【正文】 無水乙醇稀釋至刻度，搖勻后，、 /mL番茄紅素的蘇丹1號(hào)色素標(biāo)準(zhǔn)溶液。在487nm下測(cè)定消光值，繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線。2．樣品測(cè)定，加入少量無水甲醇，迅速調(diào)勻（防止結(jié)塊），抽提黃色素，過濾。反復(fù)用無水甲醇抽提，直至濾液無色為止（濾液棄去）。換一干燥的25mL容量瓶承接，用甲苯洗滌殘?jiān)?，直至殘?jiān)鼰o色為止。濾液移至50mL容量瓶中，加苯至刻度，搖勻。吸取5mL注入具塞刻度試管中，加苯至20mL，混勻。用甲苯作空白，在最大吸收波長(zhǎng)487nm下測(cè)定消光值，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得相應(yīng)的C值。五、結(jié)果計(jì)算 式中：C——從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得番茄紅素的量，μg /mLm——樣品的重量，g。六、說明合成色素雖較穩(wěn)定，但存放時(shí)間長(zhǎng)的合成色素仍會(huì)有輕微褪色，應(yīng)與標(biāo)準(zhǔn)番茄紅素作對(duì)照，以確定其相應(yīng)濃度。實(shí)驗(yàn)二十二 碘含量測(cè)定（氮仿萃取比色法） 一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?．了解碘含量測(cè)定的原理。2．掌握氯仿萃取比色法測(cè)定碘含量的方法。 二、實(shí)驗(yàn)原理樣品在堿性條件下灰化，碘被有機(jī)物還原成碘離子，碘離子與堿金屬離子結(jié)合成碘化物，該化合物不會(huì)因高溫灰化而使碘升華。碘化物在酸性條件下被重鉻酸鉀氧化析出游離碘，碘溶于氯仿后呈粉紅色，根據(jù)顏色的深淺比色測(cè)定碘的含量。三、實(shí)驗(yàn)儀器與試劑1．儀器 分光光度計(jì)、烘箱、燒杯、容量瓶等。2．試劑①10 mol/L KOH溶液。 ② mol/L K2Cr2O7溶液。③濃硫酸。 ④氯仿。⑤碘標(biāo)準(zhǔn)溶液： 8 g 105℃烘干1h的碘化鉀于燒杯中，加少量水溶解，移入1000mL容量瓶中，加水定容至刻度，此溶液含碘100μg /mL,使用時(shí)稀釋成10μg /mL。 四、實(shí)驗(yàn)步驟：將樣品調(diào)成勻漿狀，稱取2～4g于坩堝中，加入10 mol/L KOH溶液5mL，先在烘箱中烘干后，移入高溫爐中于600℃灰化呈白色灰燼。取出冷卻后加水10mL，加熱溶解，并過濾到50mL容量瓶中，再用30 mL熱水分次洗滌過濾于50 ml容量瓶中，用水定容至刻度。：準(zhǔn)確吸取10μg /, , , , , ml分別置于125 ml分液漏斗中，加水至40 ml， ml濃硫酸， mol/L重鉻酸鉀溶液15 mL，搖勻后靜置30 min，加人氯仿10 mL，振搖1 min，靜置分層后用棉花將氯仿層過濾至1 cm比色皿中，用分光光度計(jì)于510nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。：根據(jù)樣品含碘量的高低，吸取一定量樣液置于125 ml分液漏斗中，以下步驟同標(biāo)準(zhǔn)曲線制作，測(cè)定樣液吸光度，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出相應(yīng)的碘含量。五、結(jié)果計(jì)算 式中：C—在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得的測(cè)定用樣液中的碘量，μg；V—測(cè)定時(shí)吸取樣液的體積，mL； Vo—樣液總體積，mL； m—樣品質(zhì)量，kg。 六、注意事項(xiàng)1．樣品灰化后一定要以熱水分?jǐn)?shù)次洗滌并過濾，以避免碘的損失。2．吸取樣液量要合適，保證其吸光度值盡量在標(biāo)準(zhǔn)曲線內(nèi)。實(shí)驗(yàn)二十三 硒的測(cè)定（熒光法）一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?。二、?shí)驗(yàn)原理樣品經(jīng)混合酸消化后，硒化合物被氧化為四價(jià)無機(jī)硒（Se4+），與2,3二氨基萘(2，3diaminonaphthalene,簡(jiǎn)稱DAN)反應(yīng)生成4，5苯并苤硒腦，其熒光強(qiáng)度與硒的濃度在一定條件下成正比。用環(huán)己烷萃取后于激發(fā)波長(zhǎng)376nm，發(fā)射波長(zhǎng)520nm處測(cè)定熒光強(qiáng)度，與繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線比較定量。 三、實(shí)驗(yàn)儀器與試劑1．儀器 熒光分光光度計(jì)。 2．試劑 （1）環(huán)己烷 （2）硝酸 （3）高氯酸 （4）鹽酸 （5）氫溴酸 （6）鹽酸溶液（1十9) （7）氨水（1＋1） （8）去硒硫酸(5+95)：取5mL去硒硫酸，加于95mL水中。 去硒硫酸：取200mL硫酸，加于200mL水中，再加30mL氫溴酸，混勻，置砂浴上加熱蒸去硒與水至出現(xiàn)濃白煙，此時(shí)體積應(yīng)為200mL。 （9）0. 2mo1/L EDTA溶液：稱取37gEDTA二鈉鹽，加水并加熱溶解，冷卻后稀釋至500mL。 （10）10%鹽酸羥胺溶液 （11）混合酸（硝酸高氯酸）(2＋1） （12）2,3二氨基萘(1gL1，需在暗室中配制）：稱取200mgDAN（純度95％一98％）于一具塞錐形瓶中，加0. lmol/L鹽酸溶液200mL，振搖15min使其全部溶解。加40mL環(huán)己烷，繼續(xù)振搖5min，將此液轉(zhuǎn)人分液漏斗中，待溶液分層后，棄去環(huán)己烷層，收集DAN層溶液。如此用環(huán)己烷純化DAN直至環(huán)己烷中的熒光數(shù)值降至最低時(shí)為止（純化次數(shù)視DAN純度不同而定，一般約需純化34次）。將提純后的DAN貯存于棕色瓶?jī)?nèi)，約加l cm厚的環(huán)己烷覆蓋溶液表面。置冰箱內(nèi)保存。 （13）硒標(biāo)準(zhǔn)貯備液：（光譜純），溶于少量硝酸中，加2mL高氯酸，置沸水浴中加熱34h，再置沸水浴中加熱2min，準(zhǔn)確稀釋至1000mL。此貯備液的濃度為l00μg/mL。 （14）硒標(biāo)準(zhǔn)使用液：將標(biāo)準(zhǔn)貯備液用0. lmol/L鹽酸稀釋至含硒0. 05μg/mL，于冰箱內(nèi)保存。 （15）0. 02%甲酚紅指示劑：稱取50mg甲酚紅溶于水中，加氨水(1+l) 1滴，待甲酚紅完全溶解后加水稀釋至250mL。 （16）EDTA混合液：取0. 2mo1/L EDTA和鹽酸羥胺溶液各5mL，混勻后再加甲酚紅指示劑5mL，用水稀釋至1L。 四、實(shí)驗(yàn)步驟 1．樣品處理及消化 ①糧食 樣品用水洗三次，60℃烘干，用不銹鋼磨磨成粉，貯于塑料瓶中，放一小包樟腦精，密封保存，備用。 ②蔬菜及其他植物性食物 取可食部分用水沖洗三次后用紗布吸去水滴，用不銹鋼刀切碎，取混合均勻的樣品于60℃烘干，稱量、粉碎，備用。 ③稱取0. 5～2. 0 g樣品（含硒量0. 01～0. 5μg)于磨口錐形瓶?jī)?nèi)，加l0mL去硒硫酸，樣品潤(rùn)濕后，再加20mL混合酸放置過夜。次日于砂浴上逐漸加熱，當(dāng)激烈反應(yīng)發(fā)生后（此時(shí)溶液變無色），繼續(xù)加熱至產(chǎn)生白煙，溶液逐漸變?yōu)榈S色即為終點(diǎn)。 2．測(cè)定 于樣品消化液中加20mL EDTA混合液，用氨水(1+l)或鹽酸調(diào)至溶液呈淡紅橙色(～)。以下步驟在暗室中進(jìn)行：加3mL DAN試劑，混勻，置沸水浴中加熱5min，取出立即冷卻，加3mL環(huán)己烷，振搖4min，將全部溶液移入分液漏斗中，待分層后棄去水層，環(huán)己烷層轉(zhuǎn)入具塞試管中，小心勿使環(huán)己烷中混入水滴，于激發(fā)波長(zhǎng)376nm，發(fā)射波長(zhǎng)520nm處測(cè)定苤硒腦的熒光強(qiáng)度。 3．標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 準(zhǔn)確吸取硒標(biāo)準(zhǔn)使用液0、 、4. 0mL，加水至5mL，按樣品測(cè)定步驟進(jìn)行操作，硒含量在0. 5μg以下時(shí)熒光強(qiáng)度與硒含量成線性關(guān)系。在常規(guī)測(cè)定樣品時(shí)，每次只需做試劑空白及與樣品含硒量相近的標(biāo)準(zhǔn)管（雙份）即可。 五、計(jì)算式中 X—樣品中硒的含量，μg/g；A—標(biāo)準(zhǔn)管熒光讀數(shù)；B—空白管熒光讀數(shù)；C—樣品管熒光讀數(shù) S—標(biāo)準(zhǔn)管硒含量，μg 。 m—樣品質(zhì)量，g。實(shí)驗(yàn)二十四 二氧化硫及亞硫酸鹽測(cè)定（鹽酸副玫瑰苯胺比色法）一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?．了解二氧化硫及亞硫酸鹽測(cè)定的原理；2．掌握二氧化硫及亞硫酸鹽測(cè)定的方法。二、實(shí)驗(yàn)原理二氧化硫被四氯汞鈉吸收溶液吸收后，生成穩(wěn)定的絡(luò)合物，絡(luò)合物與甲醛反應(yīng)生成的羥甲基磺酸與鹽酸副玫瑰苯胺作用，并經(jīng)分子重排后，生成紫紅色絡(luò)合物，可比色測(cè)定。三、實(shí)驗(yàn)儀器、材料與試劑 1．儀器：可見光分光光度計(jì)2．試劑 ①四氯汞鈉溶液：稱取氯化高汞（HgCI2） g和氯化鈉（NaCI) g，溶于水并定容至1 000 mL，放置過夜，過濾后使用。 ②顯色劑：鹽酸副玫瑰苯胺100 mg，置于200 mL水中溶解，加40 mL濃鹽酸，定容至500 mL。 ③2%甲醛溶液：吸取37%～40%甲醛5 mL，置于水中并稀釋至100 mL。④蛋白質(zhì)沉淀劑：飽和硼砂溶液：溶解約25 g硼砂于500 mL水中。硫酸鋅溶液：溶解150 g硫酸鋅于500 mL水中。 ⑤二氧化硫標(biāo)準(zhǔn)溶液： g亞硫酸氫鈉溶于200 mL四氯汞鈉吸收液中，放置過夜，上清液用定量濾紙過濾備用。標(biāo)定： 取10 mL二氧化硫標(biāo)準(zhǔn)溶液，置于250 mL碘量瓶中，加水100mL， mol/L碘溶液20 mL，冰醋酸5 mL，搖勻， mol/L的硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至淡黃色，加入1％淀粉指示劑5～6滴，繼續(xù)滴至無色。空白試驗(yàn)是在250 mL碘量瓶中加水100 mL后按上述步驟操作。 計(jì)算： 式中：V1—空白消耗硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液體積，mL；V2—標(biāo)準(zhǔn)消耗硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積，mL；C—硫代硫酸鈉溶液濃度，mol/L； —每毫升 mol/L硫代硫酸鈉溶液相當(dāng)于二氧化硫的量。根據(jù)計(jì)算結(jié)果，將二氧化硫標(biāo)準(zhǔn)用吸收液稀釋成2μg/ mL二氧化硫標(biāo)準(zhǔn)溶液。此使用液于4℃冰箱中保存，可供1周使用。四、操作步驟 1．樣品處理：稱取搗碎均勻的樣品10～20 g（視二氧化硫含量而定），加人飽和硼砂溶液5 mL，硫酸鋅2 mL，攪拌均勻，移入100 mL容量瓶中，用水定容，放置澄清，過濾，濾液待用。 2．標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：吸取2μg/ ，, ，, mL，置于25 mL具塞比色管中，分別加入四氯汞鈉吸收液使體積達(dá)10 mL，再加入2％甲醛溶液1 mL，顯色劑1 mL，搖勻，放置20 min，于580 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。 3．樣品測(cè)定：～5 mL（視二氧化硫含量而定）置于25 mL具塞比色管中，以下按標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制操作，根據(jù)測(cè)得的吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得相應(yīng)的二氧化硫含量。五、結(jié)果計(jì)算式中：C—樣品處理液中SO2的含量，μg；V1—測(cè)定用樣品的體積，mL；V2—樣液總體積，mL；m—樣品的質(zhì)量，g。實(shí)驗(yàn)二十五 亞硝酸鹽的測(cè)定 （鹽酸萘乙二胺法）一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?．了解亞硝酸鹽測(cè)定的原理和意義。2．掌握亞硝酸鹽測(cè)定的方法。二、實(shí)驗(yàn)原理亞硝酸鹽在酸性條件下，與對(duì)氨基苯磺酸（ S03H）發(fā)生重氮化反應(yīng)生成重氮鹽，此重氮鹽再與鹽酸萘乙二胺發(fā)生偶合反應(yīng)，生成紫紅色偶氮化合物。其顏色深淺與亞硝酸含量成正比，故可比色測(cè)定。三、實(shí)驗(yàn)儀器與試劑 1． 儀器 分光光度計(jì)、組織搗碎機(jī)。2．試劑①飽和硼砂溶液：5g硼酸鈉（Na2B4O710H2O)溶于100 mL熱的重蒸水中，冷卻備用。 ②亞鐵氰化鉀溶液：稱取106 g亞鐵氰化鉀溶于水，并稀釋至1000 mL。 ③乙酸鋅溶液：稱取220 g乙酸鋅，加30 mL冰醋酸溶于水，并稀釋至1000mL。 ④果蔬抽提液：溶解50 g氯化汞（HgCl2）和50 g氯化鋇（BaC12）于1000 mL重蒸水中，用濃鹽酸調(diào)整pH值為1。 ⑤氫氧化鋁乳液：溶解125 g硫酸鋁于1000 mL重蒸水中，滴加氨水使氫氧化鋁全部沉淀（使溶液呈微堿性）。用蒸餾水反復(fù)洗滌，真空抽濾，直至洗液分別用氯化鋇、硝酸銀溶液檢驗(yàn)不發(fā)生混濁。取下沉淀物，加適量重蒸水使之呈薄糊狀，攪拌均勻備用。 ⑥0．4%對(duì)氨基苯磺酸溶液： g對(duì)氨基苯磺酸，溶于100 mL 20%的鹽酸溶液中，避光保存。⑦%鹽酸萘乙二胺溶液： g鹽酸萘乙二胺，溶于100 mL重蒸水中。⑧亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液(5μg/mL)： g亞硝酸鈉（優(yōu)級(jí)純），以重蒸水定容到500 mL。再吸取此溶液25 mL，以重蒸水定容到1 000 mL，此工作液每毫升含亞硝酸鈉5μg。 四、實(shí)驗(yàn)步驟 1．樣品處理： （紅燒類除外）稱取經(jīng)攪拌混合均勻的樣品5g于50 mL燒杯中， mL,以玻璃棒攪拌，然后以70℃左右的重蒸水300 mL，將其沖洗入500 mL容量瓶，置沸水浴中加熱15min，取出，加入5 mL亞鐵氰化鉀溶液，搖勻，再加5 mL乙酸鋅溶液，以沉淀蛋白質(zhì)。冷卻到室溫后用重蒸水定容到刻度，搖勻，放置片刻，除去上層脂肪，清液用濾紙過濾，濾液必須清澈，供測(cè)定用。 樣品用組織搗碎機(jī)打漿。稱取適量漿液（視試樣中硝酸鹽含量而定，如青刀豆取10 g,桃子、菠蘿取30 g），置于500mL容量瓶中。加200 mL水，搖勻，再加100 mL果蔬抽提液（如濾液有白色懸浮液，可適當(dāng)減少）。振搖1h， mol/L氫氧化鈉溶液40 mL，用重蒸水定容后立即過濾。然后取60 mL濾液于100 mL容量瓶中，加氫氧化鋁乳液至刻度。用濾紙過濾，濾液應(yīng)無色透明。 2．亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：精確吸取亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)液(5μg/mL) ，，，， mL（各含0，1，3，4，5，10，）于一組50 mL容量瓶中，各加水至25 mL，分別加2 %對(duì)氨基苯磺酸溶液，搖勻。靜置3～5 min后，加入1 mL %鹽酸萘乙胺溶液，并用重蒸水定容到50 mL，搖勻，靜置15 min后，用20mm比色皿，在540 nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度，以蒸餾水為空白。以測(cè)得的各比色液的吸光度對(duì)應(yīng)的亞硝酸濃度作曲線。 3．亞硝酸鹽的測(cè)定：取40 mL待測(cè)樣液于50 mL容量瓶中，加2 mL %對(duì)氨基苯磺酸溶液，搖勻。靜置3一5 min后，加入 1mL ％鹽酸萘乙胺溶液，比色測(cè)定，記錄吸光度。從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得相應(yīng)的亞硝酸鈉濃度。μg/mL），計(jì)算試樣中亞硝酸鹽（以亞硝酸鈉計(jì)）的含量。 五、結(jié)果計(jì)算1．肉制品中亞硝酸鹽含量： 式中：X—測(cè)得的吸光度值在標(biāo)準(zhǔn)曲線上對(duì)應(yīng)的亞硝酸鈉質(zhì)量濃