(yīng)2h；（8） 反應(yīng)時間到后用DMF洗滌三次后用檢測管取少量樹脂用檢測液進(jìn)行檢測，待檢測通過后（樹脂呈現(xiàn)透明，檢測溶液為淡黃色）方可進(jìn)行下一步的去保護(hù)，不過的話則需重新稱料加入反應(yīng)器反應(yīng)，在相同的反應(yīng)條件下繼續(xù)反應(yīng)，直至通過；（9）對反應(yīng)通過的進(jìn)行去保護(hù)，條件和上述的去保護(hù)條件相同，按照肽鏈的氨基酸順序重復(fù)上面的7和8步驟，直至全部連接上該條肽鏈的氨基酸，對最后一個連接上的氨基酸進(jìn)行去保護(hù)；（10）對已經(jīng)去保護(hù)的肽鏈先用甲醇洗一遍，再用DCM洗滌三次，然后再用甲醇洗滌兩次后抽干；（11）將抽干后的粉末稱重，放入離心管貼上標(biāo)簽和重量。 全保護(hù)肽片段的切割 全保護(hù)切割液的配置根據(jù)所稱量的樹脂的重量配置全保護(hù)切割液（樹脂的重g：切割液ml=1:10），全保護(hù)切割液的配置為2％TFA+98％DCM 。本次由于樹脂質(zhì)量較少，配置切割液時較難配置準(zhǔn)確，所以本次配置采取5倍量配置。切割時采取多次重復(fù)切割，減短切割時間。 全保護(hù)的切割過程（1）將配置好的切割液按照所需要的量加入三支分別裝有全保護(hù)肽片段的離心管中，用塑膠手套包扎好，放入搖床里振蕩（20min），通過沙星漏斗收集濾液，待樹脂抽干后裝入離心管中加入切割液，繼續(xù)包扎好放入搖床振蕩，如此重復(fù)5次，最后棄去濾渣（被切割下來的樹脂），收集好濾液；（2）將收集好的濾液放入旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀旋干，待到旋干時從旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀取出，加入自來水析出切割后的全保護(hù)肽鏈，放入離心機(jī)離心，重復(fù)用自來水析三次，離心后倒出上清液，得到沉淀物；（3）將沉淀物凍干后重新裝管，稱重，貼上標(biāo)簽。 肽片段C末端的乙胺化[4]（1）取出凍干后的全保護(hù)肽片段粉末，放入50ml的燒瓶中，加入少量DCM溶解肽片段，以完全溶解為止；（2），確定要稱取的NHET的量，乙胺化采取用Py
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