【文章內容簡介】 乙醚或石油醚時，切忌用直接火加熱，應該用電熱套，電水浴等。烘前應驅除全部殘余的乙醚，因乙醚稍有殘留，放入烘箱時，有發(fā)生爆炸的危險。9．反復加熱會因脂類氧化而增重。重量增加時，以增重前的重量作為恒重。10．索氏提取法對大多數樣品結果比較可靠，但需要周期長，溶劑量大。實驗十二 脂肪的測定（羅紫一哥特里法）一、實驗目的1．了解羅紫一哥特里法測定脂肪的原理。2．掌握羅紫一哥特里法測定脂肪的方法。二、實驗原理 利用氨一乙醇溶液破壞乳的膠體性狀及脂肪球膜，使非脂成分溶解于氨—乙醇溶液中，而脂肪游離出來，再用乙醚一石油醚提取出脂肪，蒸餾去除溶劑后，殘留物即為乳脂肪。三、儀器與試劑抽脂瓶； ①25％氨水（）； ②96％乙醇 ；③乙醚（不含過氧化物）； ④石油醚（沸程30—60℃）四、實驗步驟 取一定量樣品（；乳粉精密稱取約1g，用10ml60℃水，分數次溶解）于抽脂瓶中，充分混勻，置60℃水浴中加熱5分鐘，再振搖2分鐘，加入10ml乙醇，充分搖勻，于冷水中冷卻后．加入25ml乙醚，振搖半分鐘，加入25ml石油醚，再振搖半分鐘，靜置30min，待上層液澄清時，瀆取醚層體積，放出一定體積醚層于一已恒重的燒瓶中，蒸餾回收乙醚和石油醚，揮干殘余醚后．放入l00—105℃，取出放入干燥器中冷卻至室溫后稱重，重復操作直至恒重。五、結果計算式中：m2－－燒瓶和脂防質量，g； m1－－燒瓶質量，g； m－－樣品質量，g；（或毫升相對密度） V－－讀取醚層總體積，ml；V1－－測定時所取醚層體積，ml。六、說明與注意事項 ①乳類脂肪雖然也屬游離脂肪，但因脂肪球被乳中酪蛋白鈣鹽包裹，又處于高度分散的膠體分散系中，故不能直接被乙醚、石油醚提取，需預先用氨水處理，故此法也稱為堿性乙醚提取法。②本法適用于各種液狀乳（生乳、加工乳、部分脫脂乳、脫脂乳等），各種煉乳、奶粉、奶油及冰淇淋等能在堿性溶液中溶解的乳制品也適用于豆乳或加水呈乳狀的食品。③若無抽脂瓶時，可用容積l00ml的具塞量筒替用，待分層后讀數，用移液管吸出一定量醚層。 ④加氨水后，要充分混勻，否則會影響下步醚對脂肪的提取。 ⑤操作時加入乙醇的作用是沉淀蛋白質以防止乳化，并溶解醇溶性物質，使其留在水中，避免進入醚層，影響結果。 ⑥加入石油醚的作用是降低乙醚極性，使乙醚與水不混溶，只抽提出脂肪，并可使分層清晰。⑦對已結塊的乳粉，用本法測定脂肪，其結果往往偏低。實驗十三 還原糖的測定（直接滴定法）一、實驗目的1．了解費林試劑熱滴定測定還原糖的原理。2．能夠準確測定果蔬中還原糖的含量。二、實驗原理還原糖是指含有自由醛基或酮基的單糖和某些二糖。在堿性溶液中，還原糖將Cu2+、Hg2+、Fe3+、Ag+等金屬離子還原，而糖本身被氧化和降解。費林試劑是氧化劑，由甲、乙兩種溶液組成。甲液含硫酸銅和亞甲基藍（氧化還原指示劑）；乙液含氫氧化鈉，酒石酸鉀鈉和亞鐵氰化鉀。將一定量的甲液和乙液等體積混合，生成可溶性的絡合物酒石酸鉀鈉銅；在加熱條件下，用樣液滴定，樣液中的還原糖與酒石酸鉀鈉銅反應，生成紅色的氧化亞銅沉淀，氧化亞銅沉淀再與試劑中的亞鐵氰化鉀反應生成可溶性無色化合物，便于觀察滴定終點。滴定時以亞甲基藍為氧化－還原指示劑。亞甲基藍氧化能力比二價銅弱，待二價銅離子全部被還原后，稍過量的還原糖可使藍色的氧化型亞甲基藍還原為無色的還原型亞甲基藍，即達滴定終點。根據消耗樣液量可計算出還原糖含量。三、試劑1．堿性酒石酸銅甲液：稱取15g硫酸銅()，溶于水中并稀釋到1000ml。2．堿性酒石酸銅乙液：稱取50g酒石酸鉀鈉及75g氫氧化鈉，溶于水中，再加入4g亞鐵氰化鉀，完全溶解后，用水稀釋至1000ml，貯存于橡皮塞玻璃瓶中。3．乙酸鋅溶液：，加3ml冰醋酸，加水溶解并稀釋到100ml。4．％亞鐵氰化鉀溶液：。5．葡萄糖標準溶液：—100℃干燥至恒重的無水葡萄糖，加水溶解后加入5ml鹽酸(防止微生物生長），移入1000ml容量瓶中，用水稀釋到l000ml。6. 1 mol/L NaOH標準溶液。7．15%Na2CO3溶液：稱15g碳酸鈉溶于水并稀釋至100ml。 8．10%Pb(Ac)2溶液：稱10g醋酸鉛溶于水并稀釋至100ml。9．10%Na2SO4溶液：稱10g硫酸鈉溶于水并稀釋至100ml。四、試驗步驟1．樣品處理①新鮮果蔬樣品將樣品洗凈、擦干，并除去不可食部分。準確稱取平均樣品10～25g ，研磨成漿狀（對于多汁類果蔬樣品可直接榨取果汁吸取10～25ml汁液），用約100ml水分數次將樣品移入250ml容量瓶中，然后用Na2CO3溶液調整樣液至微酸性，于80℃水浴中加熱30min。冷卻后滴加中性Pb(Ac)2溶液沉淀蛋白質等干擾物質，加至不再產生霧狀沉淀為止。蛋白質沉淀后，再加入等量同濃度的Na2SO4除去多余的鉛鹽，搖勻，用水定容至刻度，靜置15～20 min后，用干燥濾紙過濾，濾液備用。②乳及乳制品、含蛋白質的冷食類～5g固體樣品（～），用50ml水分數次將樣品溶解并移入250ml容量瓶中。搖勻后慢慢加入5m1乙酸鋅溶液和5ml亞鐵氰化鉀溶液，加水至刻度，搖勻后靜置30分鐘。用干燥濾紙過濾，棄去初濾液，收集濾液備用。③汽水等含二氧化碳的飲料吸取樣液100mL于蒸發(fā)皿，在水浴上除去CO2后，移入250ml容量瓶中，用水洗蒸發(fā)皿，洗液并入容量瓶定容、搖勻。④酒精性飲料吸取樣液100mL于蒸發(fā)皿，用1 mol/L NaOH 中和至中性，在水浴上蒸發(fā)至原體積的1/4后，移入250ml容量瓶中，加50ml水，混勻。慢慢加入5m1乙酸鋅溶液和5ml亞鐵氰化鉀溶液，加水至刻度，搖勻后靜置30分鐘。用干燥濾紙過濾，棄去初濾液，收集濾液備用。2．堿性酒石酸銅溶液的標定 準確吸取堿性酒石酸銅甲液和乙液各5m1，置于250ml錐形瓶中，加水10ml，加玻璃珠3粒。從滴定管滴加約9ml葡萄糖標準溶液，加熱使其在2分鐘內沸騰，準確沸騰30秒鐘，趁熱以每2秒1滴的速度繼續(xù)滴加葡萄糖標準溶液，直至溶液藍色剛好褪去為終點．記錄消耗葡萄糖標準溶液的總體積。平行操作3次，取其平均值，按下式計算。式中： F一一10ml堿性酒石酸銅溶液相當于葡萄糖的質量，mg； c——葡萄糖標準溶液的濃度，mg/ml；V——標定時消耗葡萄糖標準溶液的總體積，m1。 3．樣品溶液預測 準確吸取堿性酒石酸銅甲液及乙液各5ml，置于250ml錐形瓶中，加水10ml，加玻璃珠3粒，加熱使其在2分鐘內至沸，準確沸騰30s，趁熱以先快后慢的速度從滴定管中滴加樣品溶液，滴定時要始終保持溶液呈沸騰狀態(tài)。待溶液藍色變淺時，以每2秒1滴的速度滴定，直至溶液藍色剛好褪去為終點。記錄樣品溶液消耗的體積。4．樣品溶液測定 準確吸取堿性酒石酸銅甲液及乙液各5ml，置于250ml錐形瓶中，加水10ml，加玻璃珠3粒，從滴定管中加入比預測時樣品溶液消耗總體積少1m1的樣品溶液，加熱使其在2分鐘內沸騰，準確沸騰30s，趁熱以每2秒1滴的速度繼續(xù)滴加樣液，直至藍色剛好褪去為終點。記錄消耗樣品溶液的總體積。同法平行操作3份，取平均值。五、結果計算式中： m——樣品質量，g F——10ml堿性酒石酸銅溶液相當于葡萄糖的質量，mg； V一—測定時平均消耗樣品溶液的體積，ml； 250—樣品溶液的總體積，ml；m一—樣品質量。六、注意事項1．費林試劑甲液和乙液應分別貯存，用時才混合，否則酒石酸鉀鈉銅絡合物長期在堿性條件下會慢慢分解析出氧化亞銅沉淀，使試劑有效濃度降低。2．滴定必須是在沸騰條件下進行，保持反應液沸騰可防止空氣進入，也可加快還原糖與Cu2＋的反應速度； 3．滴定時不能隨意搖動錐形瓶，更不能把錐形瓶從熱源上取下來滴定，以防止空氣進入反應溶液中。實驗十四 總糖的測定一、實驗目的 掌握直接滴定法測定總糖的原理和方法。二、實驗原理樣品經處理除去蛋白質等雜質后，加入鹽酸，在加熱條件下使蔗糖水解為還原性單糖，以直接滴定法測定水解后樣品中的還原糖總量。三、試劑 1．6mo1/mL鹽酸溶液2．：，用60%乙醇溶解并定容至100ml。 3．20%氫氧化鈉溶液。4．%轉化糖標準溶液：稱取10539。，用水溶解并移入1000m1容量瓶中，定容，混勻。取50m1于100m1容量瓶中，加6mol/L鹽酸5m1，在68～70℃水浴中加熱15min，取出于流動水下迅速冷卻，加甲基紅指示劑2滴，用20%NaOH溶液中和至中性，加水至刻度，混勻。此溶液每毫升含轉化糖lmg。5．費林氏A液：稱取15g (CuS045H2O），溶于水并稀釋到1L。6．費林氏B液：稱取50g酒石酸鉀鈉及75g氫氧化鈉，溶于水，再加入4g亞鐵氰化鉀，完全溶解后，用水稀釋至1L，貯存于橡皮塞玻璃瓶中。7．乙酸鋅溶液：（Zn（CH3COO）22H2O），加3m1冰醋酸，加水溶解并稀釋至1 00ml。8．%亞鐵氰化鉀溶液：[K4Fe（CN）63H2O]，溶于水，稀釋至100m1。四、實驗步驟取適量樣品，移入250m1容量瓶中，慢慢加入5m1乙酸鋅溶液和5m1亞鐵氰化鉀溶液，加水至刻度，搖勻后靜置30min，用干燥濾紙過濾，棄去初濾液，收集濾液備用。 吸取處理后的樣液50mL于l00mL容量瓶中，加入5mL6mol/L鹽酸溶液，置68～70℃水浴中加熱15min，取出后迅速冷卻，加甲基紅指示劑2滴，用20%NaOH溶液中和至中性，加水至刻度，混勻。 準確吸取堿性酒石酸銅甲液和乙液各5mL，置于250mL錐形瓶中，加水l 0mL，玻璃珠3粒。從滴定管滴加約9m1轉化糖標準溶液，加熱使其在2min內沸騰，準確沸騰30s，趁熱以每2秒1滴的速度繼續(xù)滴加轉化糖標準溶液，直至溶液藍色剛好褪去為終點。記錄消耗轉化糖標準溶液的總體積。平行操作3次，取其平均值，按下式計算。 F＝CV式中：F— I0ml堿性酒石酸銅溶液相當于轉化糖的質量，mg； C—轉化糖標準溶液的濃度，mg/ml； V—標定時消耗轉化糖標準溶液的總體積，ml。3．樣品溶液預測準確吸取堿性酒石酸銅甲液和乙液各5m1，置于250m1錐形瓶中，加水l0ml，玻璃珠3粒，加熱使其在2min內沸騰，準確沸騰30s，趁熱以先快后慢的速度從滴定管中滴加樣品溶液，滴定時要始終保持溶液呈沸騰狀態(tài)，待溶液蘭色變淺時，以每2秒1滴的速度滴定，直至溶液藍色剛好褪去為終點。記錄樣品溶液消耗的體積。4．樣品溶液測定準確吸取堿性酒石酸銅甲液和乙液各5ml，置于250m1錐形瓶中，加水l0ml，加玻璃珠3粒，從滴定管滴加入比預測時樣品溶液消耗總體積少lml的樣品溶液，加熱使其在2min內沸騰，準確沸騰30s，趁熱以每2秒1滴的速度繼續(xù)滴加樣液，直至藍色剛好褪去為終點。記錄消耗樣品溶液的總體積。同法平行操作3次，取平均值。五、結果計算式中：F— I0ml堿性酒石酸銅溶液相當于轉化糖的質量，mg； V1—樣品處理液總體積，ml； V2—測定時消耗樣品水解液體積，ml； m一樣品質量，g。六、說明 總糖測定的結果一般以轉化糖計，但也可以葡萄糖計，要根據產品的質量指標要求而定。如用轉化糖表示，應該用標準轉化糖溶液標定堿性酒石酸銅溶液，如用葡萄糖表示，則應該用標準葡萄糖溶液標定。 實驗十五 蛋白質的測定（微量凱氏定氮法）一、實驗目的。二、實驗原理 樣品與濃硫酸和催化劑一同加熱消化，使蛋白質分解，其中碳和氫被氧化為二氧化碳和水逸出，而樣品中的有機氮轉化為氨與硫酸結合成硫酸銨。硫酸氨用氫氧化鈉中和生成氫氧化銨，加熱又分解為氨，用硼酸吸收。吸收氨后的硼酸再以標準鹽酸或硫酸溶液滴定，根據標準酸消耗量可計算出蛋白質的含量。三、儀器與試劑1．儀器 凱式燒瓶、微量凱式定氮裝置，如下圖所示。①4%硼酸吸收液：20g硼酸（化學純）溶解于500m1熱水中，搖勻備用。②甲基紅一溴甲酚綠混合指示劑：%溴甲酚綠95%%甲基紅乙醇溶液混合。③40%氫氧化鈉溶液 ④濃硫酸 ⑤硫酸鉀 ⑥硫酸銅⑦微量凱氏定氮蒸餾裝置 四、實驗步驟 ～2g（半固體樣品2～5g，液體樣品10～20ml），小心移入干燥潔凈的500ml凱氏燒瓶中，、硫酸鉀10g和濃硫酸20ml，輕輕搖勻后，用電爐以小火加熱，待泡沫停止產生后，加大火力，至液體變藍綠色透明后，再繼續(xù)加熱微沸30分鐘。消化液待冷卻后用水移入100m1容量瓶中，加水至刻度。按圖裝好微量定氮裝置，準確移取消化液l0ml于反應管內，再加入10ml氫氧化鈉溶液使呈強堿性，用少量蒸餾水洗漏斗數次，夾好漏斗夾，進行水蒸汽蒸餾。冷凝管下端預先插入盛有10m1 4％硼酸吸收液（加有混合指示劑）錐形瓶的液面下。蒸餾至吸收液中所加的混合指示劑變?yōu)榫G色開始計時，繼續(xù)蒸餾5分鐘，將冷凝管尖端提離液面再蒸餾1分鐘，用蒸餾水沖洗冷凝管尖端后停止蒸餾。，記錄鹽酸溶液用量。同時作一空白試驗（除不加樣品外，從消化開始操作完全相同），記錄空白實驗鹽酸溶液用量。五、計算式中： c——鹽酸標準溶液的濃度，mol/L；