放射免疫分析技術(shù)(編輯修改稿)
2025-07-18 22:14 本頁面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 。 分離劑的選擇有, PEG( 聚乙二醇) , 第二抗體等。現(xiàn)在一般采用的是: 第二抗體與PEG 合用的方法, 稱為雙抗體 PEG 法。PEG 原理: PEG 濃度達(dá)到7% 9%時(shí)能使抗原 抗體復(fù)合物沉淀。優(yōu)點(diǎn): 經(jīng)濟(jì), 簡(jiǎn)便, 通用。缺點(diǎn): 重復(fù)性差, 非特異性結(jié)合率高。第二抗體: 第一抗體是可與被測(cè)抗原進(jìn)行特異結(jié)合的抗體, 來自家兔或豚鼠。用第一抗體為抗原, 作用到羊, 馬身上,產(chǎn)生的抗第一抗體的抗體稱第二抗體。第二抗體與第一抗體在適當(dāng)條件下發(fā)生特異性結(jié)合, 生成分子量很大的免疫復(fù)合物( AgAb1 Ab2 ) , 能自然沉淀。優(yōu)點(diǎn): 分離效果好，非特異性結(jié)合率低。缺點(diǎn): 增加經(jīng)費(fèi)投入，需要第二次溫育, 延長(zhǎng)了時(shí)間。所以就產(chǎn)生了兩者合用的雙抗體 PEG 法, 它結(jié)合了上述兩種方法的優(yōu)點(diǎn)。, 又稱免疫放射分析( IRMA)1968年Miles和Hales建立了利用核素標(biāo)記的抗體檢測(cè)抗原的放射分析法，為了與放射免疫分析區(qū)別，故稱免疫放射分析技術(shù)(immunoradiometric assay，IRMA)。主要特點(diǎn): 標(biāo)記的是抗體。按反應(yīng)原理分為兩種: 單位點(diǎn)IRMA, 其原理: 抗原只有一個(gè)抗原決定簇, 所測(cè)的抗原為小分子抗原, * Ab+ AgAg* Ab + * Ab+ ImAdAg ImAdAg*Ab+ Ag* Ab ( 去除) ( 負(fù)相關(guān)) : ( ImAdAg) 固相抗原免疫吸附劑, 一般用聚苯乙烯塑料珠包被抗原。 雙位點(diǎn)IRMA: 抗原有兩個(gè)抗原決定簇, 所使用的兩種亞型抗體在與同一抗原分子結(jié)合時(shí)互不干擾ImAdAb+ Ag ImAdAbAg+ * AbImAdAbAg * Ab+ * Ab( 過剩的, 游離的) : ( ImAdAb) 固相抗體免疫吸附劑, 一般用聚苯乙烯塑料珠包被抗體雙位點(diǎn)IRM A,又稱雙抗體夾心法, 從加樣測(cè)定順序上看, 有三種方法: 固相抗體先與未知抗原結(jié)合, 再與標(biāo)記抗體結(jié)合( 正向兩步法) 。然后去除游離的標(biāo)記抗體, 測(cè)固相抗體 抗原 標(biāo)記抗體復(fù)合物的放射性計(jì)數(shù)。 未知抗原先與標(biāo)記抗體結(jié)合, 再與固相抗體結(jié)合( 反向兩步法) 。然后去除游離的標(biāo)記抗體, 測(cè)固相抗體抗原 標(biāo)記抗體復(fù)合物的放射性計(jì)數(shù)。 未知抗原與固相抗體和標(biāo)記抗體同時(shí)反應(yīng)( 一步法, 又稱同時(shí)加樣法) 。然后去除游離的標(biāo)記抗體, 測(cè)固相抗體 抗原 標(biāo)記抗體復(fù)
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