李帥論文10526(編輯修改稿)
2025-07-19 22:07 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 0 mM Tris），輕輕混勻，再用清水沖洗兩次，然后放入小型塑料籃中。孵化過程中的水溫9～12℃，并用循環(huán)水泵進(jìn)行淋水增氧。將4天后達(dá)到發(fā)眼階段的卵子視為受精卵，并按以下公式進(jìn)行受精率的計算。受精率（%）= 受精卵/卵子總數(shù)100。相對受精率（%）= 凍精受精率/鮮精受精率100。 苗種培育對利用鮮精和第Ⅲ組凍精繁殖的魚苗進(jìn)行生長對比試驗。試驗在同一水泥池中的6個不同網(wǎng)箱中進(jìn)行，培育水溫為1116℃，定時開動增氧機(jī)，每天投喂23次，適時進(jìn)行水質(zhì)調(diào)節(jié)和消毒處理。經(jīng)24天的培育后進(jìn)行成活率的計數(shù)、體重、體長的測定。 數(shù)據(jù)分析，數(shù)據(jù)用平均值177。SD表示，均數(shù)的比較采用OneWay ANOVA 分析法，P 。2 結(jié)果與分析 l 甲醇添加水平對凍精精子活率的影響將精子懸液與伊紅染液進(jìn)行混合后的鏡檢結(jié)果如表1所示。從統(tǒng)計結(jié)果可以看出，隨著甲醇添加水平的提高，凍精的相對精子活率也在提高，但當(dāng)添加到15%時，精子活率反而明顯下降，其中加入10%甲醇的凍精得了最高的精子活率，與其它三個添加水平的凍精都有顯著性的差異。 甲醇添加水平對凍精相對受精率的影響經(jīng)過4天的培育，卵子達(dá)到發(fā)眼期，4個實驗組和1個對照組的相對受精率測定結(jié)果如表1所示。從結(jié)果可以看出，隨著甲醇添加水平的提高，凍精相對受精率也在提高，但當(dāng)添加到15%時，受精率反而下降，其中加入10%甲醇的凍精得了最高的相對受精率，但各組之間的差異未達(dá)到顯著性差異水平。表1 四種精液稀釋液對白斑狗魚凍精精子活率、受精卵受精率的影響精液稀釋液 相對精子活率（%） 相對受精率（%）Ⅰ +0%甲醇+10%蛋黃+ g/LKCl177。177。Ⅱ+5%甲醇+10%蛋黃+ g/LKCl177。177。Ⅲ +10%甲醇+10%蛋黃+ g/LKCl177。177。Ⅳ +15%甲醇+10%蛋黃+ g/LKCl177。177。,注：平均值后相同字母表示差異不顯著，（P ） 10%甲醇稀釋液凍精繁殖苗種生長性狀用鮮精和第Ⅲ組凍精繁殖的魚苗經(jīng)過24天的飼養(yǎng)，對其成活率、體重和體長的分析結(jié)果見表2。從表2可知，加10%甲醇稀釋液的白斑狗魚凍精繁殖的魚苗與對照組之間在成活率、體重和體長方面基本一致，都沒有顯著性差異。表2 白斑狗魚凍精受精卵孵化出的苗種生長情況組別成活率（%）體重（g）體長（cm）Ⅲ +10%甲醇+10%蛋黃+ g/LKCl177。 a177。 a177。 a對照組177。 a177。 a177。 a注：平均值后相同字母表示差異不顯著，（P ，n=3）3 討論 白斑狗魚的精液冷凍保護(hù)劑的選擇魚類精子保存主要有低溫、常溫和冷凍三種，其中超低溫冷凍保存是從上世紀(jì)50年代開始的。就目前而言，國內(nèi)外廣泛采用液氮（沸點196℃）通過超低溫使精子的代謝停滯，精子處于假死狀態(tài)，但其結(jié)構(gòu)卻能保持完整，以此來達(dá)到長期保存精液的目的。目前，常用的冷凍保護(hù)劑主要有二甲亞砜、甲醇、乙二醇和甘油等。近年來大量的研究表明甲醇是一種更為有效的冷凍保護(hù)劑，在對四種歐洲鯉科魚類、大西洋鮭和里海斑鱒精液的研究表明10%甲醇的保護(hù)效果都優(yōu)于5%或10%的DMSO的效果[3,4]。本研究表明甲醇10%的添加效果要顯著優(yōu)于0，5，15%的添加效果，具有與鮮精相似的受精率。 甲醇添加水平對凍精精子活率和受精率的影響精子膜是精子最外層的細(xì)胞結(jié)構(gòu), 對于細(xì)胞內(nèi)外環(huán)境起著重要的生理屏障作用，也是精子在冷凍保存時最易損傷的部位，其完整性是精子維持正常功能的基本保障[24 ]。精子活率的測定正是基于膜的完整性而進(jìn)行的一項重要的精液品質(zhì)評價指標(biāo)，針對細(xì)胞膜完整性的染色劑中以伊紅和PI最為常用[78]。 本實驗采用伊紅進(jìn)行染色，不但染色后能明顯區(qū)分死、活精子，而且可以在光學(xué)顯微鏡下進(jìn)行測定，操作簡便、直觀[111]。本實驗研究結(jié)果表明，甲醇10%的添加取得最優(yōu)的效果，精子活率顯著在高于其它三個添加水平，這提示采用10%的添加水平，對白斑狗魚膜的完整性來說是保護(hù)性最強(qiáng)的。本實驗中添加10%甲醇的受精率要比其他幾組相對較高，雖然差異未達(dá)到顯著性差異水平。這個結(jié)果與精子活率的檢測結(jié)果是基本一致的，這也說明精子活率越高，膜的完整性越強(qiáng)，受精率相應(yīng)地也就越高。 含10%甲醇稀釋液的凍精所繁殖苗種的生長情況 關(guān)于魚類精液冷凍保存技術(shù)的研究，除了在對稀釋液的配制、降溫平衡、冷凍保存方法以及冷
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