免疫學(xué)檢測(cè)與免疫學(xué)技術(shù)(編輯修改稿)
2024-10-27 15:05 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 斑點(diǎn)雜交 、 原位雜交等以及 PCR技術(shù)等 。 ? 雜交技術(shù)主要工具是核酸探針 ， 它是指一段用放射性核素或其他標(biāo)記物 (生物素 、 熒光素 、地高辛等 )標(biāo)記 ， 并與目的基因互補(bǔ)的 DNA片段或單鏈 DNA、 RNA。 分為 cDNA探針 、 寡核苷酸探針 、 基因組 DNA探針及 RNA探針等 。 ? *核酸探針技術(shù)的操作主要包括： ① 質(zhì)粒 DNA的提??； ② 靶 DNA片段的分離； ③ 靶 DNA片段的標(biāo)記； ④ 待測(cè)樣品 mRNA的提?。?⑤ 標(biāo)記cDNA探針與待測(cè)樣品進(jìn)行雜交； ⑥ 放射自顯影或顯色分析 。 ? (一 )細(xì)胞因子基因組 DNA或 mRNA的檢測(cè) ? 1. Northern雜交分析 2. 斑點(diǎn)雜交法 3. 原位雜交法 4. PCR擴(kuò)增產(chǎn)物雜交分析 是將細(xì)胞因子的mRNA經(jīng)過(guò)逆轉(zhuǎn)錄為 cDNA， 用特異性細(xì)胞因子引物進(jìn)行 PCR擴(kuò)增 ， 通過(guò) Southern blot后 ，再用標(biāo)記探針檢測(cè)特異細(xì)胞因子 DNA的水平 。 5． Southern印跡雜交 6. 斑點(diǎn)及狹縫印跡雜交 : 將 DNA變性后直接點(diǎn)樣于硝酸纖維膜上再進(jìn)行雜交 7. 細(xì)胞因子 mRNA表達(dá)的測(cè)定還可采用RTPCR、原位雜交與原位 PCR,RNA半壽期的檢測(cè) ,進(jìn)行中的轉(zhuǎn)錄分析等。 ? (二 )BCR及 TCR克隆性基因重排分析 ? 1． Southern印跡雜交法：僅適用于科研 ，而不適用于臨床診斷 。 ? 2. PCR擴(kuò)增技術(shù) :正常多克隆淋巴細(xì)胞群DNA的擴(kuò)增產(chǎn)物含有不同長(zhǎng)度的片段 ， 電泳檢查呈現(xiàn)彌漫涂片狀結(jié)構(gòu)或多條帶 。 而單克隆性基因重排經(jīng) PCR擴(kuò)增后 ， 產(chǎn)生明顯相同長(zhǎng)度的片段 ， 電泳呈現(xiàn)單一緊密折帶狀結(jié)構(gòu) ? *應(yīng)用 PCR 擴(kuò)增技術(shù)進(jìn)行基因診斷具有特異 、 敏感 (1/104~1/105克隆性細(xì)胞 )、 快速(24h可完成 )等優(yōu)點(diǎn) 。 ? *用于惡性淋巴瘤和白血病等的臨床診斷以及白血病治療后微小殘留病灶的檢測(cè)。 ? (三 )HLA基因分型技術(shù) ? 1． 序列特異性寡核苷酸探針 PCR(PCRSSOP)或 PCRASO:PCRSSOP是目前應(yīng)用最多的一種簡(jiǎn)單 、 快速而又精確的 HLAⅡ 類抗原分型方法 ， 能鑒定所有已知序列的 HLADR、 DQ、DP等位基因 ， 精確地分析 DNA的多態(tài)性 。 ? 2． 限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性 (PCRRFLP)技術(shù)：此項(xiàng)技術(shù)特別適用于個(gè)別標(biāo)本和小樣本的檢測(cè) 。 ? 3． 單鏈構(gòu)象多態(tài)性 PCR（ PCRSSCP） ：藉此可鑒別編碼 HLAⅡ 類抗原基因的多態(tài)性 。 ? 應(yīng)用 PCRSSCP可以直接比較供 、 受體之間HLAⅡ 類基因是否完全一致 ， 且可精確到 1?2個(gè)堿基之差 ， 具有相對(duì)簡(jiǎn)捷而精確的特點(diǎn) 。 在異基因骨髓移植的配型中已初步應(yīng)用于臨床 。 ? 4． 序列特異性引物 PCR技術(shù) (PCRSSP)：該法操作簡(jiǎn)單 、 快速 、 實(shí)驗(yàn)結(jié)果容易判斷 ， 雜合子也很易檢出 。 不足之處在于 ， 為檢出所有的等位基因必須用多個(gè)引物進(jìn)行擴(kuò)增 。 ? 5． 指紋圖譜 (PCRfingerprinting)技術(shù) |：進(jìn)行 HLA基因分型鑒定時(shí) ， 將供 、 受體的 DNA擴(kuò)增產(chǎn)物混合 ， 電泳后得出一指紋圖 ， 再與二者各自的 PCR指紋圖譜進(jìn)行比較 ， 從中選擇出指紋圖一致的供 、 受體進(jìn)行移植 。 ? *PCR指紋圖譜在選擇非親緣關(guān)系的供 、 受體進(jìn)行骨髓和器官移植配型時(shí) ， 可以節(jié)省大量時(shí)間 。 ? 6. SNP(單個(gè)核苷酸多態(tài)性 )分析 ? (四 )補(bǔ)體基因分析 ? (五 )抗體基因分析 ? (六 )細(xì)胞膜分子基因分析 七、免疫標(biāo)記技術(shù) ? (一 )免疫熒光技術(shù) (二 )放射免疫分析法 ? (三 )酶免疫技術(shù) (四 )發(fā)光免疫測(cè)定 八、免疫 PCR(IMPCR)技術(shù) ? 免疫 PCR是將抗原抗體的特異性反應(yīng)與PCR技術(shù)結(jié)合起來(lái) ,用以檢測(cè)微量蛋白質(zhì)的方法 。 免疫 PCR是用 DNA分子標(biāo)記特異性抗體 ，利用 PCR可大量擴(kuò)增 DNA片段的特點(diǎn) ， 從而將檢測(cè)靈敏度大大提高 ， 最低檢測(cè)值可達(dá) 1021mol/L。 ? 1. 直接免疫 PCR 是將抗原包被在固相載體上 ,用特異性單抗結(jié)合此抗原 ,再用生物素化抗體通過(guò)親合素連接生物素化 DNA,然后將后者進(jìn)行 PCR ? 2. 間接免疫 PCR 系將所測(cè)物的單抗包被在固相載體上 ,
環(huán)評(píng)公示相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號(hào)-1