熒光定量pcr的原理及使用(編輯修改稿)
2025-07-22 03:39 本頁面
【文章內容簡介】 an探針的熒光信號產(chǎn)生機制根據(jù)其3′端標記的熒光淬滅基團的不同分為兩種：普通的TaqMan探針和TaqMan MGB探針。MGB探針的淬滅基團采用非熒光淬滅基團(NonFluorescentQuencher)，本身不產(chǎn)生熒光，可以大大降低本底信號的強度。同時探針上還連接有MGB(MinorGrooveBinder)修飾基團，可以將探針的Tm值提高10176。C左右。因此為了獲得同樣的Tm值，MGB探針可以比普通TaqMan探針設計得更短，既降低了合成成本，也使得探針設計的成功率大為提高。因為在模板的DNA堿基組成不理想的情況下，短的探針比長的更容易設計。實驗證明，TaqManMGB探針對于富含A/T的模板可以區(qū)分得更為理想?！ aqManMGB探針探針設計一般應符合以下條件：探針長度應在20~40個堿基左右，以保證結合的特異性。G、C堿基含量在40％60％，避免單核苷酸序列的重復。避免與引物發(fā)生雜交或重疊。探針與模板結合的穩(wěn)定程度要大于引物與模板結合的穩(wěn)定程度，因此探針的Tm值要比引物的Tm值至少高出5℃。 分子信標技術分子信標技術（molecularbeacon）也是在同一探針的兩末端分別標記熒光分子和淬滅分子，與TaqMan探針不同的是該探針5′和3′末端自身可形成一個8個堿基左右的發(fā)卡結構，此時熒光分子和淬滅分子鄰近，因此不會產(chǎn)生熒光。當溶
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