【正文】 五、結(jié)果計算1．肉制品中亞硝酸鹽含量： 式中：X—測得的吸光度值在標(biāo)準(zhǔn)曲線上對應(yīng)的亞硝酸鈉質(zhì)量濃度，μg。從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得相應(yīng)的亞硝酸鈉濃度。 3．亞硝酸鹽的測定：取40 mL待測樣液于50 mL容量瓶中，加2 mL %對氨基苯磺酸溶液，搖勻。靜置3～5 min后，加入1 mL %鹽酸萘乙胺溶液，并用重蒸水定容到50 mL，搖勻，靜置15 min后，用20mm比色皿，在540 nm波長下測定吸光度，以蒸餾水為空白。用濾紙過濾，濾液應(yīng)無色透明。振搖1h， mol/L氫氧化鈉溶液40 mL，用重蒸水定容后立即過濾。稱取適量漿液（視試樣中硝酸鹽含量而定，如青刀豆取10 g,桃子、菠蘿取30 g），置于500mL容量瓶中。冷卻到室溫后用重蒸水定容到刻度，搖勻，放置片刻，除去上層脂肪，清液用濾紙過濾，濾液必須清澈，供測定用。再吸取此溶液25 mL，以重蒸水定容到1 000 mL，此工作液每毫升含亞硝酸鈉5μg。⑦%鹽酸萘乙二胺溶液： g鹽酸萘乙二胺，溶于100 mL重蒸水中。取下沉淀物，加適量重蒸水使之呈薄糊狀，攪拌均勻備用。 ⑤氫氧化鋁乳液：溶解125 g硫酸鋁于1000 mL重蒸水中，滴加氨水使氫氧化鋁全部沉淀（使溶液呈微堿性）。 ③乙酸鋅溶液：稱取220 g乙酸鋅，加30 mL冰醋酸溶于水，并稀釋至1000mL。10H2O)溶于100 mL熱的重蒸水中，冷卻備用。三、實驗儀器與試劑 1． 儀器 分光光度計、組織搗碎機。二、實驗原理亞硝酸鹽在酸性條件下，與對氨基苯磺酸（ S03H）發(fā)生重氮化反應(yīng)生成重氮鹽，此重氮鹽再與鹽酸萘乙二胺發(fā)生偶合反應(yīng)，生成紫紅色偶氮化合物。實驗二十五 亞硝酸鹽的測定 （鹽酸萘乙二胺法）一、實驗?zāi)康?．了解亞硝酸鹽測定的原理和意義。 3．樣品測定：～5 mL（視二氧化硫含量而定）置于25 mL具塞比色管中，以下按標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制操作，根據(jù)測得的吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得相應(yīng)的二氧化硫含量。四、操作步驟 1．樣品處理：稱取搗碎均勻的樣品10～20 g（視二氧化硫含量而定），加人飽和硼砂溶液5 mL，硫酸鋅2 mL，攪拌均勻，移入100 mL容量瓶中，用水定容，放置澄清，過濾，濾液待用。根據(jù)計算結(jié)果，將二氧化硫標(biāo)準(zhǔn)用吸收液稀釋成2μg/ mL二氧化硫標(biāo)準(zhǔn)溶液?？瞻自囼炇窃?50 mL碘量瓶中加水100 mL后按上述步驟操作。 ⑤二氧化硫標(biāo)準(zhǔn)溶液： g亞硫酸氫鈉溶于200 mL四氯汞鈉吸收液中，放置過夜，上清液用定量濾紙過濾備用。④蛋白質(zhì)沉淀劑：飽和硼砂溶液：溶解約25 g硼砂于500 mL水中。 ②顯色劑：鹽酸副玫瑰苯胺100 mg，置于200 mL水中溶解，加40 mL濃鹽酸，定容至500 mL。二、實驗原理二氧化硫被四氯汞鈉吸收溶液吸收后，生成穩(wěn)定的絡(luò)合物，絡(luò)合物與甲醛反應(yīng)生成的羥甲基磺酸與鹽酸副玫瑰苯胺作用，并經(jīng)分子重排后，生成紫紅色絡(luò)合物，可比色測定。 m—樣品質(zhì)量，g。在常規(guī)測定樣品時，每次只需做試劑空白及與樣品含硒量相近的標(biāo)準(zhǔn)管（雙份）即可。以下步驟在暗室中進行：加3mL DAN試劑，混勻，置沸水浴中加熱5min，取出立即冷卻，加3mL環(huán)己烷，振搖4min，將全部溶液移入分液漏斗中，待分層后棄去水層，環(huán)己烷層轉(zhuǎn)入具塞試管中，小心勿使環(huán)己烷中混入水滴，于激發(fā)波長376nm，發(fā)射波長520nm處測定苤硒腦的熒光強度。次日于砂浴上逐漸加熱，當(dāng)激烈反應(yīng)發(fā)生后（此時溶液變無色），繼續(xù)加熱至產(chǎn)生白煙，溶液逐漸變?yōu)榈S色即為終點。 ②蔬菜及其他植物性食物 取可食部分用水沖洗三次后用紗布吸去水滴，用不銹鋼刀切碎，取混合均勻的樣品于60℃烘干，稱量、粉碎，備用。 （16）EDTA混合液：取0. 2mo1/L EDTA和鹽酸羥胺溶液各5mL，混勻后再加甲酚紅指示劑5mL，用水稀釋至1L。 （14）硒標(biāo)準(zhǔn)使用液：將標(biāo)準(zhǔn)貯備液用0. lmol/L鹽酸稀釋至含硒0. 05μg/mL，于冰箱內(nèi)保存。 （13）硒標(biāo)準(zhǔn)貯備液：（光譜純），溶于少量硝酸中，加2mL高氯酸，置沸水浴中加熱34h，再置沸水浴中加熱2min，準(zhǔn)確稀釋至1000mL。將提純后的DAN貯存于棕色瓶內(nèi)，約加l cm厚的環(huán)己烷覆蓋溶液表面。加40mL環(huán)己烷，繼續(xù)振搖5min，將此液轉(zhuǎn)人分液漏斗中，待溶液分層后，棄去環(huán)己烷層，收集DAN層溶液。 （10）10%鹽酸羥胺溶液 （11）混合酸（硝酸高氯酸）(2＋1） （12）2,3二氨基萘(1g 去硒硫酸：取200mL硫酸，加于200mL水中，再加30mL氫溴酸，混勻，置砂浴上加熱蒸去硒與水至出現(xiàn)濃白煙，此時體積應(yīng)為200mL。 三、實驗儀器與試劑1．儀器 熒光分光光度計。二、實驗原理樣品經(jīng)混合酸消化后，硒化合物被氧化為四價無機硒（Se4+），與2,3二氨基萘(2，3diaminonaphthalene,簡稱DAN)反應(yīng)生成4，5苯并苤硒腦，其熒光強度與硒的濃度在一定條件下成正比。實驗二十三 硒的測定（熒光法）一、實驗?zāi)康摹?六、注意事項1．樣品灰化后一定要以熱水分?jǐn)?shù)次洗滌并過濾，以避免碘的損失。：根據(jù)樣品含碘量的高低，吸取一定量樣液置于125 ml分液漏斗中，以下步驟同標(biāo)準(zhǔn)曲線制作，測定樣液吸光度，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出相應(yīng)的碘含量。取出冷卻后加水10mL，加熱溶解，并過濾到50mL容量瓶中，再用30 mL熱水分次洗滌過濾于50 ml容量瓶中，用水定容至刻度。⑤碘標(biāo)準(zhǔn)溶液： 8 g 105℃烘干1h的碘化鉀于燒杯中，加少量水溶解，移入1000mL容量瓶中，加水定容至刻度，此溶液含碘100μg /mL,使用時稀釋成10μg /mL。③濃硫酸。2．試劑①10 mol/L KOH溶液。碘化物在酸性條件下被重鉻酸鉀氧化析出游離碘，碘溶于氯仿后呈粉紅色，根據(jù)顏色的深淺比色測定碘的含量。2．掌握氯仿萃取比色法測定碘含量的方法。六、說明合成色素雖較穩(wěn)定，但存放時間長的合成色素仍會有輕微褪色，應(yīng)與標(biāo)準(zhǔn)番茄紅素作對照，以確定其相應(yīng)濃度。用甲苯作空白，在最大吸收波長487nm下測定消光值，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得相應(yīng)的C值。濾液移至50mL容量瓶中，加苯至刻度，搖勻。反復(fù)用無水甲醇抽提，直至濾液無色為止（濾液棄去）。在487nm下測定消光值，繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線。準(zhǔn)確稱取蘇丹1號色素25mg，用無水乙醇溶解并定容至50mL,搖勻。因番茄紅素不穩(wěn)定,故可以用蘇丹1號色素代替制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。2．熟練使用分光光度計。如果做二次微商曲線，以二次微商等于零的一點作為滴定終點就更為準(zhǔn)確。 a如果滴定曲線對稱而且電位突躍部分陡直，可直接由電位突躍的中點確定滴定終點。 U一分取倍數(shù)，即測定用樣液體積／樣液總體積。滴定終點通過圖解法從電位滴定曲線上確定。插入電極，開動攪拌器。 四、實驗步驟1．樣品處理同硝酸銀滴定法。 三、實驗儀器與試劑儀器 自動電位滴定儀；銀電極（指示電極）；飽和甘汞電極（參比電極）。繪制與滴定量相對應(yīng)的電位變化曲線(E V曲線），所得曲線的拐點即為滴定終點。2．掌握電位滴定法測定NaCl含量的方法。 3．不能在含有氨或其他能與銀離子生成配合物的物質(zhì)存在下進行滴定，以免AgCl和Age cr04的溶解度增大而影響測定結(jié)果。 六、注意事項 1．，當(dāng)樣品溶液的pH值過高或過低時，應(yīng)先用酸或堿調(diào)節(jié)，再進行滴定。量取100mL蒸餾水，同時做試劑空白試驗。加入鉻酸鉀指示劑1mL，混勻。樣品測定準(zhǔn)確吸取適量樣品（醬油稀釋液取2mL),置于燒杯中，加水至100mL。2．濕法消化 準(zhǔn)確稱取樣品5g,置于凱氏燒瓶中o 加濃硝酸20mL，加熱消化至溶液澄清透明，冷卻后用硝酸(1＋9)定容至100mL，靜置，上層清液備用。為避免一部分氯揮發(fā)散失，在允許的情況下，樣品可直接用水提取。殘渣轉(zhuǎn)人鉑坩堝中，再行灼燒。然后蒸干、炭化，在≤500℃的溫度下充分灼燒。計算：式中：c—硝酸銀標(biāo)準(zhǔn)溶液的實際濃度，mol／L；m—基準(zhǔn)氯化鈉的質(zhì)量，g；V—硝酸銀溶液的用量，mL；—。標(biāo)定：℃干燥至恒量的基準(zhǔn)氯化鈉，加入50mL水使之溶解。⑧%熒光黃乙醇溶液。當(dāng)溶液中的Cl完全作用后，稍過量的硝酸銀即與鉻酸鉀指示劑反應(yīng)，生成橘紅色的鉻酸銀沉淀，由硝酸銀標(biāo)準(zhǔn)溶液的消耗量計算出Cl的含量。2．掌握NaCl含量測定的方法。3. 2,6二氯靛酚鈉溶液應(yīng)貯于棕色瓶中冷藏，每星期應(yīng)標(biāo)定一次。六、注意事項、蔬菜及其加工制品中還原型抗壞血酸的測定（不含二價鐵、二價錫、二價銅、亞硫酸鹽或硫代硫酸鹽）。五、結(jié)果計算 式中X——樣品中VC的含量，mg/100g；V——滴定樣液時消耗染料溶液的體積, mL； V。2．測定吸取5mL或10mL濾液于100mL三角瓶中，用已標(biāo)定過的2,6二氯靛酚鈉溶液滴定，直到溶液呈粉紅色15s不褪色為止。若濾液有色。四、實驗步驟1．樣液制備①鮮樣制備：稱100g鮮樣，放入組織搗碎機中，加2％草酸100mL迅速搗成勻漿。標(biāo)定：吸取5mL抗壞血酸標(biāo)準(zhǔn)溶液，加1%草酸溶液5mL，搖勻，用2,6二氯靛酚鈉溶液滴定至溶液呈粉紅色15s不褪色為止。冷卻，保存在冰箱中過夜。計算：式中：C—抗壞血酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度，mg/mL；Vl— mol/L碘酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積，mL； V2—滴定時所取抗壞血酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積，ml；—1 mL mol/L碘酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液相當(dāng)于抗壞血酸的量，mg/mL。三、儀器與試劑1．儀器高速組織搗碎機、分析天平2．試劑①1%草酸溶液：稱取10g草酸（）溶解于水并稀釋至1L；②2%草酸溶液：稱取20g草酸溶解于水并稀釋至1L；③1%淀粉溶液：稱1g淀粉溶解于100 mL水中加熱煮沸，邊加熱邊攪拌；④6%碘化鉀溶液：稱6g碘化鉀溶解于100 mL水中；⑤ mol/L碘酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液：，用水稀釋至100 mL，取出1 mL，用水稀釋至100 mL，此溶液1 ；⑥抗壞血酸標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確稱取20mg抗壞血酸，溶于1%草酸中并定容至l00mL，置冰箱中保存。還原型VC還原染料后，本身被氧化成脫氫抗壞血酸。二、實驗原理還原型VC可以還原2,6二氯靛酚染料。實驗十八 維生素C含量的測定(2,6二氯靛酚滴定法)一、實驗?zāi)康?．了解測定維生素C 的意義。記錄消耗氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積( V2）。同時取80mL蒸餾水置于另一200mL燒杯中，(此時不記堿耗量），混勻。，混勻?！?可以利用酸度計來指示終點。加入甲醛溶液時，NH2與甲醛結(jié)合，其堿性消失。二、實驗原理 氨基酸含有酸性的一COOH，也含有堿性的一NH2。實驗十七 氨基酸總量的測定一、實驗?zāi)康?。，?yīng)注意空白試驗與樣品測定色調(diào)一致?！噭┛瞻紫柠}酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積，mL；c——鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度，mol/L；m——樣品質(zhì)量，g。取下吸收瓶，用少量水沖洗冷凝管下端，同時做試劑空白試驗。將盛有10mL硼酸吸收液并加有5滴混合指示劑的錐形瓶置于冷凝管下端，并使其下端插入吸收液的液面下，加MgO混懸液5mL，迅速蓋塞，并加水以防漏氣。四、實驗步驟將除去脂肪、骨、腱后的樣品切碎攪勻，準(zhǔn)確稱取10g置于錐形瓶中，加100mL水，不時振搖，浸漬30min。③混合指示劑：%%次甲基藍(lán)水溶液等量混合。2．試劑①1%MgO混懸液：，加100mL水，振搖成混懸液。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)溶液的消耗量即可計算出樣品中揮發(fā)性鹽基氮的含量。二、實驗原理揮發(fā)性鹽基氮在測定時遇弱堿氧化鎂即被游離而蒸餾出來，餾出的氨被硼酸吸收后生成硼酸銨，使吸收液變?yōu)閴A性，混合指示劑由紫色變?yōu)榫G色。 實驗十六 揮發(fā)性鹽基氮的測定一、實驗?zāi)康?．了解揮發(fā)性鹽基氮測定的意義。 ，蒸汽發(fā)生要均勻充足，蒸餾過程中不得?；饠嗥?，否則將發(fā)生倒吸。六、注意事項 ，以便利用冷凝酸液將附在瓶壁上的固體殘渣洗下來并促進消化。同時作一空白試驗（除不加樣品外，從消化開始操作完全相同），記錄空白實驗鹽酸溶液用量。蒸餾至吸收液中所加的混合指示劑變?yōu)榫G色開始計時，繼續(xù)蒸餾5分鐘，將冷凝管尖端提離液面再蒸餾1分鐘，用蒸餾水沖洗冷凝管尖端后停止蒸餾。按圖裝好微量定氮裝置，準(zhǔn)確移取消化液l0ml于反應(yīng)管內(nèi)，再加入10ml氫氧化鈉溶液使呈強堿性，用少量蒸餾水洗漏斗數(shù)次，夾好漏斗夾，進行水蒸汽蒸餾。③40%氫氧化鈉溶液 ④濃硫酸 ⑤硫酸鉀 ⑥硫酸銅⑦微量凱氏定氮蒸餾裝置 四、實驗步驟 ～2g（半固體樣品2～5g，液體樣品10～20ml），小心移入干燥潔凈的500ml凱氏燒瓶中，、硫酸鉀10g和濃硫酸20ml，輕輕搖勻后，用電爐以小火加熱，待泡沫停止產(chǎn)生后，加大火力，至液體變藍(lán)綠色透明后，再繼續(xù)加熱微沸30分鐘。①4%硼酸吸收液：20g硼酸（化學(xué)純）溶解于500m1熱水中，搖勻備用。吸收氨后的硼酸再以標(biāo)準(zhǔn)鹽酸或硫酸溶液滴定，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)酸消耗量可計算出蛋白質(zhì)的含量。二、實驗原理 樣品與濃硫酸和催化劑一同加熱消化，使蛋白質(zhì)分解，其中碳和氫被氧化為二氧化碳和水逸出，而樣品中的有機氮轉(zhuǎn)化為氨與硫酸結(jié)合成硫酸銨。